武德能?金星

摘要：目的：通過鹽酸坦洛新給予BOO造模大鼠，觀察鹽酸坦洛新對大鼠膀胱逼尿肌失代償期的肌條影響。方法：雄性SD大鼠60只分成5組，即試驗(yàn)組（鹽酸坦洛新緩釋片）、模型組、空白組。用激素法將試驗(yàn)組與模型組造模膀胱梗阻失代償期后并灌藥，觀察大鼠逼尿肌條中NGF、bFGF的OD值，探討鹽酸坦洛新是否改善BOO后膀胱逼尿肌功能的生理及病理改變。結(jié)果： 試驗(yàn)組較模型組NGF的OD值降低，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗(yàn)組較模型組bFGF的OD值增加，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：鹽酸坦洛新對膀胱梗阻引起的逼尿肌失代償期的肌條損傷后有修復(fù)與功能恢復(fù)機(jī)制。

關(guān)鍵詞：鹽酸坦洛新;膀胱出口梗阻;NGF;bFGF

【中圖分類號】 R283 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）08--02

隨著社會的進(jìn)步、醫(yī)學(xué)診療水平的提高，我國老年人日趨增多，BPH將成為影響我國老年男性健康的最重要的疾病之一。BPH可導(dǎo)致膀胱出口梗阻（BOO），而梗阻時間較長引起逼尿肌失代償，也就是逼尿肌肌條萎縮并變薄，伸縮功能下降所致，逼尿肌收縮功能嚴(yán)重受損后影響膀胱排尿功能，導(dǎo)致膀胱殘余尿增多。將使BPH的BOO癥狀進(jìn)一步加重。因此本文對鹽酸坦洛新對失代償期大鼠的逼尿肌肌條的效應(yīng)進(jìn)行研究，現(xiàn)報告如下：

一、研究方法：

1.1 實(shí)驗(yàn)動物：動物清潔級雄性SD大鼠60只，鼠齡10～12周，體重200～240g，由桂林醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.2 造模方法：有關(guān)文獻(xiàn)[1]激素法造模：SD大鼠60只適應(yīng)性喂養(yǎng)7d，編號稱質(zhì)量，腹腔注射0.2%的戊巴比妥鈉（1mL/kg） 麻醉，仰臥位固定，碘酒、75%酒精消毒。陰囊正中部選為手術(shù)切口，長約1-2cm，擠壓出一側(cè)睪丸，逐層分離睪丸，于睪丸頭部結(jié)扎血管及脂方組織后切除睪丸。確認(rèn)無出血后將脂肪組織及附睪送回陰囊內(nèi)。同法切除對側(cè)睪丸，逐層縫合?？瞻捉M（假手術(shù)組）隨機(jī)分出15只，操作同前，但不結(jié)扎血管、不摘除睪丸。術(shù)后青霉素一次5萬單位抗感染。術(shù)后觀察飼養(yǎng)一周。除空白組以外大鼠在每天皮下注射丙酸睪酮0.005g/kg，連續(xù)給藥20d。

1.3 造模評價：隨機(jī)取3只假手術(shù)組和3只模型組SD大鼠檢測模型成功與否，頸動脈放血處死動物，仔細(xì)分離各葉前列腺，用濾紙吸干，置平皿中加蓋，電子天平稱重，計算前列腺指數(shù) （prostateindex，PI）。之后均取膀胱組織行HE染色，檢測膀胱梗阻失代償期模型[2]成功與否。若不成功，調(diào)整藥量，一周后再次評價。

前列腺指數(shù)（PI）=前列腺質(zhì)量（mg）/大鼠體質(zhì)量（g）

1.4 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法：確定膀胱梗阻失代償期造模成功后，按照隨機(jī)分組的原則將造模后的大鼠分成5組，即試驗(yàn)組（鹽酸坦洛新緩釋片）、模型組、空白組。

參考動物實(shí)驗(yàn)學(xué)[3]有關(guān)內(nèi)容計算出SD大鼠一天灌胃劑量，模型組及空白組等量生理鹽水灌胃。

按體表面積直接計算法：大鼠灌胃量=成年人藥物劑量g/kg×成年人體重（70kg）/大鼠體重（200g）×人/大鼠體表折算劑量比值（0.018）

1.5標(biāo)本提取與指標(biāo)測定：灌胃治療28天后稱重、取血液并將大鼠斷頸處死解體，血清室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心;切割膀胱后，稱取重量。均取膀胱右側(cè)壁頂部尿肌肌條，加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，離心20分鐘左右。（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

ELISA試劑盒測定方法：應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測定標(biāo)本中NGF及bFGF水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入NGF、bFGF抗原、抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

1.6 統(tǒng)計方法：所有統(tǒng)計用SPSS統(tǒng)計軟件處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，兩兩比較用t檢驗(yàn)。采用SPSSl9.0統(tǒng)計學(xué)軟件單因數(shù)方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

1.7數(shù)據(jù)分析：分析三組離體逼尿肌肌條OD值統(tǒng)計結(jié)果差異，三組膀胱逼尿肌肌條中NGF、bFGF的含量濃度有無差異，

二.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

三、討論：

隨著醫(yī)療技術(shù)的提高，我國老年化日趨嚴(yán)峻，且老年男性健康也是越來越關(guān)注的問題，其中BPH是老年男性最重要的疾病之一。BPH所致BOO，是由前列腺腺體增生與及膀胱逼尿肌功能受損等因素引起，前列腺增生的臨床癥狀是由前列腺和膀胱間復(fù)雜的相互作用而引起的，主要表現(xiàn)為膀胱刺激癥狀和梗阻癥狀以及梗阻的并發(fā)癥[6]，梗阻癥狀有排尿躊躇、排尿費(fèi)力、排尿時間延長、尿線變細(xì)、尿流無力、間斷性排尿、終末余瀝、尿潴留及充盈性尿失禁，逼尿肌收縮功能受損是產(chǎn)生上述癥狀的主要原因。目前認(rèn)為[16]膀胱出口部分梗阻后引起膀胱逼尿肌功能改變分兩個階段：（1）代償期：為早期癥狀，此期膀胱逼尿肌肥厚，收縮力增強(qiáng)，造成臨床上尿頻、尿急等癥狀;（2）失代償期：因長時間的梗阻可導(dǎo)致膀胱逼尿肌功能受損，進(jìn)入失代償期，此期膀胱張力下降，逼尿肌收縮力減弱，臨床上可出現(xiàn)尿潴留、上尿路積水等癥狀。失代償期逼尿肌發(fā)生離心性肥厚，纖維成分增多致膀胱逼尿肌功能下降，收縮力下降，順應(yīng)性改變，導(dǎo)致膀胱殘余尿增多，腎功能因此而不同程度受損，即使解除梗阻術(shù)后膀胱逼尿肌功能恢復(fù)率僅68.9%[17]。BPH通過BOO引起逼尿肌失代償，逼尿肌萎縮變薄，收縮力下降所致。值得注意的是BPH者常引起膀胱壁肥厚，但其逼尿肌收縮功能卻下降[18]。而導(dǎo)致尿肌收縮功能受損，完整的逼尿肌功能是指整個膀胱逼尿肌協(xié)同一致，快速而有力的收縮，是排空膀胱的基礎(chǔ)。尿肌收縮功能受損影響膀胱排空功能，導(dǎo)致殘余尿增多。將使BPH的排尿困難癥狀進(jìn)一步加重。

膀胱梗阻屬祖國醫(yī)學(xué)“癃閉”的范疇，對于癃閉的病因病機(jī)，《內(nèi)經(jīng)》中多有論述，《素問·靈蘭秘典論》：“膀胱者，川都之官，津液藏焉，氣化則能出矣。膀胱的生理功能為貯藏尿液，氣化功能正常則能排出尿液。癃閉的基本病機(jī)為膀胱與三焦的氣化失常。因此，膀胱氣化功能發(fā)生紊亂，則可出現(xiàn)如《素問·宣明五氣篇》所記載“膀胱不利為癃，不約為遺溺”。五苓散乃仲景方，見于《傷寒論》，是臨床上的治療太陽蓄水證的代表方。具有滲濕利水、溫陽化氣的作用，是治療因膀胱氣化失司，引起小便不利諸證的良方。國內(nèi)外對五苓散的藥理研究頗多，賈氏[12]認(rèn)為五苓散是臨床治療水濕內(nèi)停的常用方。根據(jù)多年臨床實(shí)踐，證明此方既能利水，又能布津，具有雙相調(diào)節(jié)作用。鄭氏等經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[13]，五苓散含藥血清可增強(qiáng)正常家兔離體泌尿系平滑肌的張力和活動力。另有資料證明，某些中藥配伍使用可產(chǎn)生協(xié)同作用，如五苓散的利尿作用，較其任何單味藥的作用都強(qiáng)[14]。日本學(xué)者原中琉璃子等認(rèn)為[15]，中藥利尿的效果不亞于西藥利尿劑。

五苓散作為主治“太陽經(jīng)腑同病之蓄水證”的經(jīng)方，歷經(jīng)數(shù)代而不衰，充分說明其療效的肯定，方含茯苓、豬苓、白術(shù)、澤瀉、桂枝五味，具有滲濕利水、溫陽化氣的作用，是治療因膀胱氣化失司，引起小便不利諸證的良方。方中豬苓、茯苓淡滲，通膀胱而利水;澤瀉甘淡性寒，直達(dá)膀胱，利水滲濕，泄膀胱之水，使小便通利，正如吳謙《醫(yī)宗金鑒·刪補(bǔ)名醫(yī)方論》中云：“澤瀉得二苓下降，利水之功倍，小便利而水不蓄矣”;白術(shù)健脾氣而運(yùn)化水濕，脾氣運(yùn)而九竅通，有溫陽化氣行水之功;桂枝助膀胱氣化而通利小便;諸藥配合，則膀胱利，水濕去。

中醫(yī)藥在國內(nèi)臨床治療BPH應(yīng)用很普遍，中醫(yī)藥在改善BPH癥狀、提高生活質(zhì)量等方面均具有優(yōu)勢，中藥的天然藥物特性使不良反應(yīng)也明顯少于西藥;中藥開發(fā)成本的低廉也決定了中醫(yī)藥治療BPH的價格優(yōu)勢。

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