鐘慧芝 檀大羨 李征 黃霞梅

1.廣西壯族自治區(qū)生殖醫(yī)院 廣西 南寧 530029；2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 廣西 南寧 530021

在過去幾十年里，男性精液質(zhì)量成下降逐漸趨勢，而男性不育發(fā)病率卻上升趨勢，這已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。盡管男性精液質(zhì)量逐年下降的原因還未能明確，但越來越多的研究表明不良的生活習(xí)慣，環(huán)境因素等會(huì)影響的男性精液質(zhì)量[1]。

有研究表明，不同工作時(shí)間長度及不同工作壓力會(huì)對人的免疫系統(tǒng)和心血管等方面造成影響[2-4]。然而，工作壓力對男性精液質(zhì)量存在的影響，目前尚未清楚。男性精液質(zhì)量是評價(jià)男性生育能力的一項(xiàng)重要指標(biāo)，同時(shí)也是人類輔助生殖技術(shù)（ART）成功與否的重要因素之一[5,6]。因此，本研究選取我院就診的廣西地區(qū)男性不育患者為研究對象，比較在不同程度的工作壓力下，患者精液常規(guī)參數(shù)、精子形態(tài)和精子頂體酶活性是否存在差異，進(jìn)而判斷工作壓力對精液質(zhì)量是否存在影響，為男性不育患者的治療提供相關(guān)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2017年7月至2019年12月來我院就診的795例廣西地區(qū)男性不育患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：男性患者與其配偶在未避孕的情況下進(jìn)行正常性生活1年仍為懷孕，排除性功能障礙、無精子癥、遺傳病、生殖系統(tǒng)嚴(yán)重疾病以及吸煙 酗酒不良生活習(xí)慣的患者。

1.2 問卷調(diào)查

設(shè)計(jì)調(diào)查問卷，對研究對象進(jìn)行問卷調(diào)查和詳細(xì)的病歷資料收集。工作壓力問題內(nèi)容包括：1覺得手上工作太多，無法完成；2感覺時(shí)間不夠用，必須爭分奪秒；3感覺沒有娛樂時(shí)間，只想著工作；4想著工作的事情，夜晚難以入睡；5感覺不能完美的完全工作；6感覺未能被上司和同事認(rèn)可；7平時(shí)容易煩躁生氣；8與人交流時(shí)，喜歡打斷別人說話；9擔(dān)心工作做不好，會(huì)被開除；10擔(dān)心自己的經(jīng)濟(jì)狀況。每個(gè)問題都有從未、偶爾、經(jīng)常3個(gè)選項(xiàng)，其對應(yīng)的分值分別是0分、1分、2分，將分值總和分為3個(gè)檔次：0～6分、7～12分和＞12分，分別對應(yīng)3個(gè)等級的工作壓力：無壓力、壓力小和壓力大，并將所有研究對象按照工作壓力大小分為3組，即Ⅰ組，無工作壓力；Ⅱ組，工作壓力??；Ⅲ組，工作壓力大。

1.3 精液的采集和分析

精液常規(guī)分析按照世界衛(wèi)生組織（WHO）所規(guī)定的方法和標(biāo)準(zhǔn)檢測要求患者禁欲2～7天，通過手淫方式取精，將收集到的精液標(biāo)本放入37℃水浴箱中等待液化。采集的精液標(biāo)本在1h內(nèi)完成常規(guī)分析。采用西班牙計(jì)算機(jī)輔助分析系統(tǒng)（CASA）對精子濃度、精子活動(dòng)率、精子前向運(yùn)動(dòng)等參數(shù)進(jìn)行分析，同時(shí)測量室精液量。

1.4 精子形態(tài)

采用Diif-Quik 快速染色法，按照試劑盒說明對精子標(biāo)本進(jìn)行染色。在油鏡下觀察精子形態(tài)，觀察精子數(shù)不少于200條，并計(jì)算出精子正常形態(tài)百分率。

1.5 精子頂體酶活性的檢測

精子頂體酶活性檢測按照深圳華康生物醫(yī)學(xué)工程有限公司頂體酶試劑盒說明書中的改良Kennedy法進(jìn)行：將精液標(biāo)本充分混勻并調(diào)節(jié)精液濃度使得每個(gè)反應(yīng)管的精子個(gè)數(shù)為7.5106 條，并且每份標(biāo)本設(shè)置反應(yīng)管和對照管，將抑制劑和反應(yīng)液同時(shí)加入反應(yīng)管和對照管內(nèi)，并在對照管內(nèi)先加入反應(yīng)終止液，將反應(yīng)管和對照管置于24℃水浴箱中反應(yīng)1h后向反應(yīng)管加入終止液，使其終止反應(yīng)并用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色，計(jì)算出結(jié)果。正常精子頂體酶活性為48.2～218.7μU/106。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS23.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)為 P＜0.05。

2．結(jié)果

2.1 患者的工作壓力及精液常規(guī)參數(shù)、精子形態(tài)和精子頂體酶活性比較

通過對795例患者進(jìn)行的工作壓力問卷調(diào)查得出，其中Ⅰ組有69例，占研究人數(shù)的8.7%；Ⅱ組有386例，在研究人數(shù)的48.6%；Ⅲ組有340例，占研究人數(shù)的42.7%。統(tǒng)計(jì)顯示，三組患者年齡、精液量、精子濃度和精子正常形態(tài)百分率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但Ⅲ組患者的精子活動(dòng)率、前向運(yùn)動(dòng)精子、精子頂體酶活性顯著低于Ⅰ組和Ⅱ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，如表1所示 。

表1 工作壓力程度精液參數(shù)比較（±s）

*表示P值＜0.05

Ⅰ組 Ⅱ組 Ⅲ組 F值 P值N=69 N=386 N=340年齡（歲） 34.45±4.47 34.85±5.94 34.08±5.47 1.7 0.183精液量（ml） 2.98±1.28 2.98±1.42 2.91±1.55 0.19 0.822精子濃度（106/ml） 67.58±57.82 63.85±50.80 65.80±55.06 0.208 0.812精子活動(dòng)率（%） 51.91±16.47 48.92±16.34 43.69±12.96 15.06 0.000*前向運(yùn)動(dòng)精子（%） 43.63±20.84 38.99±15.80 34.77±15.53 22.54 0.000*頂體酶活性（μU/106） 137.61±27.78 124.70±43.21 115.77±42.91 9.24 0.000*精子正常形態(tài)（%） 4.50±2.04 4.26±2.1 4.25±1.8 0.66 0.510

2.2 各組中正常睡眠患者與難以入睡患者精液參數(shù)的比較

通過統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示，Ⅲ組患者相比于Ⅰ、Ⅱ組患者，其夜晚難以入睡的比例明顯增高，所占各組比例分別為26.8%、15.9%和15.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。分別對各組正常睡眠患者與難以入睡患者精液參數(shù)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示相比于正常入睡的患者，難以入睡患者的精子活動(dòng)率、前向運(yùn)動(dòng)精子和精子正常形態(tài)都成下降趨勢，并且Ⅰ組和Ⅲ組中，難以入睡患者精子正常形態(tài)顯著低于正常入睡的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），如表2所示。

表2 3個(gè)組中正常睡眠患者與難以入睡患者精液參數(shù)的比較(±s)

表2 3個(gè)組中正常睡眠患者與難以入睡患者精液參數(shù)的比較(±s)

*表示P值＜0.05

精子正常形態(tài)（%）Ⅰ組N=69 正常睡眠 58 34.94±4.54 2.81±0.89 67.42±62.72 52.47±17.29 44.34±16.69 138.89±29.58 4.78±2.03難以入睡 11 31.91±3.17 3.87±2.35 68.40±19.17 49.89±14.29 40.83±14.86 131.00±14.56 3.82±1.81 t值 2.115 -1.475 -0.051 0.441 0.649 0.86 2.173 P值 0.038 0.169 0.959 0.661 0.519 0.393 0.033*Ⅱ組N=386 正常睡眠 326 35.29±5.89 2.95±1.35 62.70±53.25 52.31±12.35 43..29±12.70 123.92±43.94 4.33±2.24難以入睡 60 32.48±5.74 3.21±1.78 70.21±34.16 48.3.0±16.91 39.30±15.81 129.77±37.99 3.93±1.53 t值 3.409 -1.292 -1.052 1.753 1.846 -0.107 1.734 P值 0.001 0.197 0.293 0.080 0.066 0.228 0.086Ⅲ組N=340 正常睡眠 249 34.20±5.36 2.95±1.50 68.21±58.76 43.85±13.38 34.42±12.18 120.22.±48.31 4.4±1.86難以入睡 91 33.75±5.78 2.82±1.47 59.15±42.80 43.26±11.78 33.03±10.01 114.12±40.73 3.36±1.74 t值 0.665 0.681 1.345 0.373 0.973 1.16 2.628 P值 0.506 0.490 0.180 0.709 0.331 0.248 0.009*N年齡（歲） 精液量（ml） 精子濃度（106/ml）精子活動(dòng)率（%）前向運(yùn)動(dòng)精子（%）頂體酶活性（μU/106）

3 討論

精液常規(guī)檢查已成為評估男性生育能力的一項(xiàng)最直接和最常用的指標(biāo)，精液質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響夫婦雙方自然受孕的成功率[7-9]。此外，精液質(zhì)量的優(yōu)劣同樣會(huì)對ART的結(jié)局造成影響[6]。然而，男性精液質(zhì)量會(huì)受到吸煙，飲酒，熬夜等不良行為習(xí)慣以及諸多環(huán)境因素的影響[10,11]。通過本次研究，我們發(fā)現(xiàn)在所研究的對象中，將近一半的研究對象存在有工作壓力大的現(xiàn)象。并且，隨著工作壓力水平的增加，男性不育患者精子的活動(dòng)率、前向精子百分率以及精子頂體酶活性呈下降的趨勢。這一結(jié)果與以往的研究結(jié)果是相似的。例如，有研究表明男性在壓力較大的環(huán)境中生活，其精子活力會(huì)降低[12]，Bigelow等研究發(fā)現(xiàn)不孕不育夫婦人群中，男性患者的精液質(zhì)量與工作壓力水平呈負(fù)相關(guān)水平{58}。Jurewicz等[13]研究也發(fā)現(xiàn)工作壓力與精子直線速率、精子平均路徑速率成負(fù)相關(guān)，而與精子DNA碎片成正相關(guān)。還有研究顯示，工作壓力水平只影響男性的精液濃度和精子總數(shù)，而不影響精子的活率及精子前向運(yùn)動(dòng)[14]。本次的研究并未發(fā)現(xiàn)工作壓力水平對精液濃度及精子總數(shù)造成影響。這一結(jié)果很可能是由于本次的研究人群與之前的研究所選擇的人群不同所導(dǎo)致，本次所選擇的研究對象為男性不育患者，而Zou[14]等人所選擇研究對象為健康男性。工作壓力水平增加對精液質(zhì)量造成負(fù)面影響，可能的原因是在高水平的工作壓力下，人體內(nèi)分泌系統(tǒng)很大的幾率會(huì)造成紊亂[15]。有研究報(bào)道，在受到外界心里壓力的刺激下，體內(nèi)糖皮質(zhì)激素水平會(huì)大大增加，高水平的糖皮質(zhì)激素會(huì)抑制睪丸中支持細(xì)胞合成和分泌睪酮，進(jìn)而影響精子的正常發(fā)生，同時(shí)，高水平的糖皮質(zhì)激素還會(huì)導(dǎo)致支持細(xì)胞和早期生精細(xì)胞的凋亡[16,17]。

此外，本次研究還發(fā)現(xiàn)隨著工作壓力水平的增加男性不育患者夜晚難以入睡的比例也顯著增加。有研究表明，工作壓力是影響睡眠質(zhì)量的重要因素[18]。而低質(zhì)量的睡眠質(zhì)量會(huì)對人體諸多方面造成負(fù)面影響,例如高質(zhì)量的睡眠是維持和修復(fù)機(jī)體的免疫功能的重要環(huán)節(jié)，而低質(zhì)量的睡眠不僅會(huì)大大增加患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，而且還會(huì)對新陳代謝和神經(jīng)系統(tǒng)造成負(fù)面影響[2,3]。此外，許多研究還顯示，低質(zhì)量的睡眠對生殖系統(tǒng)也會(huì)造成負(fù)面影響。例如睡眠受到干擾的小鼠，其局部生精小管間質(zhì)減少，生精上皮細(xì)胞變薄，精子活率及精子正常形態(tài)率降低[19,20]。此外，還有研究報(bào)道相比于熬夜人群，早睡的男性人群會(huì)有更好精液質(zhì)量，而長期睡眠時(shí)間不足的男性，其精子濃度、精子活率及其精子正常形態(tài)率顯著下降，精子DNA碎片明顯增高[21,22]。本次研究也得到相似的結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)3個(gè)組的研究對象中，夜晚難以入睡患者相比于正常入睡患者，其精子活動(dòng)率、前向精子百分率和精子正常形態(tài)百分率都呈下降趨勢，其中精子正常形態(tài)百分率顯著降低。這一現(xiàn)象表明，睡眠質(zhì)量很可能是影響精子形態(tài)的重要因素，因?yàn)楸敬窝芯堪l(fā)現(xiàn)，只有夜晚難以入睡患者的精子正常形態(tài)顯著低于正常入睡患者的精子正常形態(tài)，并未因?yàn)楣ぷ鲏毫Τ潭鹊牟煌霈F(xiàn)不同結(jié)果。因此，工作壓力不僅對精液質(zhì)量造成負(fù)面影響，同時(shí)還對睡眠質(zhì)量造成負(fù)面影響，而睡眠質(zhì)量很可能通過另一種與工作壓力不同的機(jī)制對精液造成負(fù)面的影響，這一現(xiàn)象有待我們進(jìn)一步研究。

本次研究也存在著不足，如樣本量的不足，研究的對象僅限于來我院就診的男性不育患者，而沒能獲健康男性數(shù)據(jù)，此外，本研究是通過調(diào)查問卷的形式取得研究對象的工作壓力情況，而未能完全避開其他一些混雜因素的影響，如不育患者本身可能存在著一定的心里壓力，社會(huì)壓力等，這些壓力很可能都會(huì)對工作壓力造成影響，因此會(huì)對所獲取的數(shù)據(jù)造成一定的影響。

綜述所述，盡管本次研究存在著一些不足的地方，但是通過本次研究可以發(fā)現(xiàn)本地區(qū)男性不育患者中，認(rèn)為工作壓力大的患者比例較多，并且隨著工作壓力水平的增加，患者精子活動(dòng)率、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率和精子頂體酶活性均成下降趨勢；同時(shí)，隨著工作壓力水平的增加難以入睡患者比例也隨之增加，嚴(yán)重影響患者睡眠質(zhì)量。而低質(zhì)量的睡眠進(jìn)一步對患者的精液質(zhì)量造成負(fù)面影響。通過這一研究，為今后男性不育患者的治療提供新思路和理論依據(jù)。