胡嘉敏

（鶴山市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心，廣東 鶴山 529700）

蔬菜和水果在人們的膳食結(jié)構(gòu)中占據(jù)非常重要的位置，其為人們的生存提供了必需的營養(yǎng)物質(zhì)[1]，在水果和蔬菜的種植過程中，為了得到最大的經(jīng)濟效益，農(nóng)民往往會使用各種不同種類的農(nóng)藥和化肥促進生長，消滅或預(yù)防病蟲害[2]。其中有機氯、有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯等是農(nóng)藥中比較常用的成分，使用這些藥物往往會導(dǎo)致蔬菜水果等生鮮食品的表面存在一些藥物殘留[3]。隨著人們生活水平的提高以及對食品安全意識的增強，農(nóng)藥殘留的相關(guān)問題成了人們生活中十分關(guān)心的話題，農(nóng)藥的使用備受關(guān)注與爭議[4]。

為了更準確高效地對農(nóng)藥殘留進行檢測，檢測技術(shù)不斷進步，相關(guān)檢測標準也在不斷更新，標準中對殘留量的定量方法有標準曲線法和單點校正法[5]。單點校正法是通過坐標原點與已知濃度的標準樣品作直線，對未知濃度的待測組分進行測定[6]，單點校正法效率高，但當待測組分的濃度與標準樣品的已知濃度有較大差別時會出現(xiàn)較大的誤差。標準曲線法通過配制標準樣品的多個濃度梯度繪制成工作曲線，定量時可以直接從標準曲線上讀出待測組分含量[6]。標準曲線法配制精度要求高，在實際操作中會出現(xiàn)相關(guān)系數(shù)不符合要求的情況[7]。本文以腐霉利、甲基對硫磷、甲氰菊酯、三唑酮、氧樂果5 種農(nóng)藥為代表，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（Gas Chromatography Tandem Mass Spectrometry，GC-MS/MS）進行測定，比較標準曲線法和單點校正法兩種定量方法的結(jié)果差異。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

乙腈（色譜純）；乙酸乙酯（色譜純）；安捷倫QuEChERS 法提取包（內(nèi)含氯化鈉1 g、檸檬酸鈉 1 g、硫酸鎂4 g、檸檬酸氫二鈉0.5 g）、凈化包（內(nèi)含PSA 150 mg 及硫酸鎂900 mg）；腐霉利、甲基對硫磷、甲氰菊酯、三唑酮、氧樂果農(nóng)藥標準品（有證標準物質(zhì)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研檢測所，濃度為100 μg·mL-1）。

陶瓷均質(zhì)子：2 cm（長）×1 cm（外徑）；微孔濾膜（有機相）：13 mm×0.22 μm。

1.2 儀器與設(shè)備

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Agilent 8890-7000D，配有EI 電子轟擊源，質(zhì)譜類型：三重四極桿）；電子天平（梅特勒托利多ME4002E，感量0.01 g）；離心機（天美VELOCITY18R，轉(zhuǎn)速3 000 ～12 000 r·min-1）；高速勻漿機（ 天津恒奧HFJ-10， 轉(zhuǎn) 速8 000 ～ 30 000 r·min-1）；水浴氮吹儀（北京成萌偉業(yè)CM-24，可控溫）；組織搗碎機（日本松下MX-151SG1）；漩渦振蕩器（德國IKA MS3 control）。

1.3 實驗方法

1.3.1 試樣制備

本次實驗采用冬瓜作為實驗基質(zhì)樣品，將其去柄，取全瓜，切成小塊，充分混勻，采用四分法選取合適的樣品樣，將取好的樣品直接放入組織搗碎機中搗碎成漿狀，放入合適的聚乙烯瓶中，放于 -18 ℃或-18 ℃以下條件下保存。

1.3.2 標準農(nóng)藥添加

在冬瓜基質(zhì)中添加腐霉利、甲基對硫磷、甲氰菊酯、三唑酮、氧樂果5 種農(nóng)藥，添加濃度分別為 0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、0.12 mg·kg-1。

1.3.3 提取和凈化

本實驗采用GB 23200.113—2018 QuEChERS 的提取和凈化方法。稱取10.00 g 試樣（精確至0.01 g）于50.00 mL 塑料離心管中，加入10.00 mL 乙腈、1 包安捷倫QuEChERS 法提取包（內(nèi)含氯化鈉1 g、檸檬酸鈉1 g、硫酸鎂4 g、檸檬酸氫二鈉0.5 g）及1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈振蕩1 min 后4 200 r·min-1離心5 min[8]。吸取6 mL 上清液加到內(nèi)含PSA 150 mg 及硫酸鎂900 mg 的15.00 mL 塑料離心管（即安捷倫QuEChERS 的凈化包）中，渦旋混勻1 min[8]。4 200 r·min-1離心5 min，準確吸取2.00 mL上清液于10.00 mL 試管中，45 ℃水浴中氮氣吹至近干[8]。加入1.00 mL 乙酸乙酯進行復(fù)溶，過微孔濾膜，用于測定。

1.3.4 農(nóng)藥標準溶液配制

（1）標準儲備溶液（10 μg·mL-1）配制。準確量取1.00 mL 100 μg·mL-1腐霉利、甲基對硫磷、甲氰菊酯、三唑酮、氧樂果5 種農(nóng)藥標準品，用乙酸乙酯溶解并定容至10.00 mL，避光保存于-18 ℃環(huán)境下，有效期為3 個月。

（2）配制混合標準溶液。準確量取5 種農(nóng)藥標準儲備溶液各2.0 mL，置于10.00 mL 的容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，配制的混合標準溶液濃度為2.00 μg·mL-1?；旌蠘藴嗜芤罕４嬗? ～4 ℃避光環(huán)境下，有效期2 周。

（3）基質(zhì)標準工作溶液配制。準確量取一定量的混合標準溶液，用乙酸乙酯逐級稀釋成0.005 μg·mL-1、0.010 μg·mL-1、0.050 μg·mL-1、0.100 μg·mL-1、 0.120 μg·mL-1、0.500 μg·mL-1濃度的標準工作溶液。用氮氣吹干冬瓜基質(zhì)溶液，加入1.0 mL 不同濃度的標準工作溶液進行復(fù)溶?；|(zhì)標準工作溶液使用時需要現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.5 測定條件

測定的儀器條件：色譜柱型號為HP-5MS UI （30 m×0.25 mm×0.25 mm）；色譜柱升溫過程：60 ℃ 保持1 min，按照 40℃·min-1的速度升溫到170 ℃，再按照10 ℃·min-1的速度升溫到310 ℃，310 ℃保持3 min；載氣為氦氣，流速為1.2 mL·min-1，純度大于99.999%；電子轟擊源能量為70 eV；進樣口的溫度為280 ℃；傳輸線的溫度為280 ℃；離子源的溫度為280 ℃；進樣方式為不分流進樣，樣品溶液由自動進樣器進樣；溶劑延遲時間為4 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線線性關(guān)系

采用標準曲線法來進行定量，使用1.3.5 的測定條件 集0.005 μg·mL-1、0.010 μg·mL-1、 0.050 μg·mL-1、0.100 μg·mL-1、0.500 μg·mL-1的混合標準工作液，得出的線性回歸方程見表1。從表1 可知，5 種農(nóng)藥的線性相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99，標準曲線線性符合要求。

表1 標準曲線線性回歸方程及線性相關(guān)系數(shù)結(jié)果

2.2 方法的精密度及回收率

本實驗以冬瓜為基質(zhì)，分別添加腐霉利、甲基對硫磷、甲氰菊酯、三唑酮、氧樂果濃度為0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、0.12 mg·kg-1的標準農(nóng)藥，進行6 次重復(fù)測定，測定結(jié)果見表2。根據(jù)農(nóng)業(yè)部公告2386 號公告，添加濃度在0.01 ～0.10 mg·kg-1，回收率要求在70%～120%、相對標準偏差要求≤20%，添加濃度在0.10 ～1.00 mg·kg-1的回收率要求在70%～110%、相對標準偏差要求≤15%。從表2 中結(jié)果可得，腐霉利、甲基對硫磷、甲氰菊酯、三唑酮、氧樂果5 種農(nóng)藥不同的添加濃度用標準曲線和單點校正兩種方法進行定量的回收率和相對標準偏差均符合要求。

2.3 兩種定量方法的測定結(jié)果比較

2.3.1 定量方法和濃度比較

分別對表2 中腐霉利、甲基對硫磷、甲氰菊酯、三唑酮、氧樂果5 種農(nóng)藥在添加濃度0.05 mg·kg-1、 0.10 mg·kg-1、0.12 mg·kg-1的測定結(jié)果進行可重復(fù)雙因素方差分析，比較不同添加濃度和不同定量方法對測定結(jié)果的影響。在顯著性水平0.05 下，利用Excel 數(shù)據(jù)分析功能中的方差分析-可重復(fù)雙因素分析進行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果見表3。從表3 中可知，5 種農(nóng)藥交互的F值均小于臨界值Fcrit=3.32，結(jié)果表明不同的添加濃度采用標準曲線法和單點校正法兩種方法進行定量的結(jié)果之間沒有顯著差異 （P＞0.05）。

表2 兩種定量方法的測定結(jié)果

表3 不同添加濃度和定量方法的可重復(fù)雙因素方差分析結(jié)果

2.3.2 定量方法和農(nóng)藥品種比較

對添加濃度為0.12 mg·kg-1的腐霉利、甲氰菊酯、甲基對硫磷、氧樂果、三唑酮5 種農(nóng)藥采用標準曲線法和單點校正法兩種方法定量的測定結(jié)果進行可重復(fù)雙因素方差分析，比較不同農(nóng)藥種類和不同定量方法對測定結(jié)果的影響。在顯著性水平0.05 下，利用Excel 數(shù)據(jù)分析功能中的方差分析-可重復(fù)雙因素分析進行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)分析結(jié)果見表4。表4 中交互的F值為0.332 小于Fcrit=2.56，結(jié)果表明不同農(nóng)藥種類采用標準曲線法和單點校正法兩種方法進行定量的結(jié)果之間沒有顯著差異（P＞0.05）。

表4 不同農(nóng)藥種類和定量方法的可重復(fù)雙因素方差分析結(jié)果

3 結(jié)論

本文采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，以冬瓜為基質(zhì)，對添加濃度為0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、 0.12 mg·kg-1的腐霉利、甲基對硫磷、甲氰菊酯、三唑酮、氧樂果進行測定，采用標準曲線法和單點校正法兩種方法進行定量分析。對測定結(jié)果分為兩類別進行可重復(fù)雙因素方差分析：同一農(nóng)藥不同添加濃度和不同定量方法對測定結(jié)果的影響、不同農(nóng)藥種類和不同定量方法對測定結(jié)果的影響。結(jié)果表明，不同的添加濃度采用標準曲線法和單點校正法兩種方法進行定量的結(jié)果之間沒有明顯差異（P＞0.05），不同農(nóng)藥種類采用標準曲線法和單點校正法兩種方法進行定量的結(jié)果之間沒有顯著差異（P＞0.05）。配制標準曲線過程需要較高的準確度，當數(shù)據(jù)分析中出現(xiàn)標準曲線相關(guān)系數(shù)不符合要求的情況時，可以選擇采用單點校正法來進行定量，以減少誤差。對于一些易分解的農(nóng)藥種類也可以選用單點校正法，以減少配制時間和上機時間，提高定量準確性。