潘朝陽(yáng)，王永臻，黃文燦，劉振，黃海燕，孫建安，毛相朝

（中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東 青島 266003）

蝦作為海洋牧場(chǎng)中的海珍品之一，營(yíng)養(yǎng)豐富、滋味鮮美，廣受消費(fèi)者歡迎[1]。2020年我國(guó)蝦產(chǎn)量約631萬噸，蝦加工和食用過程會(huì)產(chǎn)生大量的蝦頭、蝦殼等副產(chǎn)物，約占原料的45%～70%。這些蝦加工副產(chǎn)物富含甲殼素、蛋白質(zhì)、磷脂和蝦青素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，蝦頭與蝦殼相比，其蛋白質(zhì)、游離氨基酸、脂肪和游離脂肪酸含量較高，而灰分、甲殼素含量較低[2]，因此蝦頭是蝦加工副產(chǎn)物中最具營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的一部分，但其中甲殼素、蛋白質(zhì)、鈣質(zhì)和脂質(zhì)等成分結(jié)合緊密并且含鹽量高，直接作為飼料動(dòng)物難以充分吸收利用[3]，只有小部分被干燥后才可作為低質(zhì)飼料使用，而大部分被直接丟棄。蝦副產(chǎn)物的直接丟棄不但造成大量的資源浪費(fèi)，還會(huì)造成嚴(yán)重的環(huán)境污染隱患。因此蝦副產(chǎn)物的高值化利用，是充分開發(fā)蝦類資源，實(shí)現(xiàn)我國(guó)蝦產(chǎn)業(yè)綠色健康發(fā)展的重要研究方向。

固態(tài)發(fā)酵是一種將固態(tài)基質(zhì)中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)加以利用的發(fā)酵轉(zhuǎn)化手段，非常適合應(yīng)用于對(duì)蝦副產(chǎn)物的高值化加工，同時(shí)枯草芽孢桿菌是芽孢桿菌屬的一種，能產(chǎn)生耐干燥、耐熱、抗紫外線和有機(jī)溶劑的孢子，具有很強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力[4]，并且列于我國(guó)農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的《飼料添加劑品種目錄（2013）》中[5]，可在動(dòng)物飼料中使用?？莶菅挎邨U菌無致病性，且具有廣譜的對(duì)抗病原體的活性，可以分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶等多種酶類，在發(fā)酵過程中可對(duì)蝦頭中的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等成分進(jìn)行高效水解，有助于其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的釋放和被利用。同時(shí)，枯草芽孢桿菌作為飼料添加劑使用時(shí)，還可發(fā)揮腸道定植、與其他微生物競(jìng)爭(zhēng)排斥、特定代謝物的產(chǎn)生和免疫系統(tǒng)的刺激等功能活性[6]。

有調(diào)查顯示[7]，我國(guó)寵物行業(yè)市場(chǎng)規(guī)模近3 000億，消費(fèi)熱點(diǎn)聚焦在寵物飼料與用品上。而寵物飼料不同于傳統(tǒng)飼料注重轉(zhuǎn)化率和料肉比，其更注重適口性、風(fēng)味、營(yíng)養(yǎng)均衡和高消化率。寵物市場(chǎng)的消費(fèi)者在飼喂寵物時(shí)往往缺乏對(duì)寵物飼料營(yíng)養(yǎng)均衡的正確理解，容易盲目地進(jìn)行自由搭配，額外為寵物提供能量棒、肉罐頭等食物，導(dǎo)致寵物出現(xiàn)消化不良或營(yíng)養(yǎng)過剩等問題[8]。同時(shí)市場(chǎng)上綠色天然、營(yíng)養(yǎng)均衡、適口性好的寵物飼料添加劑較少，而通過益生菌固態(tài)發(fā)酵蝦頭，既可以利用蝦頭中豐富的營(yíng)養(yǎng)，又能夠同時(shí)發(fā)揮益生菌的功效，可作為一種綠色天然的寵物飼料添加劑使用。

基于以上蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展和寵物飼料添加劑市場(chǎng)需求，本研究以蝦頭為主要原料，通過枯草芽孢桿菌進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵轉(zhuǎn)化，并將發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行小鼠飼喂實(shí)驗(yàn)，探究其對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能和腸道菌群的影響來驗(yàn)證枯草芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵蝦頭制劑產(chǎn)品的飼喂效果，為其在寵物飼料添加劑中的應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

枯草芽孢桿菌OKF-004：中國(guó)海洋大學(xué)食品學(xué)院海洋食品酶學(xué)與生化工程實(shí)驗(yàn)室篩選保存，篩選自中國(guó)東海深海淤泥并能以南極磷蝦粉為唯一碳氮源生長(zhǎng)。南美白對(duì)蝦頭和麩皮：青島盛隆偉業(yè)科技有限公司；可溶性淀粉（食品級(jí)）：上海滬試國(guó)藥集團(tuán)；小鼠AIN-93M標(biāo)準(zhǔn)維持飼料（由酪蛋白、蛋氨酸、玉米淀粉、麥芽糖糊精、蔗糖、纖維素、大豆油、碳酸鈣、磷酸二氫鉀、重酒石酸膽堿等組成）：濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

生物安全柜（HFsafe-1200LCA2）：上海力新學(xué)儀器有限公司；高壓滅菌鍋（GI80TW）：致微（廈門）儀器有限公司；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9075A）：上海樹立儀器儀表有限公司；生化培養(yǎng)箱（SPX 270）：寧波市科技園區(qū)新江南儀器有限公司；高通量測(cè)序儀（NovaSeq 6000）：illumina（中國(guó)）公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

30只SPF級(jí)BALB/c小鼠，日齡4周～6周，體重（17±2）g，購(gòu)于濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，許可證號(hào)SCXK（魯）20190003。

1.4 方法

1.4.1 發(fā)酵蝦頭制劑制備

將南美白對(duì)蝦頭和麩皮按質(zhì)量比7∶5混合得到固體基質(zhì)，加水至60%含水量。固體基質(zhì)按質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%接種活菌數(shù)為109CFU/mL的枯草芽孢桿菌，然后在30℃的搖瓶中發(fā)酵48 h。發(fā)酵后在基質(zhì)中添加0.5%的干燥保護(hù)劑可溶性淀粉，混勻后50℃鼓風(fēng)干燥6 h，得到符合國(guó)家農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)NY/T 2131—2012《飼料添加劑枯草芽孢桿菌》的固態(tài)枯草芽孢桿菌發(fā)酵蝦頭制劑，活菌數(shù)＞109CFU/g。

1.4.2 動(dòng)物分組與處理

實(shí)驗(yàn)BALB/c小鼠先用維持飼料飼養(yǎng)8 d以適應(yīng)環(huán)境，8 d后將BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組，每組10只，分別為正常對(duì)照組（NC）、添加未發(fā)酵蝦頭對(duì)照組（MC）和添加發(fā)酵蝦頭制劑干預(yù)組（MH）。每組實(shí)驗(yàn)BALB/c小鼠分為兩籠飼養(yǎng)。未發(fā)酵蝦頭和發(fā)酵蝦頭制劑添加量為維持飼料質(zhì)量的0.1%。鼠房溫度控制在（24±2）℃，濕度（45±5）%，每隔4 d更換一次墊料。

1.4.3 小鼠體重變化、采食量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)期間每天中午稱取每只小鼠的體重和每籠小鼠食槽內(nèi)剩余的飼料量并記錄。將剩余飼料丟棄，重新添加對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)分組飼料50 g。

1.4.4 小鼠體脂率、胸腺和脾臟指數(shù)測(cè)定

實(shí)驗(yàn)第8周脫頸椎處死小鼠后，隨機(jī)選取每組每籠4只小鼠解剖，稱取腎周脂肪、睪周脂肪、胸腺和脾臟質(zhì)量，體脂率和臟器指數(shù)計(jì)算公式如下。

1.4.5 生物學(xué)信息分析

實(shí)驗(yàn)期間按照分組進(jìn)行飼喂，每2周收集每組小鼠糞便混樣，共收集 3 次（依次記為 W1、W2、W3）；第8周脫頸椎處死全部小鼠，按實(shí)驗(yàn)分組收集腸道內(nèi)容物混樣，樣品（記為W4）進(jìn)行16S rDNA擴(kuò)增子高通量測(cè)序，測(cè)序平臺(tái)為Illumina NovaSeq，測(cè)序策略為雙端測(cè)序PE250，測(cè)序區(qū)域?yàn)?6SV4，上下游引物分別為515F 5’-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3’，806R 5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’，對(duì) Illumina NovaSeq測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選和嵌合體過濾，得到可用于后續(xù)分析的有效數(shù)據(jù)。為研究各樣本的物種組成，對(duì)所有樣本的有效數(shù)據(jù)，以97%的一致性進(jìn)行可操作分類單元（operational taxonomic units，OTUs）聚類和物種分類分析、菌群多樣性（物種總數(shù)、香農(nóng)指數(shù)及辛普森指數(shù)）分析及多樣本比較分析，以得到全面準(zhǔn)確的腸道微生物群落結(jié)構(gòu)組成。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 25.0進(jìn)行分析，采用單因素方差統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（One-Way ANOVA）進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)微生物多樣性Alpha指數(shù)（物種總數(shù)、香農(nóng)指數(shù)及辛普森指數(shù)）用物種累積箱形圖和wilcox秩和檢驗(yàn)來評(píng)估各樣本中微生物群落的物種豐富度及多樣性的差異。對(duì)多樣本比較分析采用無度量多維標(biāo)定法（nonmetric multi-dimensional scaling，NMDS）來評(píng)估個(gè)樣本間組內(nèi)與組間差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同飼喂條件對(duì)小鼠體重、采食量和體脂率的影響

實(shí)驗(yàn)期間不同飼喂條件下小鼠體重、采食量和體脂率的變化分別見圖1。

圖1 各實(shí)驗(yàn)組小鼠體重、采食量、體脂率的變化Fig.1 Body weight change，feed intake，body fat percentage of mice in each experimental group

由圖1A可知，各實(shí)驗(yàn)組間小鼠體重?zé)o明顯差異。由圖1B可知，自14 d后未發(fā)酵蝦頭對(duì)照組（MC）和發(fā)酵蝦頭制劑干預(yù)組（MH）的小鼠采食量逐漸高于對(duì)照組（NC）小鼠，而MC與MH組并無明顯差異。馮建等[9]研究表明在南美白對(duì)蝦植物蛋白日糧中添加2%由蝦頭酶解得到的蝦肽可以明顯提高誘食性，提高南美白對(duì)蝦成活率。冷向軍等[10]研究表明蝦蛄水解蛋白漿對(duì)異育銀鯽具有顯著的誘食作用。說明蝦頭對(duì)小鼠有一定的誘食效果，其原因可能是蝦頭中的風(fēng)味蛋白與核苷酸等物質(zhì)促進(jìn)了小鼠的采食。由圖1C可知，MH組體脂率顯著低于MC組（P＜0.05），飼喂枯草芽孢桿菌發(fā)酵的蝦頭組（MH）小鼠比飼喂蝦頭組（MC）的小鼠體脂率下降了約62.9%，而NC組與MC組、MH組均無顯著性差異（P＞0.05）。劉玉芝等[11]對(duì)高血脂、肥胖小鼠飼喂枯草芽孢桿菌JS01，研究脂質(zhì)代謝與腸道菌群的影響，發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌有降脂功能，主要是通過影響腸道菌群尤其是乳酸菌的生長(zhǎng)繁殖來間接促進(jìn)脂肪代謝和分泌各種酶類和非酶類代謝產(chǎn)物來降脂。蝦頭中脂肪含量高達(dá)20%[12]，脂肪含量高不但容易腐敗，而且用于動(dòng)物飼喂可能引起高血脂、瘦肉率降低等影響品質(zhì)的問題。而通過對(duì)蝦頭固態(tài)發(fā)酵，不但可以通過枯草芽孢桿菌分泌的脂肪酶對(duì)蝦頭脂肪進(jìn)行分解，而且還可以通過腸道定植進(jìn)一步影響腸道菌群促進(jìn)脂肪的代謝，從而降低蝦頭脂肪含量高的負(fù)面影響，在充分發(fā)揮蝦頭營(yíng)養(yǎng)成分豐富優(yōu)勢(shì)的前提下，同時(shí)有效控制動(dòng)物的體脂率。

2.2 不同飼喂條件對(duì)小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響

實(shí)驗(yàn)期間不同飼喂條件下小鼠胸腺和脾臟的變化分別見圖2。

圖2 各實(shí)驗(yàn)組小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)Fig.2 Thymus index and spleen index of mice in each experimental group

胸腺和脾臟是機(jī)體的重要淋巴器官，其功能與免疫緊密相關(guān)，測(cè)定臟器指數(shù)可以直觀反映各實(shí)驗(yàn)組小鼠免疫能力的強(qiáng)弱[13]。由圖2可知，胸腺指數(shù)在各組之間無顯著性差異（P＞0.05）；MH組與NC組小鼠的脾臟指數(shù)具有顯著性差異（P＜0.05），飼喂發(fā)酵蝦頭制劑組（MH）小鼠的脾臟指數(shù)比空白對(duì)照組（NC）提升了35.7%，說明發(fā)酵蝦頭制劑有提高脾臟指數(shù)的作用。枯草芽孢桿菌對(duì)提升免疫能力已被廣泛證明，陳俊宏等[13]對(duì)AA雞日糧添加1010CFU/g枯草芽孢桿菌、郭瑞萍等[14]在AA肉雞日糧中額外添加1011CFU/kg的枯草芽孢桿菌，實(shí)驗(yàn)對(duì)象臟器指數(shù)均顯著提高。

2.3 各實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道菌群OTUs統(tǒng)計(jì)及物種注釋分析

通過以上不同飼喂條件小鼠生長(zhǎng)和免疫指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知枯草芽孢桿菌發(fā)酵蝦頭制劑具有降低小鼠體脂和提高小鼠免疫力的效果。為探討這一效果的影響機(jī)理，本研究從腸道菌群變化方面進(jìn)行了進(jìn)一步研究。

2.3.1 微生物多樣性Alpha分析

首先對(duì)微生物多樣性Alpha指數(shù)（物種總數(shù)、香農(nóng)指數(shù)及辛普森指數(shù)）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用于分析不同飼喂條件下每組小鼠組內(nèi)的微生物群落多樣性與豐度，即不同實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道菌群的種群數(shù)量。物種總數(shù)為直觀觀測(cè)到的物種數(shù)目，反映了腸道菌群的豐富度，而香農(nóng)指數(shù)和辛普森指數(shù)為同時(shí)考慮腸道菌群的豐富度與均勻度的指數(shù)，其中辛普森指數(shù)主要反映了腸道菌群的均勻度。不同時(shí)期不同實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道菌群的物種總數(shù)、香農(nóng)指數(shù)和辛普森指數(shù)見圖3。

圖3 各實(shí)驗(yàn)組小鼠物種總數(shù)、香農(nóng)指數(shù)和辛普森指數(shù)Fig.3 Observed species，Shannon，Simpson parameter of each experimental group

圖3A直觀反映OTUs的指標(biāo)物種總數(shù)，其數(shù)值越大，代表樣品中OTUs數(shù)越高即樣品中檢測(cè)到的序列越多，樣品中細(xì)菌的豐富度越高。按照時(shí)間橫向?qū)Ρ?，W1、W3和W4各實(shí)驗(yàn)組物種總數(shù)無顯著性差異（P＞0.05），MH-W2組物種總數(shù)顯著低于NC-W2組（P＜0.05），而 MC-W2 組與 MH-W2、NC-W2組均無顯著性差異（P＞0.05）。按照時(shí)間縱向?qū)Ρ?，NC組從W1到W2，W3到W4有顯著增加；MC組只在W3到W4有顯著性增加；而MH組則一直呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)。群落多樣性越豐富，物種分布越均勻，香農(nóng)指數(shù)與辛普森指數(shù)越大。由圖3B可知，按照時(shí)間橫向?qū)Ρ?，MH-W1組香農(nóng)指數(shù)顯著低于 NC-W1組（P＜0.05）；W2、W3和W4各實(shí)驗(yàn)組香農(nóng)指數(shù)均無顯著性差異（P＞0.05）。按照時(shí)間縱向?qū)Ρ?，NC組香農(nóng)指數(shù)在實(shí)驗(yàn)期間保持平穩(wěn)，代表其腸道菌群的多樣性和均勻度相對(duì)穩(wěn)定；MC、MH組香農(nóng)指數(shù)從W1到W2持續(xù)增長(zhǎng)，后續(xù)實(shí)驗(yàn)期間無顯著性變化（P＞0.05）。由圖3C可知，MH-W1組辛普森指數(shù)顯著低于NC-W1組（P＜0.05），其余各時(shí)期各組無顯著差異（P＞0.05）。

結(jié)合生物豐度指數(shù)物種總數(shù)與多樣性香農(nóng)、辛普森指數(shù)，可以發(fā)現(xiàn)維持飼料中添加未發(fā)酵蝦頭MC組和發(fā)酵蝦頭制劑MH組在實(shí)驗(yàn)期間相對(duì)于維持飼料的對(duì)照組NC，小鼠腸道菌群總體的多樣性和豐度沒有顯著性提升，W3、W4時(shí)不同實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道菌群的多樣性和豐度也沒有顯著性差異，證明維持飼料中添加未發(fā)酵的蝦頭和發(fā)酵蝦頭制劑不會(huì)破壞小鼠腸道菌群整體的多樣性和豐度。

2.3.2 物種聚類分析

在了解各實(shí)驗(yàn)組菌群的多樣性和豐度情況后，對(duì)各實(shí)驗(yàn)組中不同菌群的相對(duì)豐度進(jìn)行聚類注釋，進(jìn)一步探究腸道菌群內(nèi)不同菌群的占比。種水平上各實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)期相對(duì)豐度前10的物種柱形圖見圖4。

圖4 種水平上的物種相對(duì)豐度的柱形圖Fig.4 Histogram of relative abundance of species at different levels

由圖4可知，相對(duì)豐度前5的菌種分別為羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri）、木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus）、約氏乳桿菌（Lactobacillus johnsonii）、產(chǎn)酸擬桿菌（Bacteroides acidifaciens）和鼠乳桿菌（Lactobacillus murinus）。

羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri）是國(guó)際上公認(rèn)的黏附性強(qiáng)、改善腸道環(huán)境，拮抗有害菌定植，避免腸道疾病的益生乳酸菌[15]，也是我國(guó)2010年衛(wèi)健委批準(zhǔn)的可用于食品的菌種。木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus）是革蘭陽(yáng)性桿菌，弱致病性的凝固酶陰性葡糖球菌的一種，主要存在于肉的腌制過程中的一種腐敗菌[16]，還有研究表明該菌會(huì)引起奶牛乳腺炎[17]。約氏乳桿菌（Lactobacillus johnsonii）同樣為我國(guó)2010年衛(wèi)健委批準(zhǔn)的可用于食品的菌種。其功能主要為抑菌[18]、抗炎[19]、提高臟器指數(shù)[20]和改善腸道環(huán)境[21]。約氏乳桿菌亞型PM308還有改善肥胖體質(zhì)、降低體脂肪及減少膽固醇的用途，同時(shí)約氏乳桿菌還廣泛存在于抗過敏益生菌當(dāng)中。產(chǎn)酸擬桿菌（Bacteroides acidifaciens）作為腸道擬桿菌屬的一種，主要的功能是可化能有機(jī)營(yíng)養(yǎng)，產(chǎn)生機(jī)體所需的營(yíng)養(yǎng)和能量。有研究證明Bacteroides acidifaciens促進(jìn)脂肪代謝[22]、治療糖尿病和肥胖[23]和改善人類患者的放療反應(yīng)[24]。鼠乳桿菌（Lactobacillus murinus）是一種潛在益生菌，具有抗腸道炎癥[25]和防治遲發(fā)性敗血癥的效果[26]。

由圖4可知，除了MH-W3組的羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri）豐度與MC-W3組基本相等，MH組羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri）和約氏乳桿菌（Lactobacillus johnsonii）這兩種益生菌豐度均高于MC組；NC組約氏乳桿菌（Lactobacillus johnsonii）僅在W1時(shí)高于MC組，NC組羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri）僅在W4高于MC組；而弱致病性的木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus）僅在NC-W4組中富集；鼠乳桿菌（Lactobacillus murinus）在 NC-W1、W2和 W4組有明顯的富集，可能是小鼠腸道有炎癥導(dǎo)致該菌豐度上升[27]。

通過物種聚類分析，研究發(fā)現(xiàn)添加枯草芽孢桿菌發(fā)酵蝦頭MH組對(duì)腸道乳酸菌等有益微生物有明顯增殖作用，對(duì)于優(yōu)化腸道菌群構(gòu)成，維持腸道環(huán)境有積極的意義，這與周夢(mèng)佳等[28]和趙力等[29]研究結(jié)果相似。而添加未發(fā)酵蝦頭MC組對(duì)腸道菌群的益生效果雖然不如MH組，但相較于維持飼料NC組還是有一定的益生作用，表明蝦頭豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有利于小鼠腸道的健康。NC-W4對(duì)照組小鼠腸道木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus） 和鼠乳桿菌（Lactobacillus murinus）相對(duì)豐度提高，推測(cè)可能患有輕微的腸道炎癥，進(jìn)一步說明了蝦頭原料和枯草芽孢桿菌蝦頭發(fā)酵制劑在抑制腸道有害菌群方面的作用，其中枯草芽孢桿菌發(fā)酵蝦頭制劑效果更為明顯。

2.3.3 多樣本比較分析

不同時(shí)期不同實(shí)驗(yàn)組NMDS分析見圖5。

圖5 各實(shí)驗(yàn)組NMDS分析Fig.5 NMDS analysis of each experimental group

多樣本比較分析通過NMDS來表明各實(shí)驗(yàn)組之間的菌群的差異性，體現(xiàn)菌群分析結(jié)果的可信性，根據(jù)樣本中包含的菌群物種信息，通過點(diǎn)與點(diǎn)間的距離體現(xiàn)組間和組內(nèi)差異，通常Stress值小于0.2時(shí)，說明NMDS可以準(zhǔn)確反映樣本間的差異程度。圖5展示了基于OTUs水平的NMDS分析結(jié)果，不同點(diǎn)表示不同時(shí)期各實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道菌群，同時(shí)期相同實(shí)驗(yàn)處理組的點(diǎn)之間的距離遠(yuǎn)近反映了小鼠腸道菌群樣品的重復(fù)性強(qiáng)弱，不同圈之間的距離反映不同時(shí)期不同處理下小鼠腸道菌群的差異大小。Stress值為0.135，說明該NMDS分析可以反映不同時(shí)期各實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道菌群的差異性，隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)組W1、W2、W3、W4時(shí)小鼠腸道菌群差異明顯，而同一時(shí)期下各實(shí)驗(yàn)組也有所差異。該NMDS分析直觀表現(xiàn)了不同時(shí)期飼喂未發(fā)酵蝦頭與枯草芽孢桿菌發(fā)酵蝦頭制劑對(duì)小鼠腸道菌群的差異性。

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，在小鼠標(biāo)準(zhǔn)維持日糧中額外添加0.1%枯草芽孢桿菌發(fā)酵蝦頭制劑與額外添加0.1%蝦頭組的小鼠相比，可顯著降低飼喂小鼠的體脂率62.9%，與飼喂維持日糧相比可提升小鼠的脾臟指數(shù)35.7%，同時(shí)小鼠腸道中羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri）、約氏乳桿菌（Lactobacillus johnsonii）等有益微生物相對(duì)豐度增加?？莶菅挎邨U菌發(fā)酵蝦頭制劑具有降低體脂、提高免疫力和維持腸道益生菌群平衡的效果，具有在高端寵物飼料添加劑領(lǐng)域的應(yīng)用潛力。本研究對(duì)提升蝦頭的使用價(jià)值，促進(jìn)蝦加工副產(chǎn)物的高值化加工利用具有一定的借鑒意義。