歐陽秋麗，劉洋梅，陳 悅，陶能國(guó)

（湘潭大學(xué)化工學(xué)院，湖南 湘潭 411105）

指狀青霉引起的綠霉病是柑橘采后貯藏期間的主要病害，主要通過化學(xué)殺菌劑控制[1-5]。在柑橘采后商品化處理過程中，化學(xué)殺菌劑如抑霉唑等的廣泛使用容易導(dǎo)致大量抗藥性菌株的出現(xiàn)。有研究表明，2000—2010年的10 年間，浙江地區(qū)抗抑霉唑（imazalil-resistant，IMZ-R）菌株頻率從2.1%增加到60%～84%[4]。2012年監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，江西贛州地區(qū)指狀青霉的抑霉唑抗性菌系比例高達(dá)90%[5]。這些抗藥菌株的出現(xiàn)致使原有劑量防治效果下降甚至失效，導(dǎo)致病害防控難度加大，同時(shí)也帶來嚴(yán)重的食品安全問題[2-5]。研究發(fā)現(xiàn)，植物精油及其組分具有高活性、高安全性、不易誘導(dǎo)菌株產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，已逐漸被應(yīng)用于果蔬采后病害的防治實(shí)踐[6-13]。

α-松油醇廣泛存在于茶樹油、松針油中，對(duì)多種細(xì)菌和真菌具有較強(qiáng)的抑制作用[8,14-19]。章斌等[14]測(cè)得α-松油醇對(duì)大腸桿菌（Escherichia coli）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）的最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）分別為3.9 μL/mL和1.0 μL/mL。Pinto等[15]發(fā)現(xiàn)α-松油醇對(duì)假絲酵母菌屬（Candidaspp.）、新生隱球菌（Cryptococcus neoformans）、煙曲霉（Aspergillusfumigatus）和黃曲霉（A.flavus）有很好的抑制效果，MIC和最小殺菌濃度（minimal fungicidal concentration，MFC）的范圍為0.64～1.25 μL/mL。前期研究表明，濃度分別為8.00、8.00 μL/mL和4.00 μL/mL的α-松油醇可完全抑制指狀青霉（Penicillium digitatum）、意大利青霉（P. italicum）和柑橘酸腐病菌（Geotrichum citri-aurantii）的生長(zhǎng)，并導(dǎo)致真菌形態(tài)發(fā)生不可逆的有害改變、膜結(jié)構(gòu)紊亂和膜流動(dòng)性增加[8,16-17]。盡管α-松油醇的抑菌性能已有較多報(bào)道，但其對(duì)指狀青霉抑霉唑抗性菌株的抑菌機(jī)理研究較少。

麥角固醇是真菌細(xì)胞膜的重要結(jié)構(gòu)物質(zhì)，在維持真菌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整性、流動(dòng)性和細(xì)胞活力等方面起著至關(guān)重要的作用，其生物合成受到一系列基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[1,4]。萜類物質(zhì)如檸檬醛、橙花醇和芳樟醇等可顯著降低多種果蔬采后病原真菌細(xì)胞膜中麥角固醇的含量，導(dǎo)致細(xì)胞膜功能異常[13,20-21]。固醇14-α-脫甲基酶基因（CYP51B）是真菌麥角固醇生物合成的關(guān)鍵基因之一，也是常見化學(xué)殺菌劑（抑霉唑和咪酰胺等）的作用靶標(biāo)，該酶活性受到抑制能干擾真菌麥角固醇合成，導(dǎo)致細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破損，從而引起細(xì)胞凋亡[4]。指狀青霉Pdw03菌株為IMZ-R3型抑霉唑抗性菌株，因一段199bp序列插入CYP51B啟動(dòng)子區(qū)引起CYP51B的過度表達(dá)而產(chǎn)生抗藥性[4]。本研究主要探討α-松油醇對(duì)Pdw03的抑制作用及其對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)物質(zhì)麥角固醇合成的影響，以期為柑橘貯藏期間病害的可持續(xù)治理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、菌株與試劑

抑霉唑抗性菌株指狀青霉Pdw03（P. digitatumPdw03）由浙江大學(xué)李紅葉教授提供，現(xiàn)保藏于湘潭大學(xué)生物與食品工程專業(yè)實(shí)驗(yàn)室，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上保存待用。

湘西椪柑（Citrus reticulataBlanco cv. Ponkan）果實(shí)于2019年12月21日從湖南省瀘溪縣張家坪村果園采摘，選擇大小均一、著色均勻且無病斑果實(shí)作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)材料。

α-松油醇（90%）購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司。所有化學(xué)藥品均為分析級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

TDL5A臺(tái)式大容量冷凍離心機(jī) 長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司；CoolSafe 110-4L真空冷凍干燥機(jī) 丹麥LaboGene公司；2010QP-Plus氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、LC-20AT高效液相色譜（high efficiency liquid chromatography，HPLC）儀日本島津公司；ECLIPSE TS100熒光顯微鏡日本NIKON公司；SPX-250B生化培養(yǎng)箱、MLS-3020手提式壓力蒸汽無菌器 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海雅榮生化設(shè)備有限公司。

1.3 方法

1.3.1α-松油醇對(duì)Pdw03抑制作用的測(cè)定

采用瓊脂稀釋培養(yǎng)法[10]測(cè)定α-松油醇對(duì)Pdw03菌絲體生長(zhǎng)的影響。α-松油醇終濃度分別為0（對(duì)照組）、1.00、2.00、4.00 μL/mL和8.00 μL/mL。每個(gè)培養(yǎng)皿中心接入1個(gè)直徑為6.0 mm的菌餅，在（25±2）℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)96 h，每天固定時(shí)間測(cè)量其菌落直徑，并計(jì)算其抑制率。MIC為培養(yǎng)2 d時(shí)完全沒有生長(zhǎng)的最低濃度，MFC為生長(zhǎng)4 d時(shí)完全沒有生長(zhǎng)的最低濃度。對(duì)照組中加入相應(yīng)體積的0.5%（體積分?jǐn)?shù)）吐溫-80，每一濃度進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。抑制率計(jì)算如公式（1）所示。

式中：dc為對(duì)照組菌落直徑/mm；dt為處理組菌落直徑/mm。

1.3.2α-松油醇對(duì)椪柑綠霉病發(fā)病率影響的測(cè)定

發(fā)病率測(cè)定參照OuYang Qiuli等[11]的方法。浸泡液配制：將α-松油醇均勻溶于果蠟中，最終α-松油醇的濃度為MFC和5 MFC，同時(shí)設(shè)置對(duì)照組（未添加α-松油醇）。

椪柑用自來水洗凈后，在體積分?jǐn)?shù)2%的NaClO溶液中浸泡2 min，用蒸餾水洗凈并自然晾干。晾干后的椪柑用無菌手術(shù)刀在赤道處對(duì)稱劃2個(gè)傷口（3 mm×2 mm）。接種10 μL濃度為1×105個(gè)/mL的Pdw03孢子懸浮液。接種后的椪柑靜置4 h后，在相應(yīng)濃度的浸泡液中浸泡1 min，對(duì)照組為果蠟浸泡組。椪柑貯藏溫度為（25±2）℃，相對(duì)濕度為85%～90%，每組10個(gè)果實(shí)，重復(fù)3次。每天測(cè)定椪柑發(fā)病率和病斑直徑，并通風(fēng)1 h。發(fā)病率計(jì)算見公式（2）。

1.3.3α-松油醇對(duì)Pdw03細(xì)胞膜完整性影響的測(cè)定

細(xì)胞膜完整性的測(cè)定參照OuYang Qiuli等[12]的方法。將Pdw03孢子在馬鈴薯葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（potato dextrose broth，PDB）中培養(yǎng)48 h后，將菌絲體用無菌水洗滌3次，使用3 層紗布過濾收集菌絲體。將收集的菌絲體重懸于磷酸緩沖液（pH 7.0）中，加入終濃度為0（對(duì)照）和1/2 MIC的α-松油醇處理0、30、60 min。將處理后的菌絲體用無菌水洗滌3次后收集備用。菌絲體用質(zhì)量濃度10 μg/mL碘化丙啶（propidium iodide，PI）在30 ℃下染色5 min。染色后將菌絲體用PBS洗滌兩次去除殘留的染料，使用熒光顯微鏡觀察。

1.3.4α-松油醇對(duì)Pdw03麥角固醇含量影響測(cè)定

麥角固醇含量測(cè)定參照OuYang Qiuli等[13]的方法。用終濃度為0（對(duì)照）和1/2 MIC的α-松油醇處理0、30、60 min菌絲體，用真空冷凍干燥機(jī)凍干，得到干燥菌絲。取0.008 g的干燥菌絲，充分研磨后加入4 mL 25%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）NaOH溶液和8 mL無水乙醇，在85～90 ℃下水浴2 h?；旌衔锢鋮s至室溫后用石油醚萃取3次。將萃取液用飽和NaCl溶液洗滌3次，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮近干。殘留物用無水乙醇溶解后用進(jìn)行HPLC檢測(cè)。麥角固醇含量以菌絲干質(zhì)量計(jì)，單位為mg/g。

HPLC檢測(cè)條件：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣體積：20 μL。流動(dòng)相：純甲醇，檢測(cè)波長(zhǎng)為282 nm。

1.3.5α-松油醇對(duì)Pdw03麥角固醇合成途徑相關(guān)基因表達(dá)量的測(cè)定

收集用濃度為0（對(duì)照）和1/2 MIC的α-松油醇處理30 min的菌絲體，采用Trizol法提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA后進(jìn)行熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）分析。熒光定量PCR程序：95 ℃預(yù)變性10 min，然后95 ℃延伸15 s循環(huán)40次，最后60 ℃延伸1 min。參照基因?yàn)閍ctin，引物序列如下：ERG9：5’-TCTTTGTTGAGGCCGGGTTTACTTGGGGCGTTTC AACAGA-3’；ERG1：5’-ATCCCCGATAACCTGCCTC TCCCTTGACGCCTCCATTCTT-3’；ERG7：5’-GCGC TGGCGATTGGTCGATGCAGGCCCAGTTTCCGGGCT CC-3’；ERG11：5’-GCGGAATCAAGAGGGACGATGCC CTAGCACACACTTCAGA-3’；ERG24：5’-AGAGCTTC ACAGTTCCAGCCCGATGCCTCGCTGACAAATG-3’；ERG25：5’-ATCGAAAGCTTCCTACGGGGGCGCATCA ATAGGCTGAGGA-3’；ERG26：5’-ACCAGACCCCCTG CATCTATTTGGGATCCGTGCTCTAGGA-3’；ERG27：5’-TTTCGATCTGCTGCCGTCTTGCGCGCTTCGAGTTG TAAAT-3’；ERG6：5’-TCTTTGTTGAGGCCGGGTTTAC TTGGGGCGTTTCAACAGA-3’；ERG3：5’-CAGGCCAT GGCCGCAATGCCGGTGCAGGCCACGGTGGATCC-3’；ERG5：5’-TCTCGCCATTGGCGGATGCGGGCCAACA ATGGCGCCCTTG-3’；ERG4：5’-GCTGGAACCGCTA CTTCCTTAGACAAACAGGTAGGCGACG-3’；ERG2：5’-ACATCTTCGACCCGGAACACTTGGGACCGACTTT CTGCTC-3’；actin183：5’-TGCGCTGAACCGAACTGC CGTCGGGAGCCTCGAAGCGCTC-3’。用2－ΔΔCT法進(jìn)行基因表達(dá)量的定量分析[22]。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，使用Excel 2016軟件處理數(shù)據(jù)，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用軟件SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，one-way ANOVA分析數(shù)據(jù)顯著性差異（P＜0.05表示差異顯著）。

2 結(jié)果與分析

2.1 α-松油醇對(duì)菌株P(guān)dw03的抑制作用

由表1可知，α-松油醇對(duì)Pdw03菌絲體的抑制作用隨著濃度增加而增強(qiáng)。在整個(gè)培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)，1.00～2.00 μL/mLα-松油醇能不同程度抑制Pdw03菌絲體的生長(zhǎng)。培養(yǎng)2 d和4 d時(shí)，4.00 μL/mLα-松油均能完全抑制Pdw03菌絲體生長(zhǎng)，說明α-松油醇對(duì)Pdw03的MIC和MFC均為4.00 μL/mL。

表1 α-松油醇對(duì)菌株P(guān)dw03的抑制作用Table 1 Inhibitory effect of α-terpineol on Pdw03

2.2 α-松油醇對(duì)椪柑果實(shí)綠霉病發(fā)病率的影響

由表2、圖1可知，對(duì)照組椪柑果實(shí)從接種到果實(shí)所有傷口發(fā)病需要6 d，不同濃度α-松油醇能不同程度影響椪柑果實(shí)綠霉病發(fā)生。貯藏3 d時(shí)，對(duì)照組和MFCα-松油醇處理組的椪柑果實(shí)開始發(fā)病，發(fā)病率分別為8%和3%，腐爛直徑分別為（0.78±0.60）mm和（0.27±0.46）mm，此時(shí)5 MFCα-松油醇處理組未發(fā)??；貯藏4 d時(shí)，5 MFCα-松油醇處理組椪柑果實(shí)開始發(fā)病，發(fā)病率為23%，腐爛直徑為（2.09±0.34）mm，而對(duì)照組果實(shí)發(fā)病率已升至73%，病斑直徑達(dá)到（9.35±2.97）mm（表2、3）。發(fā)病率和發(fā)病直徑的結(jié)果表明，α-松油醇處理能有效降低綠霉病的發(fā)生。

表2 α-松油醇對(duì)接種菌株P(guān)dw03椪柑果實(shí)綠霉病發(fā)病率的影響Table 2 Effect of α-terpineol on the incidence of green mold in ponkan fruit inoculated with Pdw03

表3 α-松油醇對(duì)接種菌株P(guān)dw03椪柑果實(shí)病斑直徑的影響Table 3 Effect of α-terpineol on lesion diameter in ponkan fruit inoculated with Pdw03

2.3 α-松油醇對(duì)菌株P(guān)dw03細(xì)胞膜完整性的影響

真菌細(xì)胞膜通透性可用PI染色的方法來判定。正常情況下，PI不能穿過完整的細(xì)胞膜，但當(dāng)細(xì)胞膜完整性喪失后，PI可自由進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合釋放紅色熒光，因此常用來檢測(cè)細(xì)胞膜完整性[10]。α-松油醇處理對(duì)Pdw03細(xì)胞膜通透性的影響如圖2所示。與對(duì)照組相比，1/2 MICα-松油醇處理30 min時(shí)可觀察到大部分菌絲呈現(xiàn)紅色熒光，表明細(xì)胞膜透性增加；隨著處理時(shí)間延長(zhǎng)到60 min，1/2 MICα-松油醇處理組菌絲出現(xiàn)明亮的紅色熒光（圖2），說明α-松油醇處理可顯著破壞Pdw03細(xì)胞膜完整性。

圖2 α-松油醇對(duì)菌株P(guān)dw03細(xì)胞膜完整性的影響Fig. 2 Effect of α-terpineol on the cell membrane integrity of Pdw03

2.4 α-松油醇對(duì)菌株P(guān)dw03麥角固醇含量的影響

麥角固醇是真菌細(xì)胞膜的重要結(jié)構(gòu)物質(zhì)，有助于維持真菌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整性和流動(dòng)性[13,20-21]。圖3結(jié)果表明，隨處理時(shí)間延長(zhǎng)，對(duì)照組麥角固醇含量基本維持不變，而α-松油醇處理能急劇降低Pdw03麥角固醇含量。1/2 MICα-松油醇處理30 min后，Pdw03麥角固醇含量顯著降低至對(duì)照組的40%（P＜0.05），隨著處理時(shí)間延長(zhǎng)到60 min，這一下降趨勢(shì)表現(xiàn)得更加明顯。這些結(jié)果表明α-松油醇很可能通過干擾Pdw03菌株麥角固醇生物合成來降低麥角固醇含量，進(jìn)而影響其細(xì)胞膜完整性。

圖3 α-松油醇對(duì)菌株P(guān)dw03麥角固醇含量的影響Fig. 3 Effect of α-terpineol on the ergosterol content in Pdw03

2.5 α-松油醇對(duì)Pdw03麥角固醇合成途徑相關(guān)基因表達(dá)的影響

麥角固醇生物合成是一個(gè)多基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的復(fù)雜生物學(xué)過程[13,23-24]。α-松油醇能不同程度影響Pdw03麥角固醇生物合成途徑基因表達(dá)。如圖4所示，1/2MICα-松油醇處理30 min后，除ERG1、ERG11、ERG26和ERG27基因表達(dá)基本未受影響外，其余基因表達(dá)均受到顯著影響。其中，ERG9基因表達(dá)受到顯著抑制，表明其可能為潛在作用位點(diǎn)；而ERG2、ERG3、ERG4、ERG5、ERG6、ERG7、ERG24和ERG25等基因表達(dá)顯著增強(qiáng)（P＜0.05）。ERG3的表達(dá)量急劇上升，其次為ERG6和ERG5，其他上調(diào)基因雖然轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生顯著變化，但變化幅度不如這3個(gè)基因，出現(xiàn)這一結(jié)果可能與真菌能通過上調(diào)麥角固醇合成途徑某些基因的表達(dá)緩解麥角固醇合成抑制類藥物對(duì)細(xì)胞膜的損傷有關(guān)[25-27]。

圖4 α-松油醇對(duì)Pdw03麥角固醇合成途徑相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig. 4 Effect of α-terpineol on gene expression related to ergosterol synthesis pathway in Pdw03

3 討 論

已有研究表明，α-松油醇具有顯著的抑菌活性和防腐作用[8-9,14-19]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)4.00 μL/mL（MFC）α-松油醇能完全抑制Pdw03菌絲的生長(zhǎng)（表1），且MFC和5 MFC濃度的α-松油醇能夠有效控制綠霉病的擴(kuò)展（表2、3和圖1）。這一結(jié)果與Kong Qingjun等[9]在葡萄中赭曲霉（A. ochraceus）防控的研究結(jié)果相似，其發(fā)現(xiàn)α-松油醇能有效抑制赭曲霉的生長(zhǎng)，并對(duì)葡萄貯藏過程中赭曲霉的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用。

真菌細(xì)胞膜是細(xì)胞賴以生存的重要基礎(chǔ)[28]。有報(bào)道指出，植物精油能通過其親脂性影響細(xì)胞膜通透性發(fā)揮抑菌作用[20,29]。前人研究發(fā)現(xiàn)，α-松油醇處理不僅能引起大腸桿菌細(xì)胞膜透性增加，導(dǎo)致β-半乳糖苷酶外流[18]，而且還可以誘導(dǎo)赭曲霉和黃曲霉細(xì)胞膜透性增加，引起金屬離子泄漏和細(xì)胞膜完整性破壞，導(dǎo)致代謝紊亂[9,19]。本研究也發(fā)現(xiàn)，2.00 μL/mL的α-松油醇處理嚴(yán)重地破壞了Pdw03細(xì)胞膜完整性（圖2）。這一結(jié)果與本課題組前期研究結(jié)果一致，即α-松油醇可引起意大利青霉膜結(jié)構(gòu)紊亂和膜流動(dòng)性增加[17]。

麥角固醇是保持真菌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整性的關(guān)鍵物質(zhì)之一，參與細(xì)胞膜透性和流動(dòng)性的調(diào)節(jié)[28,30-31]，也是多種抗真菌藥物的主要目標(biāo)。防治柑橘采后綠霉病的常見化學(xué)殺菌劑（如抑霉唑和咪鮮胺）的作用靶標(biāo)即為麥角固醇代謝途徑，主要通過干擾麥角固醇生物合成的不同環(huán)節(jié)或直接與麥角固醇絡(luò)合干擾其正常功能，從而影響病原微生物生長(zhǎng)[21,29]。大量研究表明，植物精油及其組分如姜黃精油、檸檬醛、橙花醇和紫蘇醛等也能通過干擾麥角固醇合成對(duì)細(xì)胞膜完整性產(chǎn)生影響，引起細(xì)胞毒害[13,20-21,25,32-34]。本研究中，α-松油醇處理能顯著降低Pdw03菌株麥角固醇含量（圖3），與細(xì)胞膜完整性被破壞的結(jié)果相互印證。

麥角固醇的生物合成受到ERG基因的嚴(yán)格調(diào)控[23-24,34]。Xu Yanqun等[21]指出，芳樟醇處理引起草莓灰霉菌的麥角固醇合成途徑限速酶基因ERG1和ERG3表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞膜中麥角固醇的含量降低，導(dǎo)致細(xì)胞膜完整性受損。前期研究發(fā)現(xiàn)，檸檬醛處理指狀青霉抑霉唑敏感菌株后，ERG7基因的表達(dá)被激活，而ERG3、ERG5、ERG6和ERG11基因的表達(dá)被抑制，其中ERG11基因是導(dǎo)致麥角固醇含量降低的關(guān)鍵基因[13]。與檸檬醛不同的是，α-松油醇處理并未誘導(dǎo)ERG11的表達(dá)發(fā)生顯著變化（圖4），表明α-松油醇的作用位點(diǎn)可能不是ERG11，說明不同類型萜類物質(zhì)對(duì)真菌麥角固醇途徑的調(diào)控位點(diǎn)存在差別。在真菌麥角固醇代謝途徑中，ERG9基因編碼角鯊烯合成酶，其主要催化固醇分支途徑的第一步反應(yīng)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)至關(guān)重要，當(dāng)該基因被破壞時(shí)，細(xì)胞將喪失合成固醇的能力[23-24,34]。α-松油醇處理顯著抑制Pdw03ERG9表達(dá)（圖4），這一結(jié)果與衛(wèi)夢(mèng)綺[34]報(bào)道的枯茗醛能通過抑制黃曲霉ERG9基因表達(dá)下調(diào)麥角固醇含量類似，說明ERG9基因表達(dá)下調(diào)引起的麥角固醇含量降低很可能與指狀青霉Pdw03菌株細(xì)胞膜完整性喪失密切相關(guān)。α-松油醇處理還誘導(dǎo)了多個(gè)麥角固醇合成基因的上調(diào)表達(dá)，其中ERG3、ERG5和ERG6的變化最為顯著（圖4）。ERG3編碼C-5固醇去飽和酶，該基因一旦失活將導(dǎo)致麥角固醇合成不足和中間代謝產(chǎn)物積累[23-24]。ERG5編碼的C-22固醇去飽和酶催化固醇側(cè)鏈中C-22/23雙鍵的形成，該雙鍵在麥角固醇生物合成途徑中至關(guān)重要[13]，缺失該基因會(huì)導(dǎo)致粗糙脈孢菌和輪枝鐮孢菌對(duì)酮康唑的高度敏感[24]。ERG6編碼的C-24固醇甲基轉(zhuǎn)移酶是麥角固醇合成代謝途徑中的重要限速酶，ERG6的高表達(dá)可以有效提高細(xì)胞麥角固醇含量[24]。這些基因與其他麥角固醇合成途徑基因ERG2和ERG4表達(dá)同時(shí)上調(diào)能有效增加麥角固醇含量[27]。此外，ERG7的表達(dá)能促進(jìn)羊毛固醇的生成，而ERG25表達(dá)的上調(diào)有助于菌株將羊毛固醇轉(zhuǎn)化為麥角固醇[26]。盡管上述基因的上調(diào)表達(dá)可部分補(bǔ)償因ERG9表達(dá)受抑制對(duì)麥角固醇合成造成的不利影響，但并不能完全補(bǔ)償ERG9表達(dá)下調(diào)帶來的麥角固醇含量降低，隨著時(shí)間延長(zhǎng)這一現(xiàn)象表現(xiàn)的尤為明顯，最終表現(xiàn)為麥角固醇合成途徑受阻，麥角固醇含量降低，從而導(dǎo)致細(xì)胞膜完整性喪失和菌絲體凋亡。