哈斯高娃， 烏吉斯古楞

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院， 內(nèi)蒙古 呼和浩特市 010050)

慢性心力衰竭是一組由心臟結(jié)構(gòu)和/或功能異常引起的復(fù)雜的臨床綜合征，當(dāng)患者出現(xiàn)心力衰竭時(shí)，往往已到了疾病的終末階段[1]。雖然慢性心力衰竭的治療方法在不斷更新，但并沒有使患者的死亡率下降[2]。因此，及時(shí)識別診斷并給予有效治療對慢性心力衰竭患者有重要意義。B型鈉尿肽(B-type natriuretic peptide，BNP)是診斷心力衰竭的常用指標(biāo)，但由于肺栓塞、高齡等原因會對BNP結(jié)果產(chǎn)生一定影響[3]，因此，尋找新的靈敏度和特異度較高的標(biāo)志物對及時(shí)診斷十分重要。煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Nicotinamide phosphoribose transferase，NAMPT)參與能量代謝，在調(diào)控炎癥反應(yīng)及腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中起著關(guān)鍵性作用[4]。mir-206是miRNA家族成員，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長增殖和分化的作用[5]。基于此，本研究將探討NAMPT、mir-206在慢性心力衰竭患者中的表達(dá)水平，并分析血清中NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭患者的預(yù)測價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2020年1月至2021年8月在本院接受治療的慢性心力衰竭患者76例為心衰組，男40例，女36例，吸煙史：有39例，無37例，飲酒史：有38例，無38例，年齡48～74歲，平均(56.28±7.22)歲，心功能分級，Ⅱ級18例，Ⅲ級29例，Ⅳ級29例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國心力衰竭診斷和治療指南(2018)》[6]中慢性心力衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)；②病情穩(wěn)定且病程>1年者；③心功能分級在Ⅱ～Ⅳ級者；④2周內(nèi)未接受過治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有先天性心臟病者；②伴有急性心肌梗死者；③伴有多臟器功能衰竭者；④合并嚴(yán)重全身感染者；⑤病情危重，生存期限≤3個(gè)月者。另選取同期在本院體檢健康者34例為健康組，男20例，女14例，吸煙史：有18例，無16例，飲酒史：有19例，無15例，年齡46～72歲，平均(55.12±7.28)歲。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)。比較兩組患者吸煙史、飲酒史、年齡等一般資料，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2方 法

1.2.1樣本采集及RNA提取:外周血樣本：分別抽取兩組患者清晨空腹靜脈血5mL，在室溫下3000r/min離心15min，得到上層血清，放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。血清總RNA樣本：使用miRNeasy試劑盒(德國 Qiagen)提取RNA，將所得外周血與PBS溶液1∶1混合，室溫下1500r/min進(jìn)行離心處理，當(dāng)離心管內(nèi)血液分為4層后，取第二層與PBS再次混合，室溫下1000r/min離心2次，提取RNA。

1.2.2實(shí)時(shí)熒光定量PCR:使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒對提取的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到cDNA后，使用qRT-PCR檢測試劑盒(美國Gene-Copoeia)，在羅氏LightCycler 480Ⅱ擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增，具體反應(yīng)體系參照試劑盒說明書，反應(yīng)程序?yàn)?5℃預(yù)變性10min，95℃變性15s，60℃退火30s，72℃延伸10s，共40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣本重復(fù)3次，取平均值，使用2-△△Ct公式，確定miR-206表達(dá)水平。

1.2.3酶聯(lián)免疫吸附法:采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測兩組患者血清中NAMPT和BNP水平，試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.4彩色多普勒超聲心動圖檢查:采用超聲心動圖(深圳市靖邦電子有限公司)檢測兩組患者就診當(dāng)天LVEDD和LVEF水平。

1.3觀察指標(biāo):比較心衰組和健康組血清中NAMPT、mir-206水平及不同心功能分級患者血清NAMPT、mir-206水平，分析血清中NAMPT、mir-206的表達(dá)與LVEDD、LVEF及BNP的相關(guān)性，并分析血清中NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭患者的預(yù)測價(jià)值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入與分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)間比較利用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用例(n)或率(%)表示，行卡方檢驗(yàn)。利用Pearson法分析慢性心力衰竭患者血清中NAMPT、mir-206的表達(dá)與LVEDD、LVEF及BNP的相關(guān)性，利用受試者工作特征曲線(ROC)分析血清中NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭患者的預(yù)測價(jià)值。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1心衰組和健康組血清中NAMPT、mir-206表達(dá)水平及LVEDD、LVEF、BNP指標(biāo)比較:心衰組NAMPT、LVEDD、BNP水平高于健康組(P<0.05)，mir-206、LVEF水平低于健康組(P<0.05)。見表2。

表2 心衰組和健康組血清中NAMPT mir-206表達(dá)水平及LVEDD LVEF BNP指標(biāo)比較

2.2不同心功能分級患者血清NAMPT、mir-206水平比較:慢性心力衰竭患者血清中NAMPT水平隨著心功能分級的增加逐漸升高(P<0.05)，mir-206水平隨著心功能分級的增加逐漸降低(P<0.05)。見表3。

表3 不同心功能分級患者血清NAMPT mir-206水平比較

2.3慢性心力衰竭患者血清NAMPT、mir-206水平與LVEDD、LVEF及BNP之間的關(guān)系:Pearson結(jié)果顯示，慢性心力衰竭患者血清NAMPT水平與LVEDD和BNP水平之間均呈正相關(guān)(r=0.750、0.757，P<0.05)，與LVEF水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.759，P<0.05)；血清mir-206水平與LVEDD和BNP水平之間均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.775、-0.883，P<0.05)，與LVEF水平呈正相關(guān)(r=0.819，P<0.05)。見表4。

表4 慢性心力衰竭患者血清NAMPT mir-206水平與LVEDD LVEF及BNP之間的關(guān)系

2.4血清NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭患者的預(yù)測價(jià)值:ROC結(jié)果顯示，血清NAMPT、mir-206水平預(yù)測慢性心力衰竭的曲線下面積(AUC)分別為0.853(95%CI：0.773-0.913)、0.981(95%CI：0.935-0.998)，對應(yīng)的特異度分別為61.76%、97.06%，靈敏度分別為93.42%、88.16%；血清NAMPT、mir-206二者聯(lián)合預(yù)測慢性心力衰的AUC為0.993，特異度為97.06%，靈敏度為96.05%。見圖1，表5。

圖1 血清NAMPT、mir-206水平診斷慢性心力衰竭的ROC曲線

表5 血清NAMPT mir-206水平對慢性心力衰竭患者的診斷價(jià)值

3 討 論

慢性心力衰竭是心血管疾病患者死亡的主要原因，主要表現(xiàn)為乏力、呼吸困難、水腫等，對患者日常生活帶來很大困擾[7]。并且隨著我國老齡化的加重，慢性心力衰竭的發(fā)病率呈上升趨勢。因此，及時(shí)診斷及時(shí)治療對減少慢性心力衰竭的發(fā)病率有重要意義。NAMPT具有調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)及腫瘤發(fā)生與發(fā)展的作用。如：李楊楊等[8]研究表明，NAMPT在呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎患者中呈高表達(dá)，并且NAMPT表達(dá)水平增高可加重炎癥反應(yīng)，增加呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎的病死率。茍小霞等[9]研究表明，NAMPT參與著細(xì)胞間信號傳導(dǎo)，細(xì)胞增殖，在腦膠質(zhì)瘤中呈高表達(dá)，且與腦膠質(zhì)瘤預(yù)后密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，NAMPT在慢性心力衰竭患者中表達(dá)水平高于健康者，且隨著心功能分級的增高，NAMPT的表達(dá)水平也逐漸升高，提示，NAMPT在慢性心力衰竭患者中呈高表達(dá)，且高表達(dá)水平NAMPT可能與慢性心力衰竭發(fā)生有關(guān)。BNP是診斷慢性心力衰竭的標(biāo)志物，隨著慢性心力衰竭的加重，BNP會逐漸升高[10]。LVEDD、LVEF也是反應(yīng)心功能的有效指標(biāo)，LVEDD會隨著心力衰竭的加重而增加，LVEF隨著心力衰竭的加重而降低。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清NAMPT與LVEDD和BNP水平之間呈正相關(guān)，與LVEF呈負(fù)相關(guān)，提示血清NAMPT和LVEDD、LVEF、BNP共同發(fā)揮作用，參與慢性心力衰竭的發(fā)生與發(fā)展。

mir-206位于人類染色體6p12.2上，是miRNA家族成員，參與細(xì)胞分化與血管形成[11]。郭登斌等[12]研究結(jié)果顯示，mir-206與骨的發(fā)育有關(guān)，并且能夠抑制骨細(xì)胞分化，在骨折延遲愈合患者中呈低表達(dá)。白愛紅等[13]研究結(jié)果顯示，mir-206在多囊卵巢綜合征患者血清中呈低表達(dá)，且表達(dá)水平與胰島素抵抗有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，mir-206在慢性心力衰竭患者中呈低表達(dá)，且表達(dá)水平與心功能分級密切相關(guān)，提示，mir-206參與著慢性心力衰竭患者的病情進(jìn)展。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清mir-206水平與LVEDD和BNP水平之間均呈負(fù)相關(guān)，與LVEF水平呈正相關(guān)，提示血清mir-206與LVEDD、LVEF、BNP共同參與著慢性心力衰竭的發(fā)生與發(fā)展。BNP作為臨床預(yù)測慢性心力衰竭的常用指標(biāo)之一，靈敏度、特異度均已獲得大量臨床證據(jù)支持，但BNP水平變化與多種心血管疾病的發(fā)生有關(guān)，僅以其作為預(yù)測指標(biāo)可能會存在漏診或誤診患者，因此在結(jié)合患者臨床表現(xiàn)的基礎(chǔ)上，尚需參考其他易于檢測的血清指標(biāo)進(jìn)行判斷，以提高診斷的準(zhǔn)確性。本研究ROC結(jié)果顯示，血清NAMPT、mir-206二者聯(lián)合預(yù)測慢性心力衰竭的AUC為0.993高于血清NAMPT、mir-206單獨(dú)預(yù)測慢性心力衰竭的AUC(0.853、0.981)，具有較高的靈敏度、特異度，提示全面檢測血清NAMPT、mir-206水平對慢性心力衰竭的發(fā)生有一定預(yù)測價(jià)值，對輔助鑒別慢性心力衰竭具有積極意義。

綜上所述，慢性心力衰竭患者血清NAMPT表達(dá)水平升高、mir-206表達(dá)水平降低，與患者心功能分級有關(guān)，對慢性心力衰竭的發(fā)生有一定的預(yù)測價(jià)值，有望成為診斷慢性心力衰竭的生物學(xué)指標(biāo)。但后續(xù)還應(yīng)加大樣本量，進(jìn)一步對本研究結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。