孫慶雨 楊海明* 徐學(xué)安 郁 鈞 陳媛婧 王志躍,2

(1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009；2.揚(yáng)州大學(xué)農(nóng)業(yè)科技發(fā)展研究院，揚(yáng)州 225009)

維生素E又稱為生育酚或抗不育因子，動(dòng)物自身不能合成維生素E，必須從飼糧中攝取[1]。維生素E具有中和自由基和降低機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的能力，可以提高家禽抗氧化能力[2-3]。維生素E還具有抑制核因子-κB激活以及增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫的功能[4-6]。Liu等[7]發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加30 mg/kg的維生素E可以通過(guò)抑制蛋雞沙門氏菌感染從而改善家禽生產(chǎn)性能，減輕蛋雞的應(yīng)激癥狀。黃路生[8]研究結(jié)果表明，蛋種鴨飼糧添加20～50 mg/kg維生素E能提高蛋種鴨抗氧化能力，并且添加200 mg/kg維生素E可以提高蛋種鴨免疫能力。還有研究表明，飼糧添加17.0～19.9 IU/kg的維生素E可以提高蛋雛鴨的生長(zhǎng)性能、免疫性能和抗氧化功能[9]。飼糧添加100～200 IU/kg維生素E可以提高溆浦鵝體增重，降低料重比和料肝比；添加水平為200 IU/kg時(shí)可以提高血清和肝臟抗氧化酶的活性[10]。適宜的維生素E添加水平對(duì)家禽的健康與生產(chǎn)至關(guān)重要，國(guó)內(nèi)外關(guān)于維生素E對(duì)肝用型鵝的影響已有報(bào)道，但對(duì)肉用型鵝飼糧中維生素E適宜添加水平的研究鮮有報(bào)道。為此，本試驗(yàn)通過(guò)研究飼糧添加不同水平維生素E對(duì)29～63日齡江南白鵝生長(zhǎng)性能、免疫性能和抗氧化性能的影響，確定肉鵝飼糧適宜的維生素E添加水平，豐富我國(guó)肉鵝營(yíng)養(yǎng)需要量數(shù)據(jù)庫(kù)，為肉鵝飼糧的科學(xué)配制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本研究以江南白鵝為研究對(duì)象。選用同一批出雛、健康且體重相近的28日齡江南白鵝公鵝240只，隨機(jī)分為6組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只，分別在玉米-豆粕型飼糧的基礎(chǔ)上添加0(對(duì)照組)、5、10、20、40和80 mg/kg維生素E。維生素E以DL-α-生育酚乙酸酯的形式添加，DL-α-生育酚乙酸酯從揚(yáng)州某生物有限公司購(gòu)得，其有效含量為50%。試驗(yàn)期為35 d。

1.2 試驗(yàn)飼糧

基礎(chǔ)飼糧以玉米和豆粕為主要原料?；A(chǔ)飼糧參考《中國(guó)飼料營(yíng)養(yǎng)成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值表》和本課題組多年的研究結(jié)果進(jìn)行配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

仔鵝采用網(wǎng)上平養(yǎng)，配備乳頭飲水器和料槽。整個(gè)飼養(yǎng)期間自由采食，自由飲水，自然光照，保持舍內(nèi)清潔衛(wèi)生，通風(fēng)良好。

1.4 樣品采集與測(cè)定

1.4.1 飼糧中α-生育酚含量的測(cè)定

按照國(guó)標(biāo)(GB/T 17812—2008)采用高效液相色譜法測(cè)定飼糧中α-生育酚的含量。

1.4.2 生長(zhǎng)性能的測(cè)定

在63日齡，對(duì)每個(gè)重復(fù)進(jìn)行空腹稱重，記錄每個(gè)重復(fù)的體重以及采食量，計(jì)算體重(BW)、平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.3 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

屠宰前翅下靜脈采血7 mL，樣品在室溫中靜置30 min后，3 500 r/min離心10 min，移取血清，放于-20 ℃保存。用UniCel DXC 800 Synchron全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)含量以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)皮質(zhì)醇(cortisol)含量，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.4.4 免疫指標(biāo)的測(cè)定

屠宰時(shí)，取出脾臟、胸腺和法氏囊，取下后用濾紙吸去血漬，剔除脂肪，稱重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)(g/kg)=免疫器官重(g)/

宰前活重(kg)。

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)定血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、干擾素-γ(IFN-γ)含量。試劑盒購(gòu)自上海鈺博生物有限公司。

1.4.5 抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

采用試劑盒測(cè)定血清和肝臟中過(guò)氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性，總抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量，試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以重復(fù)為單位進(jìn)行處理，應(yīng)用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因子方差分析和Duncan氏法多重比較，結(jié)果用平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著。采用折線模型[11]估測(cè)29～63日齡江南白鵝飼糧中維生素E適宜添加水平。擬合方程決定系數(shù)(R2)<0.50的效應(yīng)指標(biāo)不進(jìn)行估測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)29～63日齡江南白鵝生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡仔鵝體重、29～63日齡仔鵝平均日采食量、平均日增重、料重比無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表2 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)29～63日齡江南白鵝生長(zhǎng)性能的影響

2.2 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡仔鵝血清中總蛋白、白蛋白、甘油三酯、總膽固醇的含量以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性無(wú)顯著影響(P>0.05)。與對(duì)照組相比，飼糧添加20 mg/kg維生素E顯著降低血清中皮質(zhì)醇的含量(P<0.05)。

表3 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝血清生化指標(biāo)的影響

2.3 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝血清免疫指標(biāo)以及免疫器官指數(shù)的影響

由表4可知，飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡仔鵝血清中免疫球蛋白G、細(xì)胞白介素-6和干擾素-γ含量無(wú)顯著影響(P>0.05)；與對(duì)照組相比，添加20 mg/kg的維生素E顯著提高仔鵝血清中免疫球蛋白A含量(P<0.05)；添加20、40 mg/kg維生素E顯著提高仔鵝血清中免疫球蛋白M含量(P<0.05)。添加不同水平維生素E對(duì)63日齡仔鵝免疫器官指數(shù)無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表4 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝血清免疫指標(biāo)以及免疫器官指數(shù)的影響

2.4 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加10、20 mg/kg維生素E顯著提高63日齡仔鵝血清中過(guò)氧化氫酶活性(P<0.05)；添加40、80 mg/kg維生素E顯著提高血清中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性(P<0.05)；添加20、40、80 mg/kg維生素E顯著提高血清總抗氧化能力(P<0.05)；添加10、20、40、80 mg/kg維生素E顯著降低血清中丙二醛含量(P<0.05)。

表5 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可知，添加10、20、40、80 mg/kg維生素E顯著提高肝臟中過(guò)氧化氫酶活性(P<0.05)；添加80 mg/kg維生素E顯著提高肝臟中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性(P<0.05)；添加20、40、80 mg/kg維生素E顯著提高肝臟總抗氧化能力以及降低肝臟中丙二醛含量(P<0.05)。

表6 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表7可知，以血清皮質(zhì)醇含量為效應(yīng)指標(biāo)，通過(guò)折線模型估測(cè)29～63日齡江南白鵝飼糧中維生素E的添加水平為19.33 mg/kg。以血清和肝臟中丙二醛含量為效應(yīng)指標(biāo)，通過(guò)折線模型估測(cè)29～63日齡江南白鵝飼糧中維生素E的添加水平分別為12.37、21.73 mg/kg。

表7 折線模型估測(cè)29～63日齡江南白鵝飼糧中維生素E添加水平

3 討 論

3.1 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)29～63日齡江南白鵝生長(zhǎng)性能的影響

維生素E可以通過(guò)減少自由基對(duì)機(jī)體的傷害、提高細(xì)胞和體液免疫，改善家禽的生長(zhǎng)性能。但關(guān)于維生素E對(duì)家禽生長(zhǎng)性能影響的研究結(jié)果并不相同。有研究報(bào)道，飼糧中添加維生素E對(duì)肉雞的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響[12-13]，這與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。但Xie等[14]研究結(jié)果顯示，飼糧中添加10 mg/kg維生素E可以顯著提高1～21日齡北京鴨的生長(zhǎng)性能。Pompeu等[15]研究報(bào)道，飼糧中添加維生素E與肉雞的生長(zhǎng)性能沒(méi)有顯著相關(guān)性，造成研究結(jié)果不同的原因可能是試驗(yàn)飼糧、試驗(yàn)動(dòng)物以及環(huán)境的不同。本試驗(yàn)玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧中的維生素E水平可能已經(jīng)滿足29～63日齡江南白鵝的生長(zhǎng)需要，所以補(bǔ)充維生素E對(duì)其生長(zhǎng)性能沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響。

3.2 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝血清生化指標(biāo)的影響

血液生化指標(biāo)能反映家畜代謝和生長(zhǎng)發(fā)育狀況的變化，對(duì)評(píng)估動(dòng)物健康具有重要意義[16-17]。在飼糧中添加高劑量的維生素E可以顯著提高動(dòng)物血清中總蛋白含量[18-19]。而胡志萍等[20]和武江利等[21]在肉雞和蛋鴨飼糧中分別添加20和50 IU/kg維生素E，結(jié)果其對(duì)血清中總蛋白含量沒(méi)有顯著影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。維生素E對(duì)血清中總蛋白含量影響結(jié)果不同的原因可能是試驗(yàn)中維生素E的添加水平不同。飼糧中維生素E水平為14.91 IU/kg組與4.38 IU/kg組相比，肉雞血清中甘油三酯和總膽固醇的含量無(wú)顯著差異[22]。趙丹陽(yáng)等[23]和Ismail等[12]研究報(bào)道，在飼糧中添加維生素E對(duì)雞血清中膽固醇的含量無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)的結(jié)果與前人研究結(jié)果一致。皮質(zhì)醇是在動(dòng)物身體或者生理應(yīng)激后機(jī)體分泌的一種腎上腺皮質(zhì)激素，可以調(diào)節(jié)機(jī)體生理狀態(tài)以適應(yīng)應(yīng)激環(huán)境[24]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼糧中添加維生素E可以顯著降低血清中皮質(zhì)醇的含量。武江利等[21]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加維生素E有降低籠養(yǎng)蛋鴨血清中皮質(zhì)醇含量的趨勢(shì)。另有研究報(bào)道，在飼糧中添加RRR-α-生育酚琥珀酸酯可以顯著降低肉雞血清中皮質(zhì)醇的含量[25]。維生素E作為抗氧化劑可以清除家禽體內(nèi)的自由基，維持家禽應(yīng)激時(shí)機(jī)體內(nèi)氧化與抗氧化水平的平衡，繼而可以緩解應(yīng)激降低家禽血清中皮質(zhì)醇的含量。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加維生素E對(duì)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性沒(méi)有顯著影響，與胡志萍等[20]研究結(jié)果相一致。血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性變化可以反映肝臟器官健康狀態(tài)，肝臟器官未發(fā)生細(xì)胞變性或損傷時(shí)，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性處于穩(wěn)定范圍[26]。可見(jiàn)，維生素E可以降低血清中皮質(zhì)醇含量，具有緩解仔鵝應(yīng)激的作用。

3.3 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝血清免疫指標(biāo)以及免疫器官指數(shù)的影響

維生素E可以通過(guò)影響淋巴細(xì)胞中細(xì)胞因子的表達(dá)和免疫細(xì)胞增殖來(lái)調(diào)節(jié)家禽免疫[27-28]。免疫球蛋白和細(xì)胞因子是體液免疫重要的組成部分。而胸腺、脾臟和法氏囊是家禽重要的免疫器官[29]。Liu等[30]研究報(bào)道，在飼糧中添加維生素E可以增加蛋雞血清中免疫球蛋白的含量，但對(duì)血清中白細(xì)胞介素、干擾素的含量沒(méi)有顯著影響。Niu等[31]研究發(fā)現(xiàn)，與不添加維生素E的飼糧相比，飼喂含有200 mg/kg維生素E的飼糧可以提高肉雞血清中免疫球蛋白的含量，但對(duì)免疫器官?zèng)]有顯著影響。本試驗(yàn)的結(jié)果與上述結(jié)果相一致，但維生素E對(duì)免疫球蛋白調(diào)節(jié)的機(jī)制尚不清楚。另有研究發(fā)現(xiàn)，在不進(jìn)行脂多糖炎癥誘導(dǎo)反應(yīng)時(shí)，添加RRR-α-生育酚琥珀酸酯對(duì)肉雞血清中白細(xì)胞介素-6以及干擾素-γ含量無(wú)顯著影響；在進(jìn)行脂多糖炎癥誘導(dǎo)反應(yīng)時(shí)，添加RRR-α-生育酚琥珀酸酯可以降低肉雞血清中白細(xì)胞介素-6以及干擾素-γ含量[32]。這可能是因?yàn)樵诎l(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí)α-生育酚可以減少活化巨噬細(xì)胞以及單核細(xì)胞合成促炎細(xì)胞因子[33-34]。由本試驗(yàn)結(jié)果可知，在飼糧中添加20 mg/kg維生素E可以提高仔鵝的免疫能力，有利于維持仔鵝的健康狀態(tài)。

3.4 飼糧添加不同水平維生素E對(duì)63日齡江南白鵝血清和肝臟中抗氧化指標(biāo)的影響

動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的抗氧化防御網(wǎng)由內(nèi)源性的酶性和非酶性抗氧化劑組成。超氧化物歧化酶是第一級(jí)抗氧化防御的主要適應(yīng)性酶，可以把過(guò)氧化物分解為過(guò)氧化氫和氧；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶可以將過(guò)氧化氫轉(zhuǎn)化為水；總抗氧化能力反映了細(xì)胞中的氧化還原(抗氧化劑-氧化劑)平衡[35]。脂質(zhì)過(guò)氧化水平升高會(huì)對(duì)動(dòng)物健康造成影響甚至導(dǎo)致疾病的發(fā)生，而丙二醛是監(jiān)測(cè)機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化情況的重要指標(biāo)之一[36]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼糧中添加維生素E可以提高仔鵝血清和肝臟抗氧化酶活性、總抗氧化能力以及降低脂質(zhì)過(guò)氧化。有研究報(bào)道，添加維生素E可以提高肉雞血清中抗氧化酶的活性、總抗氧化能力以及降低血清中丙二醛的含量[22,25,37]。另有研究表明，在飼糧中添加維生素E可以提高肉雞肝臟中抗氧化酶的活性、總抗氧化能力以及降低肝臟中的丙二醛含量[38]。維生素E作為機(jī)體內(nèi)重要的脂溶性抗氧化劑存在于身體組織的所有細(xì)胞，通過(guò)清除自由基來(lái)減少脂質(zhì)過(guò)氧化[2]，繼而提高機(jī)內(nèi)抗氧化酶的活性以及減少丙二醛的生成。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，玉米-豆粕型飼糧中添加不同水平維生素E對(duì)29～63日齡江南白鵝的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響；綜合各指標(biāo)，29～63日齡江南白鵝飼糧中適宜的維生素E添加水平為20 mg/kg。