李 宣，張瀠元，黃永橋

（1.貴州省檢測(cè)技術(shù)研究應(yīng)用中心，貴州貴陽(yáng) 550014；2.貴州省分析測(cè)試研究院，貴州貴陽(yáng) 550014）

乙基麥芽酚因其具有特殊香味，是一種允許使用的食品用合成香料，作為香味增效劑和香味改良劑被廣泛用于煙草、食品、飲料、香料和日用化妝品等行業(yè)[1]。乙基麥芽酚具有還原性，可作為抗氧化劑使用，能與金屬形成贅合物，可控制人體內(nèi)鐵和鋁的含量水平[2-3]。但《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）附錄B中明確規(guī)定植物油脂中不得添加食品用香料、香精。一些不法商家為牟取利益，在食用植物油中添加乙基麥芽酚，以次充好。為保障人體健康和安全，需準(zhǔn)確檢測(cè)食用植物油中乙基麥芽酚含量。

目前，乙基麥芽酚的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[4-5]、液相色譜法[6-7]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[8-9]和拉曼光譜法[10]。有關(guān)使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定植物油中乙基麥芽酚的不確定度判定報(bào)道不多，測(cè)量不確定度是對(duì)測(cè)量結(jié)果質(zhì)量的定量表征，測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性很大程度上取決于其不確定度的大小，建立各種檢測(cè)的不確定度評(píng)定方法，既是提高檢測(cè)質(zhì)量的要求，也是實(shí)現(xiàn)檢測(cè)數(shù)據(jù)國(guó)際互認(rèn)不可或缺的內(nèi)容[11-12]。研究依據(jù)國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布的食品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法《食用植物油中乙基麥芽酚的測(cè)定》（BJS 201708）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，參照現(xiàn)有化學(xué)分析中不確定度評(píng)定方法和要求，對(duì)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定食用植物油中乙基麥芽酚含量的不確定度進(jìn)行分析評(píng)定。根據(jù)建立的數(shù)學(xué)模型，對(duì)影響結(jié)果的相關(guān)分量進(jìn)行不確定度評(píng)估，計(jì)算合成相對(duì)不確定度，得到最終的擴(kuò)展不確定度，以期為測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

乙腈、甲醇（均為色譜純，德國(guó)Merck公司）；甲酸（色譜純，上海安普實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；乙酸銨（優(yōu)級(jí)純，山東西亞化工科技有限公司）；乙基麥芽酚（純度＞99%，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1290超高效液相色譜儀；Agilent 6470 QQQ三重串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜；LT2002電子天平，常熟市天量?jī)x器有限公司；UMV-2多管渦旋混合器，北京普立泰科儀器有限公司；Milli-Q超純水機(jī)，美國(guó)Millipore公司；0.22 μm有機(jī)濾膜，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

①標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制。準(zhǔn)確稱取乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)品101 mg（精確至0.000 1 g），用甲醇溶解并定容至100 mL，得到濃度為1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。②標(biāo)準(zhǔn)中間溶液配制。吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.40 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，得到 4.0 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

1.3.2 儀器條件

（1）液相色譜條件。色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus-C18（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相A：0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B：乙腈；流速：0.3 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣體積：2.0 μL；梯度洗脫程序：0～0.5min，5% B；0.5～2.0 min，5%→90% B；2.0～2.5 min，90% B；2.5～2.8 min，90%→5% B；2.8～3.5 min，5% B。

（2）質(zhì)譜條件。離子源：電噴霧離子源，正離子掃描；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；毛細(xì)管電壓：4.5 kV；霧化器壓力：40 psi；干燥氣流速：10 L/min；干燥氣溫度：300 ℃；鞘氣流速：10 L/min；鞘氣溫度：300 ℃。其他質(zhì)譜條件見(jiàn)表1。

表1 質(zhì)譜條件

1.3.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取10 g試樣（精確至0.01 g）置于50 mL聚丙烯離心管中，用移液器準(zhǔn)確加入10 mL甲醇，渦旋振搖2 min，4 ℃條件下9 000 r/min離心10 min，將上清液移入20 mL具塞刻度試管中，下層油液再用10 mL甲醇重復(fù)提取一次，合并上清液，用甲醇定容至20 mL，經(jīng)微孔濾膜（0.22 μm有機(jī)相）過(guò)濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

1.3.4 建立不確定度數(shù)學(xué)模型

不確定度數(shù)學(xué)模型如下：

式中：X為試樣中乙基麥芽酚的含量，μg/kg；C為由工作曲線得出的試樣溶液中乙基麥芽酚的濃度，ng/mL；V為試樣溶液定容體積，mL；m為試樣質(zhì)量，為加標(biāo)回收率修正因子。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度來(lái)源

從測(cè)量過(guò)程和數(shù)學(xué)模型分析，樣品測(cè)定的不確定度來(lái)源主要有標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制、稀釋urel(Std)、標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合urel(C)、樣品前處理urel(Q)、測(cè)量重復(fù)性和加標(biāo)回收率urel(R)等。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制、稀釋引入的不確定度urel(Std)

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品純度引入的不確定度urel(P)

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品稱量引入的不確定度urel(w)

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)中間溶液配制引入的不確定度urel(C2)

（4）100 mL單標(biāo)線容量瓶（A級(jí)）量器使用重復(fù)性引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel(n2)=2.00×10-4。

（5）100 mL單標(biāo)線容量瓶（A級(jí)）實(shí)驗(yàn)室溫度變化引起溶劑體積變化引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

因此，標(biāo)準(zhǔn)中間溶液配制配制的合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)工作液配制引入的不確定度urel(C3)

實(shí)驗(yàn)中，采用陰性試樣添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別吸取0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL和1.00 mL標(biāo)準(zhǔn)中間溶液加入試樣基質(zhì)中，與試樣同時(shí)進(jìn)行提取，制成最終濃度為20.0 ng/mL、40.0 ng/mL、80.0 ng/mL、120.0 ng/mL、160.0 ng/mL和200.0 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。配制標(biāo)準(zhǔn)工作液過(guò)程移取溶液引入的不確定度來(lái)源有使用1 mL分度吸量管（A級(jí)）、因?qū)嶒?yàn)室溫度變化引起的溶劑體積膨脹等。1 mL分度吸量管（A級(jí)）按三角分布，包含因子溫度變化考慮均勻分布，包含因子配制標(biāo)準(zhǔn)工作液引入的不確定度見(jiàn)表2。因此，陰性試樣添加標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL分度吸量管（A級(jí)）引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

表2 配制標(biāo)準(zhǔn)工作液引入的不確定度

綜上，得出標(biāo)準(zhǔn)溶液配制、稀釋的合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.3 樣品測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度urel()

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度urel(C)

使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)質(zhì)量濃度分別測(cè)3次，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，通過(guò)直線擬合得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為Y=907.331X- 6 247.866，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，按A類評(píng)定計(jì)算。

表3 測(cè)量重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n=7）

表4 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積測(cè)定結(jié)果

樣品重復(fù)測(cè)定7次，帶入線性回歸方程計(jì)算測(cè)定濃度。測(cè)得樣品中乙基麥芽酚的平均含量為C0=47.88 ng/mL，各標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度的平均值=103.33 ng/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算公式如下:

2.5 樣品前處理引入的不確定度urel(Q)

2.5.1 樣品稱量引入的不確定度urel(m)

2.5.2 樣品溶液添加引入的不確定度urel(V)

2.6 回收率引入的不確定度urel(R)

表5 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果（n=7）

2.7 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴(kuò)展不確定度

樣品中乙基麥芽酚的測(cè)量不確定度各分量見(jiàn)表6。則合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

表6 測(cè)量不確定度分量

依據(jù)《化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定》（JJF 1135—2005），按95%置信水平計(jì)算測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度，取擴(kuò)展因子k=2（置信區(qū)間為95%），則擴(kuò)展不確定度為

2.8 測(cè)量結(jié)果及不確定度報(bào)告

使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定植物油中乙基麥芽酚含量，根據(jù)不確定度判定結(jié)果，置信區(qū)間為95%時(shí)，最終測(cè)定結(jié)果為X=（95.6±4.3）μg/kg，k=2。

3 結(jié)論

采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定食用植物油中乙基麥芽酚含量，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中引入的不確定度分析量化。結(jié)果表明，影響食用植物油中乙基麥芽酚測(cè)定結(jié)果不確定度的因素主要為標(biāo)準(zhǔn)溶液配制與稀釋、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，樣品前處理、測(cè)量重復(fù)性和加標(biāo)回收率對(duì)不確定度的貢獻(xiàn)相對(duì)較小。因此，在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中要注意操作的規(guī)范性、一致性及平行樣品的測(cè)定問(wèn)題，以減少測(cè)量不確定度，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和可信度。