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        毛蕊異黃酮對肝硬化大鼠腸黏膜屏障功能的影響及其機(jī)制

        2022-05-11 00:38:04王正根
        關(guān)鍵詞:毛蕊異黃酮低劑量

        劉 琦, 徐 新, 王正根

        (南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院消化內(nèi)科,湖南 衡陽 421001)

        肝硬化常見于慢性肝病的終末期,由多種因素長期干預(yù)引起肝臟變形變硬、肝細(xì)胞壞死和假小葉形成,進(jìn)而造成彌漫性肝損傷[1]。肝硬化晚期會導(dǎo)致多器官或組織的受累,出現(xiàn)消化道出血、繼發(fā)性感染、肝性腦病和肝癌等主要并發(fā)癥。多項研究[2-5]顯示:肝硬化可使腸組織處于缺血缺氧狀態(tài),引起腸組織部分壞死,細(xì)菌移位,導(dǎo)致腸黏膜屏障損傷,而腸道生態(tài)失調(diào)會再次引起免疫刺激加速肝硬化,表明肝硬化與腸黏膜屏障損傷存在相互影響的關(guān)系[2-3]。炎癥是造成腸黏膜屏障損傷的主要 因 素,而Toll 樣 受 體4/核 因 子-κB (Toll-like receptor 4/nuclear factor kappa B,TLR4/NF-κB)信號通路是調(diào)控炎癥最常見的信號通路之一[4]。在炎癥性腸病中,TLR4/NF-κB 信號通路在腸組織中高度活化,并且阻斷該信號通路可改善腸道炎癥反應(yīng)[5]。毛蕊異黃酮是中藥黃芪的主要成分,具有抗菌效果[6]。研究[7]顯示:毛蕊異黃酮可通過調(diào)控整合素β1/NF-κB 通路,抑制NF-κB 表達(dá),從而達(dá)到抗炎效果,對胃黏膜損傷起到保護(hù)作用。然而,毛蕊異黃酮能否對肝硬化致腸黏膜屏障功能損傷具有改善作用,尚不明確。因此,本研究擬構(gòu)建肝硬化大鼠模型,觀察毛蕊異黃酮對肝硬化大鼠腸黏膜屏障功能的影響,并探討其作用機(jī)制,為在臨床上應(yīng)用毛蕊異黃酮治療肝硬化致腸損傷提供科學(xué)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 實驗動物、主要試劑和儀器SPF 級雄性SD大鼠80 只,鼠齡6 周,體質(zhì)量200~230 g,由廣東至遠(yuǎn)生物醫(yī)藥科技有限公司提供,動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(粵)2021-0057;在無特定病原體條件下飼養(yǎng),溫度21 ℃~24 ℃,相對濕度50%~55%,明暗光照各12 h,適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。毛蕊異黃酮[ 高 效 液 相 色 譜 法 (high performance liquid chromatography,HPLC)] ≥98%,貨號:JOT-10389]購自成都普菲德生物技術(shù)有限公司,四氯化碳(CCl4,0.3 mg·L-1,貨號:C119833) 購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司,大鼠白細(xì)胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)(貨號:CSB-E08055r)、大鼠白細(xì)胞介素6 (interleukin-6,IL-6)(貨號:CSB-E04640r) 和 大 鼠 腫 瘤 壞 死 因 子α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)(貨 號:CSB-E11987r)購自武漢華美生物有限公司,D-乳酸(d-lactate,D-LA)(貨號:SBJ-R0031)、二胺氧化酶(diamine oxidase, DAO)(貨 號: SBJ-R0162)、 內(nèi) 毒 素(endotoxin,ET)(貨號:SBJ-R0392) 和酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA) 試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司,TLR4 (編號:sc-293072)、NF-κB p65 (編號:sc-8008)、NF-κB 抑 制 因 子α (IκBα,編 號:sc-1643) 和GAPDH (編號:sc-365062) 抗體購自美國Santa Cruz 公司。電泳儀(型號:164-5056)購自美國Bio-Rad 公司,正置顯微鏡(型號:CX23)購自日本Olympus 公司,全自動生化分析儀(型號:BK-200)購自濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司。

        1.2 實驗動物造模和分組將80 只SD 大鼠隨機(jī)分為對照組(n=12)和造模組(n=68),造模組大鼠采用CCl4聯(lián)合乙醇復(fù)合法誘導(dǎo)肝硬化大鼠模型[8]:造模組大鼠以10%乙醇溶液作為唯一飲用水,并根據(jù)大鼠體質(zhì)量,首次皮下注射劑量為5 mL·kg-150%CCl4- 橄 欖 油 溶 液, 后 續(xù) 劑 量為3 mL·kg-1,每4 d 1 次,連 續(xù)9 周。9 周 內(nèi) 共18 只大鼠死亡,隨機(jī)從造模組中抽取3 只大鼠用于病理組織學(xué)檢測,以肉眼可見肝臟組織結(jié)節(jié)及病理顯示假小葉形成即視為造模成功[9]。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、低劑量毛蕊異黃酮組和高劑量毛蕊異黃酮組,每組12 只。分組后,低和高劑量毛蕊異黃酮組大鼠分別給予5 和20 mg·kg-1毛蕊異黃酮灌胃,對照組和模型組大鼠給予等量生理鹽水灌胃,每天1 次,連續(xù)4 周。

        1.3 生物化學(xué)檢測各組大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(asportate transaminase,AST)活性末次灌胃24 h 后,取各組大鼠腹主動脈血,室溫放置30 min,2600 r·min-1離心10 min,分離血清,按照說明書使用全自動生化儀檢測血清中ALT(U·L-1)和AST(U·L-1)的活性。

        1.4 HE 染色觀察各組大鼠肝臟和回腸組織病理形態(tài)表現(xiàn)取各組大鼠肝臟和回腸組織,將已固定好的組織進(jìn)行修剪,流水沖洗30 min,置于70%、80%、90%、95%和100%酒精中脫水,二甲苯中透明,浸蠟包埋及切片、熱水展片、45 ℃烤片后制備石蠟切片(厚度為6 μm)。石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟、入100% (Ⅰ和Ⅱ)、90%、80%、70%和50%酒精并至水、蒸餾水漂洗,再將切片放入蘇木精水溶液中染色10 min,流水沖洗1 min,1%鹽酸酒精2 s,流水過洗2 s,0.5% 伊紅溶液染色3 min,蒸餾水稍洗2 s,入80%、95%和100%酒精中脫水15 s,二甲苯透明,中性樹膠封固后,觀察大鼠肝臟和回腸組織病理形態(tài)學(xué)。其中回腸組織置于顯微鏡(×100)下隨機(jī)選取5 個視野參考Nadler 標(biāo)準(zhǔn)[10]進(jìn)行雙盲評分,取其平均值,病理評分≥3 分視為腸損傷。

        1.5 ELISA 法檢測各組大鼠血清中D-LA、DAO和ET 水平及回腸組織中炎癥因子水平取0.2 g大鼠回腸組織加入1.8 mL 生理鹽水研磨制備組織勻漿,3800 r·min-1離心20 min,取上清凍存。取50 μL 回腸組織上清和血清,按照ELISA 試劑盒說明 書 進(jìn) 行 操 作,測 定 血 清 中D-LA (mg·L-1)、DAO (U·mL-1) 和ET (EU·mL-1) 水平 及回腸組 織中炎癥因子IL-1β、TNF-α 和IL-6(均為μg·L-1)水平。

        1.6 Western blotting 法檢測各組大鼠回腸組織中TLR4/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平取各組大鼠0.1 g 回腸組織,加入預(yù)冷的RIPA 裂解液提取總蛋白,采用BCA 法檢測蛋白濃度。取30 μg(20 μL) 蛋白進(jìn)行SDS-PAGE 凝膠電泳分離蛋白后轉(zhuǎn)PVDF 膜,5%的脫脂奶粉常溫封閉1.5 h,分別加入TLR4(1∶1000)、NF-κB p65(1∶1000)、NF-κB 抑 制 因 子(NF-κB inhibitor α, IκB α)(1∶1000) 及內(nèi)參GAPDH (1∶1000) 抗體,4 ℃孵育一夜。次日,加入相應(yīng)二抗(1∶10000)常溫孵育1 h,TBST 緩沖液清洗3 次,ECL 試劑發(fā)光顯影。應(yīng)用Image J 進(jìn)行條帶灰度掃描分析,計算目的蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/GAPDH 蛋白條帶灰度值。

        1.7 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。各組大鼠血清中ALT 和AST 活性,D-LA、DAO 和ET 水平,回腸組織病理評分,回腸組織中IL-1β、 TNF-α 和IL-6 水 平, TLR4、NF-κB p65 和IκBα 蛋白表達(dá)水平均符合正態(tài)分布,以±s表示,多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間均數(shù)兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 各組大鼠血清中ALT 和AST 活性與對照組比較,模型組大鼠血清中ALT 和AST 活性明顯升高(P<0.05);與模型組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠血清中ALT 和AST 活性明顯降低(P<0.05),而低劑量毛蕊異黃酮組ALT 和AST活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與低劑量毛蕊異黃酮組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠血清中ALT 和AST 活性明顯降低(P<0.05)。見表1。

        表1 各組大鼠血清中ALT 和AST 活性Tab. 1 Activities of ALT and AST in serum of rats in various groups [n=12,±s,ρβ/(U·L-1)]

        表1 各組大鼠血清中ALT 和AST 活性Tab. 1 Activities of ALT and AST in serum of rats in various groups [n=12,±s,ρβ/(U·L-1)]

        *P<0.05 compared with control group;△P<0.05 compared with model group;#P<0.05 compared with low dose of calycosin group.

        Group Control Model Calycosin Low dose High dose FP ALT 32.93±3.7493.86±6.49*92.10±3.6750.99±5.23△#190.461<0.01 AST 63.46±2.98128.14±7.66*131.07±6.8879.36±4.77△#170.394<0.01

        2.2 各組大鼠肝組織病理形態(tài)表現(xiàn)HE 染色結(jié)果顯示:對照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞排列分布正常,無炎性細(xì)胞浸潤。模型組大鼠彌漫性纖維化形成纖維間隔致肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,形成假小葉,并伴隨著大量炎性細(xì)胞和脂肪變性。與模型組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)較完整,無明顯纖維增生,可見部分炎性細(xì)胞浸潤和脂肪變性;而低劑量毛蕊異黃酮組大鼠肝組織病變情況與模型組一致。與低劑量毛蕊異黃酮組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠肝臟損傷情況明顯改善。見圖1。

        圖1 各組大鼠肝組織病理形態(tài)表現(xiàn)(HE,×100)Fig.1 Pathomorphology of liver tissue of rats in various groups (HE, ×100)

        2.3 各組大鼠血清中D-LA、DAO 和ET 水平與對照組比較,模型組大鼠血清中D-LA、DAO 和ET 水平明顯升高(P<0.05);與模型組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠血清中D-LA、DAO 和ET水平明顯降低(P<0.05),而低劑量毛蕊異黃酮組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與低劑量毛蕊異黃酮組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠血清中D-LA、DAO 和ET 水平明顯降低(P<0.05)。見表2。

        表2 各組大鼠血清中D-LA、DAO 和ET 水平Tab. 2 Levels of serum D-LA, DAO, and ET of rats in various groups (n=12,±s)

        表2 各組大鼠血清中D-LA、DAO 和ET 水平Tab. 2 Levels of serum D-LA, DAO, and ET of rats in various groups (n=12,±s)

        *P<0.05 compared with control group;△P<0.05 compared with model group;#P<0.05 compared with low dose of calycosin group.

        Group Control Model Calycosin Low dose High dose FP D-LA[ρB/(mg·L-1)]3.46±0.6413.38±1.47*12.54±1.697.07±0.93△#70.057<0.01 DAO[λB/(U·mL-1)]0.59±0.112.49±0.45*2.50±0.361.30±0.26△#40.386<0.01 ET[λB/(EU·mL-1)]0.55±0.040.98±0.05*0.96±0.040.76±0.02△#354.622<0.01

        2.4 各組大鼠回腸組織病理形態(tài)表現(xiàn) HE 染色結(jié)果顯示:對照組大鼠回腸組織固有層無水腫現(xiàn)象,絨毛排列整齊,病理結(jié)構(gòu)正常。模型組大鼠回腸組織固有層聚集大量淋巴細(xì)胞,間質(zhì)水腫,上皮結(jié)構(gòu)紊亂,大量絨毛及腺體壞死。與模型組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織結(jié)構(gòu)有所改善,炎性細(xì)胞浸潤和固有層水腫等現(xiàn)象減輕,部分絨毛壞死或斷裂;而低劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織病理形態(tài)表現(xiàn)與模型組一致。見圖2。對照組、模型組、低劑量毛蕊異黃酮組和高劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織病理學(xué)評分分別為(0.33±0.20)、(3.74±0.32)、(3.18±0.35)和(1.79±0.38)分,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=114.702,P<0.01)。與對照組比較,模型組大鼠回腸組織病理學(xué)評分明顯升高(P<0.05);與模型組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織病理學(xué)評分明顯降低(P<0.05),而低劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織病理學(xué)評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與低劑量毛蕊異黃酮組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織病理學(xué)評分明顯降低(P<0.05)。

        圖2 各組大鼠回腸組織病理形態(tài)表現(xiàn)(HE,×100)Fig.2 Pathomorphology of ileum tissue of rats in various groups (HE, ×100)

        2.5 各組大鼠回腸組織中炎癥因子水平與對照組比較,模型組大鼠回腸組織中IL-1β、TNF-α 和IL-6 水平明顯升高(P<0.05);與模型組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織中IL-1β、TNF-α 和IL-6 水平明顯降低(P<0.05),而低劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織中上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與低劑量毛蕊異黃酮組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織中IL-1β、TNF-α 和IL-6 水平明顯降低(P<0.05)。見表3。

        表3 各組大鼠回腸組織中IL-1β、TNF-α 和IL-6 水平Tab. 3 Levels of IL-1β、TNF-α and IL-6 in ileum tissue of rats in various groups [n=12,±s, ρβ/(μg·L-1)]

        表3 各組大鼠回腸組織中IL-1β、TNF-α 和IL-6 水平Tab. 3 Levels of IL-1β、TNF-α and IL-6 in ileum tissue of rats in various groups [n=12,±s, ρβ/(μg·L-1)]

        *P<0.05 compared with control group;△P<0.05 compared with model group;#P<0.05 compared with low dose of calycosin group.

        Group Control Model Calycosin Low dose High dose FP IL-1β 350.44±16.74635.68±19.87*634.93±17.03477.24±15.14△#764.723<0.01 TNF-α 49.67±3.53157.19±4.59*158.10±5.2689.52±5.40△#630.948<0.01 IL-651.31±7.19123.98±10.40*125.68±10.7676.28±7.38△#195.623<0.01

        2.6 各組大鼠回腸組織中TLR4/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平與對照組比較,模型組大鼠回腸組織中TLR-4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.05),IκBα 蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05);與模型組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織中TLR-4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05),IκB α 蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.05),而低劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織中上述各指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與低劑量毛蕊異黃酮組比較,高劑量毛蕊異黃酮組大鼠回腸組織中TLR-4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05),IκBα 蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)。見圖3 和表4。

        表4 各組大鼠回腸組織中TLR4/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平Tab. 4 Expression levels of TLR4/NF-κ B signaling pathway related proteins in ileum tissue of rats in various groups (n=12,±s)

        表4 各組大鼠回腸組織中TLR4/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平Tab. 4 Expression levels of TLR4/NF-κ B signaling pathway related proteins in ileum tissue of rats in various groups (n=12,±s)

        *P<0.05 compared with control group;△P<0.05 compared with model group;#P<0.05 compared with low dose of calycosin group.

        Group Control Model Calycosin Low dose High dose FP TLR-40.47±0.131.13±0.24*1.09±0.200.64±0.18△#14.837<0.01 NF-κB p650.25±0.101.34±0.29*1.31±0.270.50±0.19△#30.726<0.01 IκBα 0.63±0.090.21±0.11*0.22±0.100.49±0.05△#27.314<0.01

        圖3 各組大鼠回腸組織中TLR4/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)電泳圖Fig. 3 Electrophoregram of expressions of TLR4/NFκB signaling pathway related proteins in ileum tissue of rats in various groups

        3 討論

        前期研究[8-10]顯示:在中醫(yī)學(xué)中肝硬化由濕熱所致,肝氣郁積,影響脾胃,致血行不暢、脈絡(luò)阻塞,造成積聚或癥癜,后期則出現(xiàn)水蠱,提示肝硬化引起消化不良,導(dǎo)致腸道內(nèi)細(xì)菌等有毒物質(zhì)堆積,導(dǎo)致腸黏膜損傷,機(jī)體免疫力下降。臨床研究[11-12]表明:50%的肝硬化患者表現(xiàn)出一種或多種癥狀,如腹水、因肝性腦病引起的不同程度的意識模糊和靜脈曲張或細(xì)菌感染引起的急性胃腸出血等。由于肝硬化發(fā)病機(jī)制多樣,臨床常通過檢測ALT 和AST 活性及組織活檢來確診疾病。且在動物實驗中,CCl4聯(lián)合乙醇復(fù)合法誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型在病理生理等方面可完全模擬人肝硬化誘發(fā)腸道疾病,結(jié)果顯示:血清中ALT 和AST 活性升高,肝組織出現(xiàn)假小葉,腸組織絨毛大量壞死,腸道內(nèi)炎癥和有毒物質(zhì)爆發(fā),產(chǎn)生大量腹水[13],與本研究中模型組結(jié)果一致,提示模型制備成功。研究[14-15]顯示:毛蕊異黃酮灌服單向腸灌流模型大鼠發(fā)現(xiàn)其吸收機(jī)制為主動轉(zhuǎn)運,且在小腸中吸收最好,能夠在一定程度上保證腸道自然生理狀態(tài)。研究[14]證實:毛蕊異黃酮可上調(diào)IκBα 來抑制由缺血再灌注引起的NF-κB 信號通路的激活,降低腦組織炎癥因子,從而保護(hù)腦組織。但毛蕊異黃酮在肝硬化中能否發(fā)揮保護(hù)腸道的作用,目前還未見相關(guān)文獻(xiàn)報道。本研究采用高劑量毛蕊異黃酮干預(yù)后,肝組織和腸組織損傷減輕,肝酶含量降低,并且腸組織中有害物質(zhì)和炎癥因子減少,同時抑制了TLR4/NF-κB 信號通路,初步表明毛蕊異黃酮對肝硬化引起的腸損傷有改善作用,可能與腸黏膜屏障、炎癥和TLR4/NF-κB 信號通路的調(diào)控有關(guān)。

        腸黏膜屏障是阻止細(xì)菌和有害物質(zhì)進(jìn)入血液循環(huán)及其他組織的第一道防線。腸黏膜屏障受損后,氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)不能及時被黏膜吸收,代謝產(chǎn)物堆積,引起腸道通透性的增加(漏腸)和細(xì)菌的易位,促進(jìn)微生物代謝產(chǎn)物通過腸腔穿過腸黏膜屏障到達(dá)肝臟,導(dǎo)致膽管酸代謝受損,促進(jìn)全身炎癥和腸道運動障礙[16]。研究[17-19]顯示:非酒精性脂肪性肝病小鼠攝入果糖,可引起D-LA 活性增加,導(dǎo)致腸道滲漏和內(nèi)毒素血癥;且在缺血性結(jié)腸炎患者血清中D-LA、DAO 和ET 水平升高。急性失代償性肝硬化中存在腸道炎癥,通過評估糞便細(xì)胞因子譜以及其他標(biāo)志物,如D-LA、脂肪酸結(jié)合蛋白-2和糞鈣保護(hù)素,從而確定腸道失調(diào)可影響腸道屏障完整性[20]。表明D-LA、DAO 和ET 是造成腸黏膜屏障損傷的標(biāo)志物。研究[21]顯示:毛蕊異黃酮對斷奶仔豬由于多種應(yīng)激源產(chǎn)生的胃腸道感染具有治療作用,可治療志賀氏菌和腸道致病菌大腸桿菌等細(xì)菌引起的疾病和感染,并且具有增強斷奶仔豬腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)平衡的潛力。本研究結(jié)果顯示:高劑量毛蕊異黃酮組大鼠血清中D-LA、DAO 和ET 水平明顯降低,腸絨毛趨于正常,表明毛蕊異黃酮可減少體內(nèi)有害細(xì)菌和毒素蓄積,提高機(jī)體對有害物質(zhì)的消除能力,從而保護(hù)腸黏膜屏障。

        TLR-4/NF-κB 信號通路是炎癥的調(diào)節(jié)通路[22]。 先天免疫系統(tǒng)通過病原體識別受體(PPRs) 特異性識別PAMPs,從而有效啟動免疫反應(yīng)。TLR 作為PPRs 家族中的一員,是先天免疫系統(tǒng)中最重要的受體之一。TLR-4 是研究中最先發(fā)現(xiàn)的TLR,受到刺激后TLR-4 高表達(dá),IκBα 降解,NF-κB p65 大 量釋放,從而誘導(dǎo)IL-1β、TNF-α 和IL-6 等 下 游 炎 癥 因 子 高 表 達(dá)[23]。研 究[24-25]顯 示:炎癥性腸病受多種分子機(jī)制調(diào)控,目前認(rèn)為引起炎癥級聯(lián)瀑布反應(yīng)是導(dǎo)致腸黏膜損傷的核心原因,在膿毒癥誘導(dǎo)的腸屏障功能障礙大鼠腸組織中TLR-4/NF-κB 通路被明顯激活,促進(jìn)炎癥細(xì)胞釋放更多的炎癥介質(zhì)。此外,炎癥介質(zhì)進(jìn)一步加重了腸黏膜屏障功能的損傷,從而導(dǎo)致更多的致病菌和原發(fā)性血小板增多癥(ET)進(jìn)入血液。CHAO 等[26]研究顯示:毛蕊異黃酮明顯抑制促炎細(xì)胞因子mRNA 的表達(dá),降低髓過氧化物酶(MPO)活性,并且明顯抑制NF-κB 通路和JNK 的磷酸化,維持腸黏膜的完整,從而治療結(jié)腸炎。為進(jìn)一步探討毛蕊異黃酮對肝硬化大鼠腸黏膜保護(hù)作用的可能機(jī)制,本研究檢測TLR-4/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平及其下游炎癥因子,結(jié)果顯示:采用高劑量毛蕊異黃酮干預(yù)后,肝硬化大鼠回腸組織中TLR-4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平及IL-1β、TNF-α 和IL-6炎癥因子水平明顯降低,IκBα 蛋白表達(dá)水平明顯升高,表明毛蕊異黃酮通過下調(diào)回腸組織中TLR-4/NF-κB 信號通路相關(guān)因子的活性,進(jìn)而降低炎癥因子的表達(dá),從而減輕肝硬化大鼠腸黏膜屏障損傷。

        綜上所述,毛蕊異黃酮能夠改善肝硬化大鼠腸黏膜屏障損傷并抑制TLR4/NF-κB 信號通路。然而,毛蕊異黃酮是否對TLR4/NF-κB 信號通路靶向調(diào)控還不完善,后續(xù)研究還應(yīng)結(jié)合使用TLR4/NF-κB 信號通路抑制劑進(jìn)行動物實驗探討。

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