張赟健 丁一峰 王 藝 周水珍

1 方法

1.4 基因檢測 在取得患兒父母的知情同意后，采集家系外周靜脈血。采用miniblood全血試劑盒(QIAGEN公司，德國)提取基因組DNA, NanoDroop 2000(Thermofisher公司，美國)紫外分光光度儀測定其濃度?；贗llumina Hiseq2000/2500平臺進行序列檢測。測序覆蓋度>98%，平均測序深度>100×。ACMG發(fā)布的《序列變異解讀標(biāo)準(zhǔn)和指南》進行分類。

2 結(jié)果

均存在精神運動發(fā)育遲緩，2例輕度，3例中度；語言發(fā)育落后為其突出特征，其中例3無語言交流，眼神交流差，存在孤獨癥譜系障礙(ASD)樣表現(xiàn)。例1和3在驚厥起病前即存在精神運動發(fā)育遲緩。

均在末次隨訪時存在認知障礙。

2.2 腦電圖和MR表現(xiàn) 例2、4和5病程中腦電圖背景活動減慢；5例腦電圖發(fā)作間期廣泛性棘慢波、多棘慢波發(fā)放，3例伴局灶性或多灶性異常放電。例1局灶性異常放電者為左側(cè)顳區(qū)異常放電，多灶性異常放電者主要為顳區(qū)、頂區(qū)及枕區(qū)異常放電。

均隨訪MR，例3雙側(cè)腦室略飽滿，例2為髓鞘化不良，3例未見異常。

2.3 基因表型 表1顯示，SLC6A1基因均為雜合新生變異，例1為c.370+1G>T，位于經(jīng)典的剪切位；例2為c.1485G>A (p.W495X)，為無義變異，導(dǎo)致第495位色氨酸變?yōu)榻K止密碼子，使肽鏈合成提前終止，蛋白質(zhì)功能受到影響；例3為c.1379T>G (p.L460R)，例4為c.1084G>A (p.G362R)，例5為c.1648G>A (p.G550R)，例3～5均為錯義變異，物種保守性分析顯示第460、362及550位氨基酸在不同物種間高度保守，分別用SIFT、PolyPhen-2、MutationTaster和PROVEAN軟件對這3種錯義變異進行蛋白功能預(yù)測，顯示均為有害變異。例2和3的基因變異位點均為尚未見報道的新變異位點。

3 討論

文獻復(fù)習(xí)及數(shù)據(jù)庫檢索顯示，目前報道98種SLC6A1基因變異，其中錯義變異最常見，其次為無義變異、剪接變異及片段缺失或插入，1例染色體易位。截短突變由于蛋白質(zhì)翻譯提前終止，可導(dǎo)致GAT-1功能喪失；而錯義變異對蛋白質(zhì)功能的影響，取決于位點所處的不同結(jié)構(gòu)功能域。GAT-1蛋白具有12個跨膜結(jié)構(gòu)域(TM1～TM12)。Goodspeed等[20]報道SLC6A1基因變異中36.4%位于跨膜結(jié)構(gòu)域，47.8%位于不同跨膜域間鏈接區(qū)。本研究對截止至2021年4月HGMD數(shù)據(jù)庫收錄的錯義變異位點進行總結(jié)，發(fā)現(xiàn)胞外結(jié)構(gòu)域EC3-4和跨膜區(qū)TM7是致病性錯義變異致氨基酸改變的集中區(qū)域。文獻報道TM3和TM4間親水性胞外結(jié)構(gòu)域中存在糖基化功能區(qū)，該區(qū)域功能變化與GABA重攝取活性密切相關(guān)[35]，提示本文中EC3-4區(qū)域致病變異位點數(shù)明顯高于其他區(qū)域，可能與其糖基化功能相關(guān)。GAT-1跨膜結(jié)構(gòu)域主要參與形成結(jié)合底物及離子共轉(zhuǎn)運的孔道，而胞外結(jié)構(gòu)域也是底物結(jié)合的重要位置[35]，因此這些區(qū)域位點的變異具有重要的臨床意義。

本文5例SLC6A1基因變異患兒中3例錯義變異、1例無義變異、1例剪接變異。Mattison等[19]使用放射性[3H]-GABA轉(zhuǎn)運測定法對7例SLC6A1基因變異所致GABA轉(zhuǎn)運蛋白突變體活性進行測定，發(fā)現(xiàn)與野生型相比，這些變異的轉(zhuǎn)運蛋白殘留活性為0～27%。SLC6A1基因變異導(dǎo)致GABA轉(zhuǎn)運體功能喪失，影響GABA的重攝取，進而使得細胞外GABA不能正常進入突觸前終端[23]。本文5種SLC6A1基因變異位點中2種為此前未見報道的新變異，豐富了該基因的變異譜。

SLC6A1基因變異患兒腦電圖異常主要表現(xiàn)為廣泛性棘慢波發(fā)放。Johannesen等[9]報道39%的SLC6A1基因變異患兒腦電圖背景活動減慢，也有部分病例表現(xiàn)為局灶性異常放電。本文中3例患兒背景活動減慢，5例發(fā)作間期腦電圖均可見廣泛性棘慢波、多棘慢波發(fā)放，3例可見局灶性或多灶性異常放電。Carvill等[4]報道7例SLC6A1基因變異者中6例神經(jīng)影像學(xué)檢查無明顯異常，1例髓鞘化延遲。另有報道19例有神經(jīng)影像學(xué)資料的SLC6A1基因變異患兒，其中14例無明顯異常，5例表現(xiàn)為腦外間隙增寬等非特異性異常[9]。本文中3例患兒影像學(xué)未見明顯異常，1例雙側(cè)腦室略飽滿，1例為髓鞘化延遲。