殷 鑫，朱蔚芊，周永強(qiáng)，魏 鑫，胡瑞航，周 英，俸婷婷

? 化學(xué)成分 ?

薏苡仁中1個(gè)新的生物堿類化合物

殷 鑫，朱蔚芊，周永強(qiáng)，魏 鑫，胡瑞航，周 英，俸婷婷*

貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025

研究禾本科植物薏苡的種仁（薏苡仁）非脂溶性部位的化學(xué)成分。運(yùn)用正相硅膠、反相ODS及半制備型高效液相色譜技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化，并結(jié)合多種波譜方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。從薏苡仁正丁醇部位分離得到5個(gè)生物堿類化合物，分別鑒定為(2)-2--(β--glucopyranosyl-(1→6)-β--glucopyranosyl)-7-methoxy- 1,4(2)-benzoxazin-3-one（1）、methyl dioxindole-3-acetate（2）、(3)-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸（3）、cordysinin B（4）、色氨酸（5）?；衔?為未見文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，命名為薏苡仁苷C（coixlachryside C），化合物3和4為首次從薏苡屬植物中分離得到。

禾本科；薏苡仁；薏苡仁苷C；生物堿；(3)-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸；cordysinin B

薏苡仁為禾本科植物薏苡L.的干燥成熟種仁，又稱薏仁、薏米，在我國(guó)各個(gè)地區(qū)廣泛種植，是一種常見的藥食兩用中藥[1]。2002年衛(wèi)生部頒布了84種藥食兩用的藥物，薏苡仁就是其中之一[2]。據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版記載，薏苡仁性涼，味甘、淡，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有利水滲濕、健脾止瀉、除痹排膿、解毒散結(jié)之功效，主治水腫、腳氣、小便不利、脾虛泄瀉等疾病[3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，薏苡仁具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化及治療糖尿病等作用，尤其在抗腫瘤作用方面療效顯著，臨床上以薏苡仁揮發(fā)油為主要原料的康萊特注射液已廣泛用于癌癥的治療[4-8]。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)于薏苡仁的研究主要集中于其揮發(fā)油組分，而對(duì)于其非脂溶性部位的化學(xué)成分研究甚少。為進(jìn)一步開發(fā)利用薏苡仁，更好地提供其藥用價(jià)值理論依據(jù)，本研究對(duì)薏苡仁甲醇提取物的正丁醇萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，從中分離得到5個(gè)生物堿類化合物，分別鑒定為(2)-2--(β--glucopyranosyl-(1→6)-β--glucopyranosyl)-7-methoxy-1,4(2)-benzoxazin- 3-one（1）、methyl dioxindole-3-acetate（2）、(3)- 1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸 [(3)-1,2,3,4-tetrahydro-β- carboline-3-carboxylic-acid，3]、cordysinin B（4）、色氨酸（tryptophan，5），其中化合物1為未見文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，命名為薏苡仁苷C（coixlachryside C）；化合物3和4為首次從薏苡屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker DPX-400型核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker公司）；半制備型HPLC高效液相色譜儀（日本島津公司）；SunFire C18半制備型高效液相色譜柱（Waters公司）；柱色譜硅膠（200～300目，青島海洋化工廠）；ODS色譜填料（日本YMC公司）；有機(jī)試劑均為天津富宇精細(xì)化工有限公司生產(chǎn)。

薏苡仁98 kg，于2020年3月從貴州省凱里市藥材市場(chǎng)采購(gòu)，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院魏升華教授鑒定為植物薏苡L.的種子，樣本（20200310）保存于貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院標(biāo)本館。

2 方法

2.1 提取與分離

薏苡仁98 kg，5倍量甲醇回流提取2次，每次2 h，濾過合并濾液，減壓回收溶劑（40℃）得浸膏。浸膏經(jīng)水分散，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得各萃取部位。取正丁醇萃取部位（300 g），經(jīng)硅膠柱色譜（200～300目），依次用二氯甲烷與甲醇（1∶0～0∶1）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢視合并相同流分，得9個(gè)組分（A1～A9）。A3（12 g）經(jīng)ODS柱色譜，依次用甲醇與水（0∶1～1∶0）梯度洗脫，后經(jīng)半制備型HPLC高效液相色譜分離，流動(dòng)相為甲醇-水（38∶62），得到化合物2（3.0 mg，R＝16.2 min）與4（4.0 mg，R＝19.8 min）。A7（21g）經(jīng)ODS柱色譜，依次用甲醇-水（1∶0～0∶1）梯度洗脫，后經(jīng)半制備型HPLC高效液相色譜分離，流動(dòng)相甲醇-水（31∶69）得到化合物5（22.6 mg，R＝12.9 min）、1（24.4 mg，R＝17.4 min）、3（3.6 mg，R＝19.8 min）。

2.2 化合物1的酸水解

取化合物1（2.0 mg），根據(jù)之前文獻(xiàn)報(bào)道的方法進(jìn)行酸水解[9-10]，分離正己烷層得到衍生化后的產(chǎn)物，通過氣相色譜分析衍生物與-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間，確定葡萄糖的絕對(duì)構(gòu)型。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

1H-NMR譜中顯示1組典型的ABX偶合系統(tǒng)H6.84 (1H, d,= 8.7 Hz), 6.59 (1H, dd,= 8.7, 2.6 Hz), 6.72 (1H, d,= 2.6 Hz)；1個(gè)縮醛質(zhì)子信號(hào)H5.73 (1H, s)；2組端基質(zhì)子信號(hào)H4.67 (1H, d,= 7.8 Hz), 4.46 (1H, d,= 7.8 Hz) 以及1個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)3.76 (3H, s)。13C-NMR譜中顯示該化合物具有21個(gè)碳信號(hào)，包括1組苯環(huán)碳信號(hào)C117.3, 109.8, 158.1, 105.0, 143.0, 120.5；1個(gè)酯羰基碳信號(hào)C162.7；1個(gè)縮醛碳信號(hào)C97.0；1個(gè)甲氧基碳信號(hào)：56.3；以及2組糖基信號(hào)C104.3, 74.8, 77.7, 71.0, 77.6, 69.8；C104.9, 75.2, 77.8, 71.6, 78.0, 62.7。以上特征性核磁信號(hào)提示化合物1具有苯并噁嗪類骨架[11]，同時(shí)連有2組糖基?；衔?經(jīng)酸水解并通過對(duì)比衍生化產(chǎn)物與標(biāo)準(zhǔn)品在氣相色譜中的保留時(shí)間，確定化合物1中只含有-葡萄糖，由此可確定化合物1中連接的2個(gè)糖均為-葡萄糖，并根據(jù)端基質(zhì)子的偶合常數(shù)可確定其相對(duì)構(gòu)型均為β構(gòu)型。

通過與已知化合物coixlachryside B對(duì)比發(fā)現(xiàn)，化合物1苷元部分的核磁數(shù)據(jù)與coixlachryside B基本一致，主要區(qū)別在于比化合物1比coixlachryside B多出1組葡萄糖基碳?xì)湫盘?hào)[11]。通過HMBC譜確定化合物1中糖的連接位置及連接順序。在HMBC譜中，可以看到H4.67 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1′) 與C97.0 (C-2) 相關(guān)，證實(shí)葡萄糖基Glc′連接在苷元的C-2位；H4.46 (1H, d,= 7.8 Hz，H-1′′)與C69.8 (C-6′) 相關(guān)，由此可確定Glc′′與Glc′通過1→6位連接（圖1）。在CD譜（圖2）中，可以觀察到化合物1在235 nm處出現(xiàn)正Cotton效應(yīng)，由此可確定C-2位的絕對(duì)構(gòu)型為[11]。最后，通過1H-NMR、13C-NMR、DEPT-135、HSQC、1H-1H COSY、HMBC對(duì)化合物1的碳?xì)鋽?shù)據(jù)進(jìn)行了準(zhǔn)確的歸屬（表1）。

綜上所述，確定化合物1的結(jié)構(gòu)為(2)-2-- β--glucopyranosyl-(1→6)-β--glucopyranosyl-7- methoxy-1,4(2)-benzoxazin-3-one，命名為薏苡仁苷C，結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物2：無色粉末，易溶于甲醇、乙醇。ESI-MS/: 222.1 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.34 (1H, brd,= 8.1 Hz, H-4), 7.24 (1H, td,= 8.1, 1.0 Hz, H-6), 7.01 (1H, td,= 8.1, 1.2 Hz, H-5), 6.87 7.34 (1H, brd,= 8.1 Hz, H-4), 7.24 (1H, td,= 8.1, 1.0 Hz, H-6), 7.01 (1H, td,= 8.1, 1.2 Hz, H-5), 6.87 (1H, brd,= 8.1 Hz, H-7), 3.46 (3H, s, 9-OCH3), 3.08 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8a), 3.04 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 180.8 (C-2), 171.0 (C-9), 143.6 (C-7a), 131.7 (C-3a), 130.9 (C-6), 125.2 (C-4), 123.5 (C-5), 111.2 (C-7), 74.7 (C-3), 52.0 (9-OCH3), 42.5 (C-8)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[12]，故鑒定化合物2為methyl dioxindole-3-acetate。

圖1 化合物1的結(jié)構(gòu)1H-1H COSY及關(guān)鍵的HMBC相關(guān)信號(hào)

圖2 化合物1的CD譜

表1 化合物1的1H-和13C-NMR (400/100MHz, CD3OD) 數(shù)據(jù)

化合物3：白色無定形粉末，易溶于吡啶，微溶于甲醇。ESI-MS/: 239.1 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 10.86 (1H, s, 9-NH), 7.41 (1H, d,= 7.6 Hz, H-5), 7.30 (1H, d,= 7.6 Hz, H-8), 7.04 (1H, t,= 7.6 Hz, H-7), 6.97 (1H, t,= 7.6 Hz, H-6), 4.15 (1H, d,= 16.1 Hz, H-1a), 4.11 (1H, d,= 16.1 Hz, H-1b), 3.46 (1H, dd,= 10.8, 4.3 Hz, H-3), 3.06 (1H, dd,= 15.5, 4.3 Hz, H-4a), 2.73 (1H, dd,= 15.5, 10.8 Hz, H-4b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 169.1 (-COOH), 136.1 (C-8a), 129.0 (C-1a), 126.4 (C-5a), 120.9 (C-7), 118.5 (C-6), 117.6 (C-5), 111.0 (C-8), 107.0 (C-4a), 57 (C-3), 40.9 (C-1), 23.4 (C-4)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13]，故鑒定化合物3為(3)-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸。

化合物4：白色粉末，易溶于甲醇、乙醇。ESI-MS/: 284.1 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 8.33 (1H, s, H-2), 8.18 (1H, s, H-8), 6.05 (1H, d,= 6.0 Hz, H-1′), 4.49 (1H, dd,= 5.0, 2.9 Hz, H-3′), 4.42 (1H, dd,= 6.0, 5.0 Hz, H-2′), 4.15 (1H, m, H-4′), 3.88 (1H, dd,= 12.6, 2.5 Hz, H-5′a), 3.75 (1H, dd,= 12.6, 2.8 Hz, H-5′b), 3.41 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 157.6 (C-6), 153.6 (C-2), 150.0 (C-4), 141.9 (C-8), 120.9 (C-5), 89.2 (C-1′), 88.4 (C-4′), 84.6 (C-2′), 70.8 (C-3′), 63.2 (C-5′), 58.8 (-OCH3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[14]，故鑒定化合物4為cordysinin B。

化合物5：白色粉末，易溶于吡啶，微溶于甲醇。ESI-MS/: 227.1 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 11.14 (1H, s, -NH), 7.57 (1H, d,= 8.1 Hz, H-4), 7.36 (1H, d,= 8.1 Hz, H-7), 7.27 (1H, s, H-2), 7.05 (1H, t,= 8.1 Hz, H-6), 6.95 (1H, t,= 8.1 Hz, H-5), 3.55 (1H, dd,= 8.4, 4.0 Hz, H-11), 3.33 (1H, dd,= 15.0, 4.0 Hz, H-10a), 3.05 (1H, dd,= 15.0, 8.4 Hz, H-10b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 170.9 (-COOH), 136.3 (C-8), 127.3 (C-9), 124.2 (C-2), 120.8 (C-6), 118.3 (C-5), 118.2 (C-4), 111.3 (C-7), 109.4 (C-3), 54.7 (C-11), 27.1 (C-10)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[15]，故鑒定化合物5為色氨酸。

4 討論

本研究從薏苡仁甲醇提取物的非脂溶性部位中分離得到5個(gè)生物堿類化合物，其中化合物1為未見文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，化合物3和4為首次從薏苡屬植物中分離得到。生物堿類化合物廣泛的分布于自然界中，本研究分離得到的methyl dioxindole- 3-acetate（2）、(3)-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸（3）、cordysinin B（4）、色氨酸（5）在抗腫瘤、抗菌、抗氧化、治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面具有一定的生物活性[12-16]?；衔?為新的苯并噁嗪類化合物，該類型化合物多分布于薏苡屬植物中[11,17]，其類似物也具有一定的抗腫瘤作用[12]。據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版記載，薏苡仁具有解毒散結(jié)之功效，其揮發(fā)油為主要原料的康萊特注射液已廣泛用于癌癥的治療，因此本研究對(duì)闡明薏苡仁抗腫瘤作用的物質(zhì)基礎(chǔ)具有一定意義，同時(shí)也為薏苡仁非脂溶性部位的開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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A new alkaloid from seeds of

YIN Xin, ZHU Wei-qian, ZHOU Yong-qiang, WEI Xin, HU Rui-hang, ZHOU Ying, FENG Ting-ting

College of Pharmacy, Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550025, China

To study the chemical constituents from the seeds of.The chemical constituents were isolated by silica gel column, ODS and semi-preparative HPLC chromatography.The structures of compounds were identified based on spectroscopic data and physicochemical properties.Five alkaloids were isolated from the seeds of, which were identified as (2)-2--(β--glucopyranosyl-(1→6)-β--glucopyranosyl)-7-methoxy-1,4(2)- benzoxazin-3-one (1), methyl dioxindole-3-acetate (2), (3)-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic-acid (3), cordysinin B (4) and tryptophan (5).Compound 1 is a new benzoxazinoid glycoside, named coixlachryside C.Compounds 3 and 4 are isolated fromfor the first time.

Poaceae; seeds ofL.; coixlachryside C; alkaloids;(3)-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic-acid;cordysinin B

R284.1

A

0253 - 2670(2022)10 - 2937 - 04

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.10.001

2021-12-03

貴州省科技廳基礎(chǔ)研究計(jì)劃（黔科合基礎(chǔ)-ZK[2021]一般519）；貴州省教育廳青年人才成長(zhǎng)項(xiàng)目（黔教合KY[2021]202）

殷 鑫，男，博士，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)。E-mail: yinxin110901@163.com

通信作者：俸婷婷，女，博士，教授，研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)。E-mail: ftt0809@163.com

[責(zé)任編輯 王文倩]