楊 程，申世瑛

(1.平?jīng)鍪袆游镆卟☆A(yù)防控制中心，甘肅 平?jīng)?744000; 2.平?jīng)鍪行竽翝O業(yè)站)

自2018年8月我國報道首例非洲豬瘟疫情以來，疫情在全國范圍內(nèi)蔓延，養(yǎng)豬業(yè)受到嚴(yán)重危害，黨和國家高度重視，出臺了一系列防控政策，采取積極應(yīng)對措施遏制疫情蔓延，恢復(fù)生豬產(chǎn)能，為降低非洲豬瘟疫情擴散風(fēng)險、切斷病毒傳播途徑，根據(jù)我國非洲豬瘟疫情流行特點，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求屠宰企業(yè)開展非洲豬瘟病毒核酸檢測工作，嚴(yán)格落實“兩項制度”。平?jīng)鍪袑儆谏i調(diào)出地區(qū)，及時落實屠宰企業(yè)非洲豬瘟自檢政策，2019年底全市10家生豬屠宰企業(yè)按照全省統(tǒng)一要求，相繼建成了非洲豬瘟檢測實驗室并投入運行，對進場屠宰生豬按照“頭頭采、批批檢、全覆蓋”的要求開展非洲豬瘟病毒(以下簡稱：ASFV)核酸檢測工作，屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測成為阻斷非洲豬瘟疫情傳播的最后一道防線，對切斷疫病傳播途徑、確保肉品安全中發(fā)揮著重要作用。為全面掌握甘肅省平?jīng)鍪猩i屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測能力，進一步提高屠宰企業(yè)非洲豬瘟自檢水平，2020年1～7月，省、市疫控機構(gòu)分別組織開展了屠宰企業(yè)ASFV核酸PCR檢測能力比對工作，對屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測能力和水平進行分析評估，對比對結(jié)果差異較大的屠宰企業(yè)采取了針對性的整改措施。本文通過對平?jīng)鍪?0家生豬屠宰企業(yè)3次非ASFV核酸PCR檢測比對結(jié)果分析，及時發(fā)現(xiàn)不足，找出問題差距，采取針對性的整改措施，全面提升生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟自檢水平，充分發(fā)揮屠宰企業(yè)非洲豬瘟自檢“防火墻”作用。

1 材料和方法

1.1 比對范圍

根據(jù)平?jīng)鍪猩i屠宰企業(yè)分布現(xiàn)狀，在政府部門備案，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公布、具備生豬屠宰條件，取得《生豬定點屠宰資格證》和《動物防疫條件合格證》，并且正常開展生豬屠宰的全市10家生豬屠宰企業(yè)全部納入非洲豬瘟檢測能力比對范圍。

1.2 比對項目設(shè)置

2020年1～7月，甘肅省動物疫病預(yù)防控制中心和平?jīng)鍪袆游镆卟☆A(yù)防控制中心分別組織開展了1次和2次ASFV核酸熒光PCR檢測能力比對工作，平?jīng)鍪?0家生豬屠宰企業(yè)參加并完成了ASFV核酸熒光PCR檢測比對。

1.3 比對樣品

ASFV核酸熒光PCR比對樣品分別由組織單位獸醫(yī)實驗室按照參考標(biāo)準(zhǔn)陽性核酸樣品和陰性核酸樣品不同倍數(shù)稀釋后，重新進行定值制備成盲樣，陰、陽性樣品進行隨機組合成一組盲樣，統(tǒng)一編號、分裝、編號、保存和發(fā)放。

1.4 試劑及主要儀器

1.4.1 試劑 比對試劑均要求按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公布的《第二批非洲豬瘟現(xiàn)場快速檢測試劑名單》，由組織單位根據(jù)比對盲樣準(zhǔn)備所用試劑，確定屠宰企業(yè)采購的ASFV核酸熒光PCR檢測試劑盒與組織單位準(zhǔn)備盲樣使用的試劑盒屬于同一生產(chǎn)企業(yè)和批次，確保比對結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.4.2 儀器 所用的熒光定量PCR儀、迷你離心機、微量移液器、高壓滅菌鍋、生物安全柜、冰箱等主要儀器均為屠宰企業(yè)按照非洲豬瘟檢測實驗室建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)采購，且調(diào)試正常，實驗室儀器經(jīng)市級畜牧獸醫(yī)部門組織專家現(xiàn)場驗收通過，能夠正常開展ASFV核酸熒光PCR檢測工作。

1.5 比對流程

1.5.1 準(zhǔn)備階段 省、市疫控組織機構(gòu)在比對開始前，就提前下發(fā)了非洲豬瘟檢測能力比對工作通知和比對實施方案，對屠宰企業(yè)檢測能力比對工作進行了統(tǒng)一安排部署，要求各縣(市、區(qū))生豬屠宰企業(yè)在縣級畜牧獸醫(yī)部門的監(jiān)督下自行進行，按時完成盲樣檢測和結(jié)果上報任務(wù)。

1.5.2 樣品發(fā)放 全市10家生豬屠宰企業(yè)派專人在規(guī)定時間內(nèi)領(lǐng)取了比對盲樣，全程冷藏保存，24 h內(nèi)送到屠宰企業(yè)實驗室保存，屠宰企業(yè)實驗室基本都在規(guī)定時限內(nèi)完成非洲豬瘟盲樣檢測任務(wù)，按時上傳了比對結(jié)果，上報了檢測報告。

1.5.3 結(jié)果判定 省、市疫控機構(gòu)獸醫(yī)實驗室組織技術(shù)人員及時對屠宰企業(yè)上報的ASFV核酸熒光PCR盲樣檢測結(jié)果與參考值進行比對，當(dāng)比對結(jié)果與參考值完全一致時判定為“正確”，否則判定為“錯誤”，即參考值為核酸陽性，比對結(jié)果為核酸陽性，或參考值為核酸陰性，比對結(jié)果為核酸陰性時，判定為正確，否則判定為“錯誤”。

2 比對結(jié)果

2.1 總體情況

2000年，平?jīng)鍪?0家生豬屠宰企業(yè)3次ASFV核酸熒光PCR檢測能力比對工作都全部參加，并按時完成了下達的盲樣比對任務(wù)。從比對結(jié)果的準(zhǔn)確率來看，平?jīng)鍪?個縣(市、區(qū))只有“D”、“F”和“G”3個縣的3家生豬屠宰企業(yè)3次ASFV核酸熒光PCR檢測比對結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)值一致，準(zhǔn)確率占參加比對企業(yè)的30%，在3次比對中出現(xiàn)1份盲樣比對不準(zhǔn)確的有2家，準(zhǔn)確率占參加比對企業(yè)的20%，在3次比對中出現(xiàn)2份盲樣比對結(jié)果不準(zhǔn)確的的有1家，占參加比對企業(yè)的10%。從盲樣比對單項情況分析，屠宰企業(yè)160份盲樣檢測比對準(zhǔn)確了139份樣品，準(zhǔn)確率86.87%。從屠宰企業(yè)實驗室30次比對準(zhǔn)確率看，完全比對準(zhǔn)確的次數(shù)有20次，準(zhǔn)確次數(shù)率66.66%(見表1)。從比對時間看，1月份比對準(zhǔn)確率78%，3月份比對準(zhǔn)確率84%，7月份比對準(zhǔn)確率96.6%，總體比對準(zhǔn)確率在逐次提高(見表2)。

表1 生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟能力比對情況

表2 非洲豬瘟檢測能力不同比對時間比對結(jié)果

2.2 比對結(jié)果分析

從屠宰企業(yè)盲樣檢測比對結(jié)果可以看出，不同生豬屠宰企業(yè)之間檢測水平存在一定差距：一是檢測結(jié)果表述不準(zhǔn)確，Ct值填寫差異較大。有2家生豬屠宰企業(yè)在1次比對結(jié)果上報中未報告檢測的Ct值，“Ct值欄”空白，占參加總次數(shù)的6.66%；有1家生豬屠宰企業(yè)在1次盲樣檢測比對中Ct值填寫錯誤，實驗不成立，占參加總次數(shù)的3.33%；二是檢測報告上報不及時，結(jié)果填寫不夠規(guī)范。在3次30組檢測比對中，有 4家屠宰企業(yè)在1次比對中出現(xiàn)只報盲樣檢測結(jié)果，未按要求上報盲樣“檢測報告”。有1家屠宰企業(yè)“檢測報告”填寫不規(guī)范，簽字不齊全，或用符號代替陰、陽性。三是綜合滿意度與國家技術(shù)要求相比還有差距。從比對結(jié)果、檢測報告和時效性綜合分析，“f、 h、l”3家屠宰企業(yè)實驗室ASFV核酸熒光PCR檢測比對結(jié)果評價為“滿意”，3次比對準(zhǔn)確率100%，檢測報告規(guī)范率100%；“b、c、d、e、m”5家屠宰企業(yè)實驗室ASFV核酸熒光PCR檢測比對結(jié)果評價為“較滿意”，3次比對結(jié)果準(zhǔn)確率80%以上，占參加比對企業(yè)的50%，但檢測報告的規(guī)范率只有75%；“a、g”2家屠宰企業(yè)實驗室ASFV核酸熒光PCR檢測比對結(jié)果評價為“不太滿意”，3次比對結(jié)果準(zhǔn)確率71%，占參加比對企業(yè)的20%。說明平?jīng)鍪猩i屠宰企業(yè)非洲豬瘟實驗室檢測從無到有，從有到強在不斷進步，檢測水平也在不斷提高，ASFV核酸熒光PCR檢測將在今后非洲豬瘟常態(tài)化防控工作中發(fā)揮重要作用，意義重大。

2.3 人員對檢測結(jié)果的影響

平?jīng)鍪?0家生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室自2019年10月籌建到正常運行經(jīng)歷了多次整改逐漸完成，硬件條件都得到顯著提升，凈化室通風(fēng)、污水處理系統(tǒng)按標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)到位，熒光定量PCR儀、離心機、生物安全柜、移液器、冰箱、紫外線燈等必要設(shè)備和儀器全部配齊，調(diào)試正常，并通過市級驗收，但屠宰企業(yè)檢測人員參差不齊，其中：檢測人員年齡在40歲以上的企業(yè)有7家，具備大專以上學(xué)歷專職檢測人員的企業(yè)有4家，中專學(xué)歷的有2人，從檢測人員總體結(jié)構(gòu)看，只有4家屠宰企業(yè)配備專職檢測人員，且年齡均在30歲以下，都是近年來招錄的畜牧獸醫(yī)專業(yè)高校畢業(yè)生(見表3)。從非洲豬瘟檢測能力比對結(jié)果分析，比對準(zhǔn)確率較高的4家企業(yè)檢測人員學(xué)歷相對較高、年齡小，并專職從事檢測工作，盲樣比對的正確率分別達到100%和 81.25%。表明檢測人員的年齡、學(xué)歷和專職程度對非洲豬瘟檢測結(jié)果有直接影響。

表3 生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測人員基本情況

3 討論

從平?jīng)鍪猩i屠宰企業(yè)3次ASFV核酸熒光PCR檢測能力比對結(jié)果分析，“f、h、l”3家屠宰企業(yè)檢測比對準(zhǔn)確率高，結(jié)果相對保持穩(wěn)定，“b、c、d、e、m”5家屠宰企業(yè)檢測比對結(jié)果準(zhǔn)確率和敏感性都保持在較高水平，“a、g”2家屠宰企業(yè)檢測比對結(jié)果準(zhǔn)確率較低，敏感性和準(zhǔn)確率有待進一步提高。主要原因分析：一是部分屠宰企業(yè)對非洲豬瘟檢測的重視程度還不夠。平?jīng)鍪?0家生豬屠宰場都是小型屠宰企業(yè)，建場時間早，設(shè)備落后，年生豬屠宰量平均2.51萬頭，自動化程度不高，從業(yè)人員5～10人，利潤相對較低，屠宰企業(yè)沒有經(jīng)費聘請專職檢測技術(shù)人員，只能由本場職工或企業(yè)負責(zé)人承擔(dān)非洲豬瘟日常檢測工作；二是檢測人員專業(yè)水平普遍不強。比對結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，盲樣比對準(zhǔn)確率低的屠宰企業(yè)檢測人員基本上都年齡偏大，文化程度不高，缺少專業(yè)知識，操作技術(shù)不熟練，對非洲豬瘟檢測原理沒有理解和掌握，只會按照參照診斷試劑說明書操作，質(zhì)量控制體系不嚴(yán)格，比對準(zhǔn)確率不高；三是屠宰企業(yè)非洲豬瘟PCR儀檢測敏感性和穩(wěn)定性存在一定差異。屠宰企業(yè)實驗室PCR儀沒有同一配備標(biāo)準(zhǔn)，價格在3～20萬元之間，品牌各異，儀器操作方法不盡一致，加之屠宰企業(yè)使用的都是非洲豬瘟PCR快速檢測試劑盒，檢測的穩(wěn)定性和敏感性存在差異，對強陽性敏感，對弱陽性敏感性差；四是檢測人員對診斷試劑保存和使用還不規(guī)范。屠宰企業(yè)日屠宰量小，試劑用量少，試劑盒反復(fù)融凍，影響檢測效果；五是部分檢測人員不能按照屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測技術(shù)規(guī)范開展檢測工作。大部分屠宰企業(yè)檢測人員都身兼多職，對檢測工作研究得少，不注重操作細節(jié)，生物安全柜、PCR儀、移液器等設(shè)備儀器使用不熟練，加樣精準(zhǔn)度不高，實驗室溫度難以控制等都影響非洲豬瘟檢測結(jié)果。

通過對比對結(jié)果好的“f、h、l”3家屠宰企業(yè)調(diào)查分析，這3家企業(yè)負責(zé)人對非洲豬瘟檢測工作都比較重視，企業(yè)效益、企業(yè)管理都相對較高，非洲豬瘟實驗室建設(shè)投資大，建設(shè)規(guī)范，有準(zhǔn)備區(qū)和擴增區(qū)，凈化標(biāo)準(zhǔn)高，管理規(guī)范，PCR儀均在10萬元以上，檢測人員大專以上學(xué)歷，多次接受非洲豬瘟檢測技術(shù)培訓(xùn)，專職從事檢測工作，對實驗操作有一定專業(yè)基礎(chǔ)，責(zé)任心強，理論和實踐優(yōu)勢明顯。

綜合分析，平?jīng)鍪猩i屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測水平處于“不斷提升”階段，在今后的工作中還需要進一步加強監(jiān)管，加大檢測技術(shù)培訓(xùn)，健全非洲豬瘟檢測程序，加大硬件建設(shè)，加大資金投入，嚴(yán)格按照屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測管理規(guī)范開展非洲豬瘟自檢工作，切實把好生豬屠宰最后一道關(guān)口，嚴(yán)防非洲豬瘟病毒流入消費市場。

4 建議

一是加強對屠宰企業(yè)實驗室檢測人員專業(yè)培訓(xùn)，提高非洲豬瘟檢測水平。結(jié)合不同屠宰企業(yè)設(shè)備和儀器特點，制定針對性培訓(xùn)方案，按照缺什么補什么的原則，有針對性的進行培訓(xùn)，提高實驗室標(biāo)準(zhǔn)化水平和檢測人員檢測能力，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠；二是政府部門加強對屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測能力建設(shè)方面資金投入，可以給予相應(yīng)的經(jīng)費補貼，促進PCR儀等設(shè)備儀器換代升級；三是加大對屠宰企業(yè)實驗室生物安全管理，進一步提高實驗室生物安全水平，嚴(yán)防屠宰企業(yè)實驗室生物安全事故發(fā)生；四是加強對屠宰企業(yè)監(jiān)管力度，嚴(yán)防屠宰企業(yè)“兩項制度”落實不到位；五是把屠宰企業(yè)與政府“菜籃子工程”結(jié)合起來，給予項目資金支持，推動屠宰企業(yè)轉(zhuǎn)型升級。