陳雨然，羅 琪，羅黎明，李龍雪，舒 坤，徐 磊，洪 滔，楊玉艷，曾靜軍，彭賜玲，劉志勇

(江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技中心，330004，南昌 )

0 引言

柴胡疏肝散(Chaihu Shugan San, CHSGS)出自于明代張介賓的《景岳全書》，方是由陳皮、柴胡、川芎、香附、枳殼、芍藥、甘草共7味藥組成[1]，以柴胡、枳殼、香附解肝經(jīng)氣郁；川芎開肝經(jīng)血郁；白芍、甘草柔肝緩急：陳皮理氣健脾化痰使氣機(jī)疏暢，具有疏肝行氣、活血止痛的功效[2]。近10年來，柴胡疏肝散的臨床研究及藥理作用研究已漸趨深入，當(dāng)前柴胡疏肝散的臨床應(yīng)用主要集中在心血管系統(tǒng)[3]、神經(jīng)系統(tǒng)[4]、消化系統(tǒng)[5]及生殖相關(guān)[6]的4個(gè)方面。而柴胡疏肝散作為疏肝理氣的經(jīng)典方劑，在臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中均已被證明其在抑郁癥治療上的良好療效，并得到抗抑郁治療的廣泛應(yīng)用。將柴胡疏肝散這一經(jīng)典方劑的藥物進(jìn)行加減，茯苓、白術(shù)、陳皮健脾益氣；遠(yuǎn)志寧心安神；白芍養(yǎng)血柔肝；郁金、玫瑰花、佛手除煩解郁安神；在先前研究中發(fā)現(xiàn)江香薷可以影響大鼠腸道菌群的變化[7]，具有化濕健脾、改善體質(zhì)的功效。將柴胡疏肝散在原有方劑的基礎(chǔ)上進(jìn)行加減，并加味江香薷，諸藥合用，共奏疏肝解郁，健脾安神之功效。本研究通過給SD大鼠灌服柴胡疏肝散加味江香薷28 d的喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，觀察給藥后對(duì)大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)的影響并結(jié)合BDI-GS評(píng)價(jià)指標(biāo)體系，用以評(píng)價(jià)柴胡疏肝散加味江香薷的安全性，為臨床應(yīng)用提供準(zhǔn)備。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

5周齡雌雄各半SD大鼠80只由江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技中心提供，體重范圍為60～80 g，合格證號(hào)SCXK(贛)2018-0004。實(shí)驗(yàn)大鼠飼養(yǎng)在江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技中心SPF級(jí)屏障系統(tǒng)內(nèi)，環(huán)境溫度為20～23 ℃、濕度45%～55%，使用許可號(hào)為SYXK(贛) 2017-0004。大鼠食用由萬千佳提供的正常飼料。

1.2 受試藥物

受試方為：柴胡疏肝散加味江香薷，由柴胡、香附、當(dāng)歸、陳皮、川穹、枳殼、焦山楂、白芍、決明子、郁金、佛手、白術(shù)、茯苓、石菖蒲、江香薷、玫瑰花、遠(yuǎn)志組成，處方由江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科陳浩副主任藥師進(jìn)行鑒定。藥材以10倍水量先行浸泡1 h，煎煮50 min得第1次的藥液，再次加水煎煮50 min得第2次的藥液，合并2次的煎煮液，濃縮為2:1的溶液，最終獲得2 g/mL的藥液，用于實(shí)驗(yàn)給藥。

1.3 試劑與儀器

全自動(dòng)尿液分析儀(優(yōu)利特)、全自動(dòng)生化儀(貝克曼AU480)、顯微鏡(IX37生物顯微鏡)、分析天平(北京賽多利斯)、血液學(xué)檢測試劑盒、血液生化學(xué)檢測試劑盒、尿常規(guī)檢測試紙。

1.4 分組與處理

將SD大鼠分為空白對(duì)照組(0 g/kg)、柴胡疏肝散加味江香薷低(0.2 g/kg)、中(2 g/kg)、高(20 g/kg)劑量給藥組，雄雌各4組，每組10只，共80只SD大鼠。連續(xù)灌胃給藥28 d。實(shí)驗(yàn)期間每周稱重1次，最終給藥日時(shí)對(duì)大鼠進(jìn)行尿常規(guī)檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)大鼠進(jìn)行深度麻醉后腹主動(dòng)脈采血，進(jìn)行血液學(xué)和血清生化指標(biāo)的檢測，同時(shí)進(jìn)行大鼠大體解剖，先觀察后取心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺、腎上腺、生殖腺(子宮卵巢或睪丸附睪)等臟器，分別稱重后進(jìn)行臟器系數(shù)的分析，并計(jì)算受試物臟器指標(biāo)統(tǒng)計(jì)值的均值/空白對(duì)照組對(duì)應(yīng)指標(biāo)的均值，獲得BDI值，在此基礎(chǔ)上通過累計(jì)積分計(jì)算獲得GS，最終得出BDI-GS評(píng)價(jià)指標(biāo)體系。并對(duì)所有臟器進(jìn)行固定制片后光學(xué)顯微鏡下檢查各臟器。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 柴胡疏肝散加味江香薷對(duì)大鼠體重變化的影響

雄雌各劑量給藥組大鼠及空白對(duì)照組大鼠的體重均呈增長趨勢(shì)，各組大鼠的體重變化無顯著性差異，結(jié)果圖見圖1。

2.2 血液學(xué)指標(biāo)的影響

柴胡疏肝散加味江香薷各劑量組雌、雄大鼠的血液學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 柴胡疏肝散加味江香薷對(duì)大鼠末期血液生化學(xué)指標(biāo)的影響

柴胡疏肝散加味江香薷高、中、低3個(gè)劑量組雄、雌大鼠的末期血液生化學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果與空白對(duì)照組的比較結(jié)果顯示，雌鼠中劑量組AST指標(biāo)顯著降低，(P<0.01)，其余與肝功能相關(guān)的指標(biāo)的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在與腎功能相關(guān)的生化指標(biāo)檢測結(jié)果中得出，給藥后雄雌各劑量組大鼠的BUN(尿素氮)、CRE(肌酐)、UA(尿酸)與空白對(duì)照組大鼠間差別無顯著性差異(P>0.05)，各給藥組與血脂相關(guān)的指標(biāo)TC、TG、GLU與空白對(duì)照組相比也均無顯著性差異(P>0.05)，結(jié)果見表1、表2。

圖1 大鼠體重變化趨勢(shì)圖

2.4 柴胡疏肝散加味江香薷對(duì)大鼠尿常規(guī)指標(biāo)的影響

大鼠尿常規(guī)結(jié)果未見明顯差異。

2.5 柴胡疏肝散加味江香薷對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響及BDI-GS評(píng)價(jià)結(jié)果

在各組大鼠臟器系數(shù)分析結(jié)果中得出給藥組各劑量大鼠與空白對(duì)照組大鼠間各臟器均無顯著性差異。BDI-GS計(jì)算結(jié)果顯示，雌性給藥組大鼠多數(shù)臟器的BDI值隨著給藥劑量的增加呈上升的趨勢(shì),各臟器總累計(jì)GS值也隨著給藥劑量的增加呈上升的趨勢(shì)，增加至高劑量時(shí)GS值>10(在10項(xiàng)臟器重量累計(jì)總積分結(jié)果中，雌性的脾、肺BDI值均>1，子宮、卵巢和大腦BDI值均<1)；雄性給藥組大鼠各臟器總累計(jì)GS值在中劑量時(shí)>10(雄性給藥組大鼠的睪丸、附睪、腎上腺的BDI值均>1)，結(jié)果見表3、表4。

2.6 大體解剖及組織病理學(xué)觀察

給藥結(jié)束后，常規(guī)剖檢大鼠，肉眼未觀察到明顯改變。對(duì)各組大鼠的主要臟器進(jìn)行常規(guī)組織病理學(xué)切片檢查，在大鼠肝臟、腎臟、脾臟的光鏡觀察下均未發(fā)現(xiàn)異常的組織病理學(xué)變化。

表1 柴胡疏肝散加味大鼠血清肝功能指標(biāo)的影響

表2 柴胡疏肝散加味大鼠血清腎功能、血糖血脂的影響

表3 雌性大鼠臟器重量的BDI-GS評(píng)價(jià)結(jié)果

表4 雄性大鼠臟器重量的BDI-GS評(píng)價(jià)結(jié)果

3 討論

柴胡疏肝散是根據(jù)中醫(yī)“疏肝解郁”的治療原則，由四逆散進(jìn)一步發(fā)展而來的經(jīng)典名方。具有治療抑郁癥、功能性消化不良和急性胰腺炎等多種藥理作用[1]。通過對(duì)柴胡疏肝散處方的藥物進(jìn)行加減并配以江香薷，發(fā)揮疏肝解郁，健脾安神的功效。SD大鼠的血液學(xué)指標(biāo)、生化學(xué)指標(biāo)、臟器質(zhì)量與系數(shù)、大鼠生長體重變化、各臟器病理制片等結(jié)果是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康評(píng)價(jià)、安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)中不可或缺的指標(biāo)。因此本實(shí)驗(yàn)以SD大鼠為研究對(duì)象，通過28 d的喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，觀察大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)，進(jìn)而評(píng)價(jià)受試藥物的安全性。

3.1 從體重方面來看

由體重結(jié)果可知，各劑量給藥組雄雌大鼠相比空白對(duì)照組大鼠體重增長趨勢(shì)無顯著差別，雌鼠的低劑量與高劑量給藥組大鼠后期的體重增長趨勢(shì)較空白對(duì)照組更加明顯，而雄性各劑量給藥組大鼠的體重增長趨勢(shì)與空白對(duì)照組大鼠幾近相同，表明柴胡疏肝散加味江香薷對(duì)大鼠的體重以及增長無影響。

3.2 從大鼠血常規(guī)來看

血常規(guī)指標(biāo)是反應(yīng)受試物是否影響造血功能的重要指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柴胡疏肝散加味江香薷28 d喂養(yǎng)后，并未對(duì)各實(shí)驗(yàn)組大鼠血常規(guī)的各項(xiàng)指標(biāo)有顯著性影響。

3.3 從大鼠血清生化來看

雄雌各組大鼠的血清生化結(jié)果顯示，雌性中劑量大鼠的AST指標(biāo)與空白對(duì)照組大鼠間相比顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AST的水平可以反應(yīng)肝細(xì)胞的損傷程度和嚴(yán)重程度，提示柴胡疏肝散加味江香薷可能對(duì)肝臟具有影響作用，但雌性各劑量大鼠間的AST指標(biāo)未見明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，且在肝臟的病理切片中未發(fā)現(xiàn)異常的組織病理學(xué)變化，說明柴胡疏肝散加味江香薷對(duì)肝臟有作用，但無毒。生化檢測中的其余各項(xiàng)指標(biāo)與空白對(duì)照組比較均無顯著性差異。

3.4 從大鼠尿常規(guī)來看

尿常規(guī)檢測結(jié)果為腎臟疾病診斷的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柴胡疏肝散加味江香薷的28 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，并未對(duì)腎臟泌尿產(chǎn)生毒性作用。

3.5 從大鼠臟器系數(shù)和BDI-GS指標(biāo)來看

大鼠臟器質(zhì)量和臟器系數(shù)是毒理學(xué)試驗(yàn)的重要觀察指標(biāo)。雌性給藥組大鼠的脾、肺BDI值均>1，性腺、大腦的BDI值均<1，隨著給藥劑量的增加，雌性大鼠多數(shù)臟器的BDI值和GS值都呈增加的趨勢(shì)，在劑量增加至高劑量時(shí)，各臟器總累計(jì)GS值>10；雄性給藥組大鼠的腎上腺、睪丸、附睪BDI值均>1，雄性給藥組大鼠的各臟器總累計(jì)GS值接近或>10，BDI-GS指標(biāo)提示柴胡疏肝散加味江香薷并未對(duì)雌雄大鼠臟器系數(shù)產(chǎn)生明顯影響。

4 結(jié)論

通過大鼠28 d的喂養(yǎng)試驗(yàn)后,依據(jù)SD大鼠的體重變化、生理生化指標(biāo)、尿常規(guī)并結(jié)合BDI-GS指標(biāo)體系可見柴胡疏肝散加味江香薷對(duì)SD大鼠未見明顯的毒性。