孫繼云 馬小艷 劉歡 王雅杰

臨床常采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法、膠體金免疫層析法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，但存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、靈敏度不理想的問題。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法為近年來新興的檢測(cè)方法，具有簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)勢(shì)[1]。但由于樣品、操作、技術(shù)等各方面的原因，有可能出現(xiàn)假陽性、假陰性的問題，影響診斷的準(zhǔn)確度。我國(guó)上市的HBsAg確認(rèn)試劑盒相對(duì)較少，主要依靠進(jìn)口，檢測(cè)成本較高，加快我國(guó)HBsAg確認(rèn)試劑盒的研發(fā)具有重要意義[2]。本研究對(duì)鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)的HBeAg確認(rèn)試劑盒與已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品Abbott Ireland Diagnostics Division生產(chǎn)的HBeAg確認(rèn)試劑盒的性能進(jìn)行對(duì)比，探討國(guó)產(chǎn) HBsAg確認(rèn)試劑盒在HBV檢測(cè)中的價(jià)值。

資料與方法

一、樣品來源

選取2020年10月至11月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院進(jìn)行檢測(cè)的血清或血漿樣本380份，-20℃儲(chǔ)存，備用，使用前恢復(fù)至室溫，輕輕搖動(dòng)混勻，2周內(nèi)快速完成檢測(cè)及復(fù)測(cè)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：樣本的相關(guān)信息完整，包括患者年齡、性別、臨床診斷或就診科室等；樣本量不少于1 000 μL。

排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重脂血、溶血、渾濁，合并黃疸；微生物污染標(biāo)本，臨床基本信息不完整的樣本；未按要求采集或處理的樣本。

剔除標(biāo)準(zhǔn)：因儀器故障或操作原因，未進(jìn)行正常檢測(cè)的樣本；對(duì)復(fù)測(cè)樣本，以復(fù)測(cè)結(jié)果為準(zhǔn)，并注明復(fù)測(cè)原因；未按試驗(yàn)方案收集、保存或檢測(cè)的樣本。

二、主要試劑

考核試劑：鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)的HBsAg確認(rèn)試劑盒(中和實(shí)驗(yàn)法)，配套試劑為HBsAg檢測(cè)試劑盒(磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法)。

對(duì)比試劑：Abbott Ireland Diagnostics Division HBsAg確認(rèn)試劑盒(化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法) ，配套試劑為HBsAg測(cè)定試劑盒 (化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法)。

第三方試劑：珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的HBsAg確認(rèn)試劑盒(中和試驗(yàn))，配套試劑為HBsAg診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)。

檢測(cè)儀器：儀器為安圖生物Autolumo A2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀。所有試劑盒均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

三、方法

選擇檢測(cè)HBsAg剩余的血清/肝素抗凝血漿的共380份。分別使用配套試劑進(jìn)行復(fù)孔檢測(cè)，如臨床研究機(jī)構(gòu)使用對(duì)比配套試劑進(jìn)行臨床常規(guī)檢測(cè)，則使用對(duì)比配套試劑進(jìn)行單次檢測(cè)。配套試劑2次檢測(cè)結(jié)果均為陽性的為重復(fù)陽性，2次結(jié)果不一致的樣本需進(jìn)行第3次檢測(cè)，用第三方試劑進(jìn)行復(fù)核，3次結(jié)果中有2次檢測(cè)結(jié)果為陽性的則判為重復(fù)陽性。然后對(duì)重復(fù)陽性的樣本用考核試劑與對(duì)比試劑分別進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。

四、觀察指標(biāo)

觀察并記錄考核配套試劑及對(duì)比配套試劑的檢測(cè)結(jié)果；觀察并記錄考核確認(rèn)試劑與對(duì)比確認(rèn)試劑的檢測(cè)結(jié)果；對(duì)2種確認(rèn)試劑盒的診斷效能進(jìn)行對(duì)比分析。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(%)表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一致性分析采用Kappa檢驗(yàn)，結(jié)果為0～1，Kappa>0.75，則表示一致性良好。

結(jié) 果

一、HBsAg配套試劑檢測(cè)結(jié)果

考核配套試劑檢測(cè)結(jié)果的陽性符合率為100%、陰性符合率為100%，總符合率為100%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，2種配套試劑具有一致性(Kappa>0.75)。見表1。

表1 HBsAg配套試劑的檢測(cè)結(jié)果(份)

HBsAg考核試劑確認(rèn)陽性符合率為100% 、未確認(rèn)陽性符合率為0、總符合率為91.58%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，2種確認(rèn)試劑具有一致性(Kappa>0.75)。2份考核試劑未確認(rèn)陽性的樣品經(jīng)第三方試劑檢測(cè)后顯示陽性。見表2。

表2 HBsAg考核試劑與對(duì)比試劑的檢測(cè)結(jié)果(份)

二、HBsAg確認(rèn)試劑盒的診斷效能

考核試劑靈敏度為99.43%，特異度為100，準(zhǔn)確度為100% ，對(duì)比試劑的靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度均為100%。

討 論

血液是HBV的主要傳播途徑，我國(guó)對(duì)于無償獻(xiàn)血者只進(jìn)行HBsAg指標(biāo)的檢測(cè)，假陰性會(huì)導(dǎo)致輸血過程中感染風(fēng)險(xiǎn)加大，因此檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性具有重要意義[3]。

臨床上多采用ELISA檢測(cè)HBsAg，但存在酶標(biāo)試劑易失活，檢測(cè)過程繁瑣，樣本易污染，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)等不足之處[4]。隨著免疫檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法得到應(yīng)用，其具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)[5,6]。但由于原料、技術(shù)等差異，檢測(cè)HBsAg時(shí)可能存在假陽性、假陰性的情況，HBsAg確認(rèn)試劑盒是對(duì)HBsAg初測(cè)結(jié)果進(jìn)行的進(jìn)一步的補(bǔ)充和確定，通過HBsAg確認(rèn)試劑盒對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)，從而輔助乙型肝炎的診斷，能夠提升檢測(cè)的準(zhǔn)確率，降低醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)[7,8]。

目前HBsAg確認(rèn)試劑盒上市的產(chǎn)品主要有Abbott Ireland Diagnostics Division的HBsAg確認(rèn)試劑盒(化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法)、珠海麗珠試劑股份有限公司的HBsAg確認(rèn)試劑盒(中和試驗(yàn))、Siemens Healthcare Diagnostics Inc的HBsAg確認(rèn)試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)等[9,10]。我國(guó)上市的HBsAg確認(rèn)試劑盒廠家相對(duì)較少，難以滿足臨床需求。本研究對(duì)鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)的試劑盒的效能進(jìn)行了考察，與已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品Abbott Ireland Diagnostics Division生產(chǎn)的HBsAg確認(rèn)試劑盒的性能進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明陽性預(yù)測(cè)率、陰性預(yù)測(cè)率、靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度均具有一致性，具有較高的診斷效能，可作為國(guó)外產(chǎn)品的替代品使用。

但各種檢測(cè)試劑盒均有一定的優(yōu)勢(shì)及不足，檢驗(yàn)人員應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適宜的診斷方式。