王鄉(xiāng)，陳積，唐茂華

廣東醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院傳染科，廣東 湛江 524003

慢性乙型肝炎（CHB）是導(dǎo)致肝硬化及肝癌的主要原因［1］。我國(guó)作為CHB 高發(fā)國(guó)家，每年有超過(guò)100 萬(wàn)新發(fā)CHB 患者，由CHB 引起的肝硬化及肝癌比例達(dá)到60%和80%［2］，因此CHB 防治任務(wù)十分艱巨。血紅素加氧酶1（HO-1）是一種最容易被誘導(dǎo)的應(yīng)激反應(yīng)蛋白酶，在細(xì)胞缺氧、炎癥刺激時(shí)高表達(dá)［3］。研究發(fā)現(xiàn)，HO-1 參與機(jī)體抗炎、抗 氧 化 過(guò) 程［4］。 高 遷 移 率 族 蛋 白B1（HMGB1）是一種機(jī)體炎癥反應(yīng)后期的調(diào)節(jié)因子，在自身免疫反應(yīng)等非感染性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用［5］。一定范圍內(nèi)的HMGB1 參與機(jī)體保護(hù)性免疫反應(yīng)，但隨著水平升高，可導(dǎo)致免疫反應(yīng)過(guò)激而造成炎癥損傷［6］。研究顯示，CHB 患者存在機(jī)體免疫反應(yīng)亢進(jìn)，可促進(jìn)HMGB1 表達(dá)［7］。本研究通過(guò)檢測(cè)不同病情程度CHB 患者血清HO-1及HMGB1 水平，探討其與病情程度的相關(guān)性，以及二者對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)效能，為CHB 的臨床診治提供新思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2020 年1 月—2021 年1 月我院收治的CHB 患者100 例（CHB 組），男63 例、女37例，年齡18～63（44.12 ± 5.92）歲，BMI（23.87 ±2.36）kg/m2，合并高血壓20 例、糖尿病11 例，吸煙29 例，飲酒11 例。CHB 診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南（2019 年版）》［8］中的標(biāo)準(zhǔn)，Child-Pugh 分級(jí)A級(jí)36 例、B 級(jí)40 例、C 級(jí)24 例。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他病毒引起的肝炎；合并原發(fā)性腎臟疾??；合并心腦血管疾病、惡性腫瘤、結(jié)締組織?。痪癞惓；蛘J(rèn)知功能異常；妊娠或哺乳期婦女。另選取性別、年齡匹配的同期健康體檢者50 例作為對(duì)照組，男28 例、女22 例，年齡18～65（44.42±5.53）歲。本研究通過(guò)我院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)審核，受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 血漿HO-1、HMGB1 檢測(cè)方法 對(duì)照組入組后、CHB組治療前采集空腹外周靜脈血，采用ELISA法檢測(cè)血漿HO-1、HMGB1含量。

1.3 治療與預(yù)后隨訪(fǎng)方法 CHB 組根據(jù)《慢性乙型肝炎防治指南（2019 年版）》［8］給予相應(yīng)的治療措施。隨訪(fǎng)2年，記錄患者的死亡情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)分布且方差齊的計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，n小于40、t小于1 或小于5 大于1 的應(yīng)校正，采用Fisher確切概率法。多組間比較采用方差分析，兩兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)分析血漿HO-1、HMGB1含量與Child-Pugh分級(jí)的關(guān)系。采用ROC 曲線(xiàn)分析HO-1、HMGB1 對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血漿HO-1、HMGB1 水平比較 不同Child-Pugh 分級(jí)患者的血漿HO-1、HMGB1 水平均高于對(duì)照組（P均＜0.05）。CHB 組不同Child-Pugh分級(jí)患者之間比較，C 級(jí)血漿HO-1 水平低于A、B級(jí)，HMGB1 水平高于A、B 級(jí)（P均＜0.05）；B 級(jí)HO-1 水平低于A 級(jí)，HMGB1 水平高于A 級(jí)（P均＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組血漿HO-1、HMGB1水平比較（±s）

表1 兩組血漿HO-1、HMGB1水平比較（±s）

注：與C級(jí)比較，*P＜0.05；與B級(jí)比較，#P＜0.05。

組別CHB組A級(jí)B級(jí)C級(jí)對(duì)照組n 36402450 HO-1（U/L）114.39±40.22*#83.55±14.27*43.45± 8.267.85± 2.12 HMGB1（μg/L）30.87±13.56*#56.86±14.34*67.86±13.4612.23± 2.34

2.2 CHB 患者血漿HO-1、HMGB1 與Child-Pugh 分級(jí)的相關(guān)性 血漿HO-1 與Child-Pugh 分級(jí)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.782，P＜0.01），HMGB1 與Child-Pugh 分級(jí)呈正相關(guān)（r=0.613，P＜0.01）。

2.3 不同預(yù)后CHB 患者的血漿HO-1、HMGB1 水平比較 對(duì)患者隨訪(fǎng)2 年，存活84 例，死亡16 例。死亡患者血漿HMGB1 水平高于存活患者（P＜0.05），HO-1 水平低于存活患者（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同預(yù)后CHB患者血漿HO-1、HMGB1水平比較（±s）

表2 不同預(yù)后CHB患者血漿HO-1、HMGB1水平比較（±s）

注：與存活者比較，*P＜0.05。

預(yù)后存活死亡n 8416 HO-1（U/L）92.05±36.2748.15±15.56*HMGB1（μg/L）46.65±19.1768.48±17.20*

2.4 血漿HO-1、HMGB1對(duì)CHB患者死亡的預(yù)測(cè)效能 根據(jù)血漿HO-1、HMGB1繪制ROC曲線(xiàn)，結(jié)果顯示，HO-1 聯(lián)合HMGB1 預(yù)測(cè)CHB 患者死亡的AUC 最大，為0.905（0.844～0.965），靈敏度為99.2%，特異度為77.4%。見(jiàn)表3。

表3 血漿HO-1、HMGB1對(duì)CHB預(yù)后的預(yù)測(cè)效能

3 討論

一直以來(lái)，慢性乙肝都是全球性健康問(wèn)題，全球30.0%的肝硬化及45.0%的肝癌患者由HBV 感染引起，每年約65 萬(wàn)人死于慢性乙肝引起的肝衰竭、肝硬化及肝癌［9］。目前，臨床對(duì)于乙型肝炎的具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡述清楚，但相關(guān)資料顯示不同炎性細(xì)胞因子在不同類(lèi)型乙型肝炎患者中均起著至為關(guān)鍵的作用［10-11］。

HO-1 是一種熱休克蛋白，機(jī)體在病毒、缺氧等多種刺激下使細(xì)胞的活性氧水平增加，可促進(jìn)HO-1高表達(dá)，并進(jìn)一步通過(guò)催化血紅素發(fā)揮抗氧化及調(diào)控細(xì)胞凋亡作用［12］。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)HBV 損傷肝細(xì)胞后，可刺激HO-1 在肝實(shí)質(zhì)及間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，通過(guò)代謝產(chǎn)物鐵蛋白、膽綠素等發(fā)揮抗氧化、調(diào)控凋亡等作用，保護(hù)肝細(xì)胞，進(jìn)而可延緩肝硬化的發(fā)生［13］。本研究結(jié)果顯示，隨著Child-Pugh 分級(jí)增加，HO-1 水平逐漸降低，HO-1 與Child-Pugh 分級(jí)存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。提示HO-1 對(duì)CHB 肝功能及肝損傷有一定保護(hù)作用。而對(duì)于Child-Pugh 分級(jí)為C 級(jí)患者，其肝功能損傷已經(jīng)到了終末期，因此大量肝細(xì)胞壞死，肝細(xì)胞功能?chē)?yán)重?fù)p傷，HO-1釋放隨之明顯減少。

HMGB1屬于炎癥細(xì)胞因子家族，不僅可以損傷細(xì)胞發(fā)揮促炎作用，且可以與活化的免疫細(xì)胞相互作用進(jìn)一步損傷細(xì)胞，特別是較高水平時(shí)產(chǎn)生的免疫過(guò)激反應(yīng)甚至超過(guò)原損傷引起的炎癥反應(yīng)，最終引起器官衰竭［14］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，肝炎導(dǎo)致的肝硬化大鼠的肝臟纖維間隔區(qū)及變性壞死區(qū)均有HMGB1 的 高 表 達(dá)［15］。此 外HMGB1 通 過(guò) 參 與MAPK、NF-κB 等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路增加了肝細(xì)胞外基質(zhì)合成，進(jìn)而促進(jìn)了肝纖維化的發(fā)生［16］，且HMGB1的高表達(dá)與肝硬化的嚴(yán)重程度正相關(guān)［17］。侯麗娟等［18］動(dòng)態(tài)觀察重型乙肝患者HMGB1 水平亦發(fā)現(xiàn)，隨著肝功能損傷程度加重，HMGB1 水平逐漸降低，考慮其可能與終末期肝細(xì)胞大量壞死有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，隨著Child-Pugh 分級(jí)增加，HMGB1 水平逐漸升高，HMGB1 水平與Child-Pugh 分級(jí)存在正相關(guān)關(guān)系。表明HMGB1參與了CHB病情進(jìn)展過(guò)程。

CHB 在我國(guó)有較高感染率，肝臟受到HBV 侵襲，會(huì)引起肝臟損害和炎癥反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化甚至肝癌，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的生命健康。準(zhǔn)確評(píng)價(jià)肝炎所處免疫狀態(tài)及肝內(nèi)炎癥進(jìn)展程度，不僅是選擇合適的治療方案和有效控制患者病情的關(guān)鍵，且可靠、有效的血清學(xué)指標(biāo)對(duì)CHB 預(yù)后評(píng)價(jià)同樣有重要價(jià)值。本研究結(jié)果顯示，CHB 患者經(jīng)過(guò)積極、正規(guī)治療2 年后，有16.0%的CHB 患者死亡，可見(jiàn)CHB 患者的病死率較高。且死亡組HMGB1 水平較高，而HO-1 水平較低。進(jìn)一步采用ROC 曲線(xiàn)分析，發(fā)現(xiàn)HO-1＜72.84 U/L 及HMGB1≥52.19 μg/L 單 獨(dú) 預(yù) 測(cè)CHB患者死亡的AUC 較低，而兩者聯(lián)合應(yīng)用預(yù)測(cè)患者死亡的AUC 為0.905，因此建議兩者聯(lián)用價(jià)值更高。

綜上所述，CHB 患者隨Child-Pugh 分級(jí)的升高，血漿HO-1逐漸降低，而HMGB1逐漸升高，兩指標(biāo)可以反映CHB病情嚴(yán)重程度；此外預(yù)后不佳的CHB患者血漿HO-1 更低，而HMGB1 水平更高，且HO-1＜72.84 U/L 聯(lián)合HMGB1≥52.19 μg/L 在預(yù)測(cè)CHB 預(yù)后中有較高的價(jià)值。