楊建波

中國食品藥品檢定研究院

張文娟

中國食品藥品檢定研究院

程顯隆

中國食品藥品檢定研究院

王雪婷

中國食品藥品檢定研究院

魏鋒*

中國食品藥品檢定研究院

馬雙成*

中國食品藥品檢定研究院

五加皮為五加科植物細柱五加Acanthopanax gracilistylusW.W. Smith 的干燥根皮。夏、秋二季采挖根部，洗凈，剝?nèi)「ぃ瑫窀?。味辛、苦，性溫，歸肝、腎經(jīng)。具有祛風除濕、補益肝腎、強筋壯骨、利水消腫的功效，用于風濕痹病、筋骨痿軟、小兒行遲、體虛乏力、水腫、腳氣[1]。細柱五加在我國分布較為廣泛，西自四川西部（天全、屏山）、云南西北部（維西），東至我國東部沿海，北至山西西南部（永濟）、陜西北部（延安），南至云南南部（蒙自）和東南沿海，但野生資源蘊藏量較為有限[2]。

古代本草中所記載的五加皮，為五加科植物；現(xiàn)代使用的五加皮藥材，有南北五加皮之分。南五加皮來源于五加科植物細柱五加的根皮；北五加皮為蘿藦科植物杠柳Periploca sepiumBge. 的根皮，習稱香五加，《中國藥典》1977年版將其定為香加皮[3]。南五加皮無毒，補肝腎、強筋骨作用較好；北五加皮有毒，有強心利尿之功，不宜多用?，F(xiàn)代臨床應用中曾多次出現(xiàn)關于使用香加皮中毒的報道，引起了廣泛的關注[4-5]。因此，基于2018年全國中藥材及飲片專項抽驗及市場調(diào)研結果，系統(tǒng)介紹五加皮的基原、真?zhèn)渭皟?yōu)劣等質(zhì)量問題，并對五加皮的監(jiān)管提出建議。

1 五加皮的基原

《中國藥典》1977～2020年版記載五加皮均為五加科植物細柱五加Acanthopanax gracilistylusW. W. Smith 的干燥根皮。《中華本草》記載五加皮為細柱五加和短梗五加[Acanthopanax sessiliflorus（Rupr. et Maxin）]的根皮[6]?！陡拭C省中藥飲片炮制規(guī)范》1980年版記載五加皮的來源為細柱五加和杠柳；《河南省中藥材標準》1991年版記載五加皮的來源僅為杠柳，《河南省中藥飲片炮制規(guī)范》2005年版記載五加皮的來源為細柱五加；《云南省中藥飲片炮制規(guī)范》1986年版記載五加皮的來源為杠柳、刺五加和紅毛五加；《吉林省中藥炮制標準》1986年版記載五加皮的來源為細柱五加和短梗五加；《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》2010年版記載五加皮的來源為細柱五加和糙葉五加[7-11]，具體詳見表1。由此可見，長期的用藥習慣、不同地區(qū)的藥材標準和《中國藥典》對五加皮的基原有不一樣的描述，增加了五加皮的用藥風險，給監(jiān)管帶來一定的難度。

表1 《中國藥典》和不同地方標準中五加皮來源及檢驗項目

2 五加皮真?zhèn)舞b別

五加皮用藥歷史悠久，地方習用品較多，導致偽品及混淆品較為嚴重。常見偽品及混淆品有刺五加、白簕、糙葉五加、短梗五加、無梗五加、紅毛五加、牡丹皮、桑白皮、地骨皮、香加皮、密脈鵝掌柴、七加皮、土加藤和五葉泡等[6,12-14]。據(jù)2018年全國中藥材及飲片專項抽驗及市場調(diào)研結果，市場上主要有3 種藥材以不同名稱或摻偽品作為商品五加皮出售，分別為香加皮、白簕和紅毛五加。

傳統(tǒng)的生藥學和薄層色譜鑒定技術，具有快速、準確和經(jīng)濟等優(yōu)勢被廣泛收載于《中國藥典》及地方藥材標準中，并且常被用作為中藥材真?zhèn)舞b別[15-16]。因此，本研究優(yōu)先采用傳統(tǒng)生藥學和薄層色譜鑒定技術，按《中國藥典》2020年版規(guī)定，對所收集的78批樣品進行真?zhèn)舞b別。另外，采用DNA 條形碼技術，以目前備受關注的ITS2 序列片段為條形碼標準[17-20]，對較難鑒別的易混品進行DNA 條形碼鑒別研究。

2.1 實驗儀器和樣品

儀器：薄層色譜成像系統(tǒng)（Visualizer 2，CAMAG 公司），薄層色譜點樣儀（ATS 4，CAMAG 公司），顯微鏡（BX51，OLYMPUS 公司）及數(shù)碼相機（EM5 Mark Ⅱ，OLYMPUS 公司）。

樣品：3 批五加皮樣品于2021年3月采集于湖北省武漢市黃陂區(qū)（WJP01～WJP03，野生4年以上）；5 批五加皮樣品于2021年6月采集于湖北省黃岡市紅安縣（WJP04，種植2年；WJP05～WJP08， 種 植4年）；5 批五加皮樣品于2021年6月采集于湖北省武漢市黃陂區(qū)（WJP09 和WJP10， 野生4年以 上；WJP11～WJP13， 種 植4年以上），上述樣品經(jīng)中國食品藥品檢定研究院楊建波副研究員鑒定為細柱五加Acanthopanax gracilistylusW. W. Smith 的干燥根皮。1 批湖北省黃岡市紅安縣細柱五加的根芯（WJP14X，種植4年以上）。64 批2018年全國中藥材及飲片專項抽驗五加皮（20180401～20180464）。

2.2 鑒別

2.2.1 性狀鑒別

64 批2018年全國中藥材及飲片專項抽驗五加皮樣品（20180401～20180464） 中，55批樣品外表面灰褐色，有稍扭曲的縱皺紋及橫長皮孔樣斑痕；內(nèi)表面淡黃色或灰黃色，有細縱紋。體輕，質(zhì)脆，易折斷，斷面不整齊，灰白色。氣微香，味微辣而苦。與《中國藥典》2020年版中五加皮的描述一致[1]，鑒定其為五加皮。9 批性狀不符合規(guī)定，其中7 批不合格樣品均呈不規(guī)則的卷筒 狀（20180401～20180407），外表面黃棕色，栓皮松軟呈鱗片狀，易剝落。有特異性香氣，味苦。與《中國藥典》2020年版中香加皮的描述一致[1]，鑒定其為香加皮（圖1）。另外2 批不合格樣品外表面棕褐色（20180408 和20180409），內(nèi)表面黃白色，有細縱紋。體輕，易折斷，斷面平坦。氣微，味淡（圖1）。

2.2.2 薄層色譜鑒別

樣品：64 批五加皮抽驗樣品（20180401～20180464）、五加皮對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號為121523-201703 ）；香加皮對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號為121025-201404）； 異貝殼杉烯酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111999-201501）。

供試品溶液制備：取樣品粉末2.0g，加二氯甲烷10ml，超聲處理30 分鐘，濾過，濾液回收溶劑至干，殘渣加二氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。

對照藥材溶液制備：分別取五加皮和香加皮對照藥材0.2g，同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。

對照品溶液制備：取異貝殼杉烯酸對照品，加甲醇制成每1ml含2mg 的溶液，作為對照品溶液。

薄層色譜條件：照薄層色譜法（ 通則0502） 試驗， 吸取上述溶液各3μl，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）- 乙酸乙酯- 甲酸（10 : 3 : 0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別在日光和紫外光燈（365nm）下檢視。

結果：64 批五加皮抽驗樣品中，55 批樣品在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同顏色的斑點；紫外光燈（365nm）下顯相同顏色的熒光斑點。9 批不合格樣品中，7 批樣品在與香加皮對照藥材色譜相應的位置上呈現(xiàn)相同顏色的斑點。部分2018年全國中藥材及飲片專項抽驗五加皮樣品薄層色譜結果見圖2。

2.2.3 聚合酶鏈式反應法

樣品：2018年全國中藥材及飲片專項抽驗五加皮樣品中2批不合格樣品（20180408 和20180409）。

儀器：PCR 儀（VERITI，AB公司）， 分析天平（AB135-S，Mettler 公司）， 電泳儀（EPS-301，Amersham 公司），全自動凝膠成像系統(tǒng)（GeneGenius，Biorad 公司），球磨儀（M400，Retsch 公司），微量紫外分光光 度 計（Nanodrop One Plus，Thermo 公司）。

試劑：快捷型植物基因組DNA提取試劑盒（DP321，天根生化科技有限公司），Ex Taq（DRR100B，TaKaRa 公司 ），dNTP Mixture（N0447，New England Biolabs 公司），Sac Ⅱ（R0157，New England Biolabs公 司 ），GelRed （41003，Biotium 公司），瓊脂糖（Blowest公司），GelRed （Biotium 公司），Tris 堿、 冰醋酸和EDTA Na2H2O（國藥集團化學試劑有限公司），引物（華大基因科技有限公司 ） 上游：5'-GGAAGTAAAA GTCGTAACAAGG-3'，下游：5'-TCCTC CGCTTATTGATATGC-3'。

方法：①樣品處理：取樣品，用酒精棉球?qū)⒈砻娌潦酶蓛簦栏?；用球磨儀磨成極細粉末，稱取樣品粉末約30mg 備用；DNA提取和定量分析按照基因組DNA提取試劑盒說明書進行操作。用微量紫外分光光度計進行DNA定量。②聚合酶鏈式反應及測序：聚合酶鏈式反應（PCR）條件：預變性94 ℃ 5 min；反應循環(huán)（35 輪）94 ℃ 30 s，52 ℃ 30s，72℃ 30s；最后延伸 72℃ 5 min。PCR 反應體系25μl：DNA 模板1μl， 上下游引物各0.2μl，Taq DNA 聚合酶0.2μl，dNTP（10mmol/L）0.6μl， 反應緩沖液2.5μl，高壓蒸汽滅菌的去離子水（ddH2O）20.3μl。PCR 樣品送華大基因科技有限公司完成測序。③序列分析及鑒定：使用CodonCode Aligner 4.0 進行序列拼接和剪切；導出序列，登錄“中藥材DNA 條形碼鑒定系統(tǒng)”進行鑒定。

結果：2批可疑樣品（20180408 和20180409） 鑒定結果為“Schefflera delavayi（Franch.）Harms ex Diels”，即五加科鵝掌柴屬穗序鵝掌柴的干燥根皮。

3 五加皮優(yōu)劣評價

經(jīng)查閱藥智網(wǎng)數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)在“2019年1月～2021年7月”期間，共有72 批五加皮不合格，其中浸出物共有31 批不合格，占43.1%；總灰分共有12 批不合格，占16.7%，兩項不合格數(shù)約占總不合格數(shù)的60%。由此可見，五加皮浸出物和總灰分不合格是影響五加皮質(zhì)量的主要因素，在一定程度上也可能會影響五加皮的臨床療效。因此，本項目組選擇15 批2018年全國中藥材及飲片專項抽驗五加皮藥材/飲片、13 批產(chǎn)區(qū)收集的種植和野生五加皮藥材以及1 批細柱五加的根芯，共29 批，進行浸出物和總灰分的研究。水分、浸出物和總灰分分別按照《中國藥典》2020年版四部通則“0832 水分測定法” 第二法（烘干法）、“2201 浸出物測定法”和“2302 灰分測定法”進行檢查。

結果：28 批五加皮的水分均符合《中國藥典》2020年版標準。15 批2018年全國中藥材及飲片專項抽驗五加皮藥材/飲片中，5批五加皮的浸出物符合《中國藥典》2020年版標準，合格率僅為33.3%；13 批產(chǎn)區(qū)收集的種植和野生五加皮藥材中，12 批五加皮的浸出物符合《中國藥典》2020年版標準，合格率為92.3%。15批2018年全國中藥材及飲片專項抽驗五加皮藥材/飲片中，12批五加皮的總灰分符合《中國藥典》2020年版標準，合格率為80.0%；13 批產(chǎn)區(qū)收集的種植和野生五加皮藥材的總灰分均符合《中國藥典》2020年版標準，詳見表2。

表2 五加皮研究結果匯總表

4 五加皮監(jiān)管建議

4.1 五加皮的混淆品問題

目前關于五加皮的混淆品主要是香加皮和糙葉五加等，可能原因為部分省中藥材標準或中藥飲片炮制規(guī)范與《中國藥典》2020年版中關于“五加皮”的基原描述有差異。與此同時，五加皮和香加皮的性狀和化學成份均存在較大的差異[21-23]，且《中國藥典》2020年版已經(jīng)將五加皮和香加皮列為2 個品種。建議加強和規(guī)范部分省級中藥材標準及中藥飲片炮制規(guī)范，并持續(xù)加強監(jiān)管，加大治理力度，從而確保五加皮品種臨床用藥安全。

4.2 五加皮的偽品問題

2018年全國中藥材及飲片專項抽驗五加皮樣品中有2 批偽品為新發(fā)現(xiàn)的五加皮偽品，即五加科鵝掌柴屬植物穗序鵝掌柴的干燥根皮，均從廣西抽樣獲得。穗序鵝掌柴又稱為“絨毛鴨腳木”（《廣西植物名錄》），在廣西習稱“大五加皮”，在貴州習稱 “假通脫木”，廣布于云南、貴州、四川、湖北、湖南、廣西、廣東、江西以及福建等地，為民間常用草藥，根皮治跌打損傷，葉具有發(fā)表的功效[24]。建議規(guī)范穗序鵝掌柴的質(zhì)量標準，并加強五加皮藥材在廣西等地的質(zhì)量監(jiān)控，從而確保五加皮品種基原的準確性。

4.3 五加皮浸出物和總灰分不合格率較高問題

在前期對湖北省黃岡市紅安縣和武漢市黃陂區(qū)的調(diào)研基礎上，發(fā)現(xiàn)五加皮浸出物和總灰分不合格的主要原因有：①與采收加工清洗不干凈有關。按照《中國藥典》2020年版“五加皮”項下要求，夏、秋二季采挖細柱五加根部，洗凈，剝?nèi)「?，曬干。如果細柱五加根部清洗不干凈，可能會導致總灰分和浸出物不合格。②與種植年限有關。2年生的五加皮樣品總灰分合格，但浸出物不合格；而種植/野生4年及以上的五加皮浸出物和總灰分均合格。③與五加皮加工抽芯不完全有關。細柱五加的根芯浸出物較低，總灰分也較低。如果五加皮抽芯不完全，總灰分會合格，但是浸出物可能會偏低。建議細柱五加規(guī)范種植，采收加工時趁鮮清洗干凈，抽芯完全，并加強五加皮的源頭監(jiān)管力度，有助于其總灰分和浸出物合格。