韓璐 徐濤

摘要：目的：建立一種快速、簡便、準確性高的鑒別方法，對玉竹中的高異黃酮成分進行紅外光譜學研究。方法：采用提取、分離、純化工藝制備玉竹中高異黃酮類化合物，對獲得的三種高異黃酮化合物進行顯微紅外光譜測定和分析。結(jié)果：得到顯微紅外譜圖信息，分析數(shù)據(jù)得到三種高異黃酮特征性信號峰及指紋性信號峰。結(jié)論：首次對玉竹中三種高異黃酮進行顯微紅外光譜學研究，為今后玉竹中高異黃酮類成分的研究提供理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：玉竹;高異黃酮;顯微紅外光譜

【中圖分類號】 R4 【文獻標識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）09--01

玉竹為百合科多年生的草本植物[1]。玉竹中的高異黃酮類化合物，具有降血糖、降血脂、降血壓等作用[2]。高異黃酮類化合物主要存在于百合科植物中[3]，目前，研究人員發(fā)現(xiàn)高異黃酮類化合物具有多種生物活性，主要有抗腫瘤、抗癌作用;抗炎、抗菌、抗病毒作用;降血糖和膽固醇作用;對心血管系統(tǒng)的作用，如對血壓的影響，抑制血小板凝集的作用，對外周血管的影響等。

顯微紅外光譜法是將顯微鏡與傅里葉變換紅外光譜儀相結(jié)合的儀器，既是微區(qū)分析又是微量分析的一種現(xiàn)代的技術(shù)，與傳統(tǒng)的紅外光譜技術(shù)相比，優(yōu)點在于其靈敏度比較高，不需要加入任何的稀釋劑，可以反映其樣品的本質(zhì)光譜[4-6];制備方法簡單，大多數(shù)的樣品無需制備，可以直接進行檢測;尤其是一些晶體，不需要壓片，可以保持原有的結(jié)構(gòu)，進行無損傷檢驗。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Nicolet iN10TM顯微紅外光譜儀（賽默飛世爾科技有限公司，美國）;電子天平（梅特勒公司，瑞士）;KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，中國）;N1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）等。

1.2 試藥

甲醇為色譜純;無水乙醇為分析純;乙酸乙酯為分析純;石油醚為分析純;玉竹藥材（河北安國市）等。

2 方法與結(jié)果

2.1 玉竹中高異黃酮的提取與制備

取玉竹藥材10kg，加4倍量的95%的乙醇回流提取2次，每次2h，過濾，將提取液合并。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，加適量蒸餾水進行分散，充分震蕩后靜置。水分散溶液置于冷凍離心機4℃，9000r/min的條件下離心15分鐘，棄去上清液，取水不溶的部分于50℃烘干，加適量甲醇超聲溶解，過濾，續(xù)濾液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，近蒸干時轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿，蒸干得到浸膏，稱重，反復(fù)柱層析分離，制備液相色譜制備后，Sephadex-LH-20凝膠柱色譜純化，得到三種高異黃酮化合物。

2.2 三種高異黃酮的結(jié)構(gòu)鑒定

質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示化合物Ⅰ的準分子離子峰m/z為345.1452[M+H]+，對其分子進行二級質(zhì)譜檢測，得到主要二級碎片為121.0692和較小碎片峰251.0924、223.0642、137.0609?；衔铫虻臏史肿与x子峰m/z為331.1293[M+H]+，對其分子進行二級質(zhì)譜檢測，主要二級碎片為107.0508和225.0775。化合物Ⅲ的準分子離子峰m/z為315.1320[M+H]+，對其分子進行二級質(zhì)譜檢測，得到主要二級碎片為107.0509和209.0827。

經(jīng)ESI-MS、1H-NMR與13C-NMR譜分別鑒定化合物I～III分別為3-（4’-甲氧基苯甲基）-5，7-二羥基-6-甲基-8-甲氧基-苯丙二氫吡喃-4-酮（C18H18O5）、3-（4’-羥基苯甲基）-5，7-二羥基-6，8-二甲基-苯丙二氫吡喃-4-酮（C19H20O6）、5，7-二羥基-6-甲氧基-8-甲基-3- （2’，4’-二羥基苯甲基）-苯丙二氫吡喃-4-酮（C18H18O6）。

2.3 三種高異黃酮單體的顯微紅外光譜研究

實驗前，先將液氮加入顯微紅外光譜儀中，MTC檢測器進行冷卻處理，開機預(yù)熱30分鐘，待儀器進入穩(wěn)定工作狀態(tài)后，所制的樣品置于載物平臺，調(diào)整顯微鏡確定測試位點，在顯微紅外光譜儀上以分辨率4cm-1，掃描次數(shù)64次，MCT檢測器，背景掃描設(shè)定為樣品前掃描，掃描范圍400～4000cm-1的條件下進行紅外光譜測定，結(jié)果如圖1、2。

通過對三種高異黃酮化合物顯微紅外光譜檢測，對比主要峰位可知，3400cm-1附近為分子內(nèi)-OH伸縮振動峰，1630cm-1附近為-C=O伸縮振動峰，1480 cm-1附近為苯環(huán)骨架伸縮振動峰，三種高異黃酮主體母核基本一致，其它峰位見表1，不同峰位表明三種高異黃酮苯環(huán)上取代基不同，本實驗首次建立三種高異黃酮化合物顯微IR光譜圖，為后續(xù)玉竹中高異黃酮及其它中藥中高異黃酮成分的光譜學研究提供理論基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1]夏光輝.玉竹二氫高異黃酮分離與抗氧化活性研究[D].沈陽農(nóng)業(yè)大學，2020.

[2]徐濤.玉竹中高異黃酮的TLC-SERS聯(lián)用技術(shù)研究（D）.佳木斯：佳木斯大學，2015.

[3]李海明，白虹，李巍，等.玉竹化學成分研究[J].食品與藥品，2010，1（3）：102-104.

[4]金櫻華，顧中怡，強音等.傅里葉變換顯微紅外光譜法鑒定多層復(fù)合薄膜成分[J].理化檢驗（化學分冊），2016，02：219-221.

[5]張軒，胡超，閆妍等.顯微紅外反射光譜法快速鑒別珍珠粉真?zhèn)蝃J].光譜學與光譜分析，2014，09：2424-2428.

[6]馮艷春，胡昌勤.近紅外光譜法在藥物分析中的應(yīng)用[J].中國藥事，2003，17（5）：312-314.

作者簡介：韓璐（1989年3月—），女，漢族，黑龍江省齊齊哈爾市人，本科學歷畢業(yè)，助理實驗師，研究方向，藥學。

通訊作者：徐濤（1988年7月—），男，漢族，黑龍江大慶市人，碩士研究生畢業(yè)，實驗師，研究方向：藥物分析。