詹福壽，萬 艷，馬一婧，宋旭梅，霍正浩

早產(chǎn)是指妊娠滿28周而不足37周分娩者，是妊娠常見的并發(fā)癥之一。國外研究報道，全球每年約有1 500萬的早產(chǎn)兒出生，歐洲早產(chǎn)的發(fā)生率為5%～9%，美國為12%～13%，而非洲及北美洲早產(chǎn)的發(fā)生率更高[1]。我國早產(chǎn)的發(fā)生率為5%～15%，且呈逐年增加的趨勢。美國早產(chǎn)兒的醫(yī)療支出每年高達26億美元，超出了其他任何一種疾病[2]。早產(chǎn)是導(dǎo)致近年來我國新生兒發(fā)病和死亡的主要原因[3]。早產(chǎn)分為自發(fā)性早產(chǎn)(SPTD)和治療性早產(chǎn)(TPTD)兩種，其中75%～85%的早產(chǎn)為自發(fā)性早產(chǎn)[4]。相關(guān)研究表明SPTD的發(fā)生與免疫和炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子有關(guān)，這些細(xì)胞因子的單核苷酸多態(tài)性可以影響SPTD的發(fā)生風(fēng)險[5]。本研究對寧夏地區(qū)人群SPTD患者和正常足月分娩產(chǎn)婦白細(xì)胞介素-10(IL-10)基因rs1800872位點多態(tài)性進行檢測，旨在探討該位點多態(tài)性與SPTD的關(guān)聯(lián)性。

1 資料與方法

1.1研究對象

1.1.1 SPTD組：收集2013年1月至2021年8月在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院和銀川市婦幼保健院產(chǎn)科住院分娩的SPTD患者401例，平均年齡(28.13±3.16)歲，平均孕齡(32.64±3.07)周。病例組入選標(biāo)準(zhǔn)：①寧夏地區(qū)孕產(chǎn)婦，無異族通婚且祖籍為寧夏；②單胎；③孕周明確；④分娩孕周為28～36+6周，分娩方式為自然分娩或臨產(chǎn)后因產(chǎn)程異?；蛱壕狡刃衅蕦m產(chǎn)術(shù)。排除妊娠期高血壓病、妊娠期糖尿病、胎盤前置、胎盤早剝、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥、雙胎以及合并心血管、內(nèi)分泌、肝腎系統(tǒng)等疾病。SPTD組按照新生兒出生時的孕周大小分為2組[6]：早期SPTD組(28～31+6周)和中晚期SPTD組(32～36+6周)。

1.1.2 對照組：選擇同期在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院和銀川市婦幼保健院產(chǎn)科住院分娩，年齡與SPTD組相匹配的正常足月分娩產(chǎn)婦418例，平均年齡(27.27±2.63)歲，平均孕齡(38.22±1.68)周。對照組入選標(biāo)準(zhǔn)：①寧夏地區(qū)孕產(chǎn)婦，無異族通婚且祖籍為寧夏；②單胎；③孕周明確；④分娩孕周≥37周，無早產(chǎn)史，分娩方式為自然分娩或因產(chǎn)科手術(shù)指征及社會因素行剖宮產(chǎn)術(shù)者。

1.2 方法

1.2.1 基因組DNA提?。嚎崭钩槿⊙芯繉ο笸庵莒o脈血3 mL，EDTA-K2抗凝，按照試劑盒說明書操作提取全血DNA，使用核酸分析儀測定提取DNA的純度和濃度。

1.2.2 引物的設(shè)計及合成：設(shè)計rs1800872位點引物，正向引物5’-GGTGAGCACTACCTGACTAGC -3’，反向引物5’-CCTAGGTCACAGTGACGTGG -3’，由深圳華大基因科技股份有限公司合成。

1.2.3 PCR擴增：PCR反應(yīng)體系,樣本DNA 1.0 μl，正、反向引物各0.37 μl，PCR MIX 12.5 μl，TaqDNA聚合酶0.25 μl，雙蒸水10.5 μl。PCR反應(yīng)條件：96 ℃預(yù)變性5 min 1次，變性95 ℃ 30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共36個循環(huán)，72 ℃再延伸6 min。

1.2.4 RFLP基因分型：酶切反應(yīng)體系：PCR擴增產(chǎn)物10.0 μl，RsaⅠ限制性內(nèi)切酶1.0 μl，雙蒸水9.0 μl,37 ℃水浴中反應(yīng)3 h。取10 μl酶切反應(yīng)產(chǎn)物進行電泳，凝膠成像儀下判定樣本基因型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用例數(shù)或率(%)表示,組間基因型頻率和等位基因頻率比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗：寧夏地區(qū)人群SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點基因多態(tài)性分布符合H-W平衡(P>0.05)，具有該地區(qū)群體代表性。

2.2 IL-10基因rs1800872位點基因分型結(jié)果：PCR產(chǎn)物目的片段擴增長度為412 bp，被RsaⅠ限制性內(nèi)切酶內(nèi)切后可見3種基因型，分別為CC基因型(412 bp)、AC基因型(412 bp，236 bp，176 bp)和AA基因型(236 bp，176 bp)，見圖1(封二)。

2.3 Sanger測序:測序結(jié)果與RFLP分型結(jié)果完全一致，見圖2(封二)。

2.4 寧夏地區(qū)人群SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點基因型與等位基因頻率比較：寧夏地區(qū)人群SPTD組IL-10基因rs1800872位點基因型頻率分別為CC(10.97%)、AC(44.14%)、AA(44.89%)，等位基因頻率分別為C(33.04%)、A(66.96%)。寧夏地區(qū)人群對照組IL-10基因rs1800872位點基因型頻率分別為CC(11.24%)、AC(42.82%)、AA(45.93%)，等位基因頻率分別為C(32.66%)、A(67.34%)。寧夏地區(qū)人群SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點的基因型和等位基因頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 寧夏地區(qū)人群SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點基因多態(tài)性分布情況[n(%)]

2.5 早期SPTD組和中晚期SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點基因型與等位基因頻率比較：按照新生兒出生時的孕周大小分為早期SPTD組和中晚期SPTD組2組，早期SPTD組與對照組相比，CC和AC基因型頻率相似(P>0.05)，AA基因型頻率低于對照組(P<0.05)，C等位基因的頻率高于對照組(P<0.05)，A等位基因的頻率低于對照組(P<0.05)，見表2；中晚期SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點的基因型和等位基因頻率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表2 早期SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點基因多態(tài)性分布情況[n(%)]

表3 中晚期SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點基因多態(tài)性分布情況[n(%)]

3 討論

國外流行病學(xué)研究顯示，黑種人SPTD的發(fā)病率明顯高于白種人，非洲裔美國人群中SPTD的發(fā)病率至少為歐洲裔美國人群的2倍，提示SPTD的發(fā)生可能與種族密切相關(guān)[7]。姚天一等[8]研究發(fā)現(xiàn)，SPTD的發(fā)生有一定的家族傾向，曾有SPTD史的女性再次生育時發(fā)生SPTD的風(fēng)險明顯增高，且有早產(chǎn)史的女性可將SPTD危險性遺傳給后代。感染和炎癥是導(dǎo)致孕婦SPTD發(fā)生的主要危險因素，感染性SPTD的發(fā)生與孕婦血清、羊水及宮頸分泌物中炎性細(xì)胞因子的表達量增加相關(guān)[9]。DEFRANCO等[10]研究表明，SPTD的發(fā)生尤其是感染性SPTD與遺傳因素密切相關(guān)。IL-10基因位于1q31～32，其啟動子區(qū)域rs1800872多態(tài)性位點可調(diào)節(jié)血漿中IL-10的表達水平[11]。IL-10基因rs1800896、rs1800871和rs1800872三個多態(tài)性位點組成的單倍型ATA與血漿中IL-10的低水平表達有關(guān)[12]。TSIARTAS等[13]研究發(fā)現(xiàn)SPTD孕婦血漿中的IL-10表達水平增高，提示血漿中IL-10表達水平增高與SPTD患病風(fēng)險的升高有相關(guān)性。國內(nèi)相關(guān)研究也認(rèn)為，IL-10基因表達水平異常與SPTD的發(fā)生密切相關(guān)[14-15]。

目前關(guān)于SPTD與IL-10基因多態(tài)性的研究大多是針對非洲及歐洲人群，而不同種族和地區(qū)基因多態(tài)性分布存在差異。本研究結(jié)果顯示，寧夏地區(qū)人群SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點的基因多態(tài)性分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。按照新生兒出生時的孕周大小分為早期SPTD組和中晚期SPTD組2組，早期SPTD組與對照組相比，CC和AC基因型頻率相似(P>0.05)，AA基因型頻率低于對照組(P<0.05)，C等位基因的頻率高于對照組(P<0.05)，A等位基因的頻率低于對照組(P<0.05)；中晚期SPTD組與對照組IL-10基因rs1800872位點的基因多態(tài)性分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果表明攜帶AA基因型的個體發(fā)生早期SPTD的風(fēng)險顯著降低，IL-10基因rs1800872位點多態(tài)性可能與寧夏地區(qū)早期SPTD的發(fā)病存在相關(guān)性。MOURA等[16]研究結(jié)果表明，IL-10基因rs1800896、rs1800871和rs1800872位點基因多態(tài)性與SPTD的發(fā)生風(fēng)險無相關(guān)性。VELEZ等[17]在歐洲裔美國人群的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-10基因rs1800896位點多態(tài)性與SPTD的遺傳易感性相關(guān)。楊曉[18]等探討了IL-10基因rs1800871位點基因多態(tài)性與SPTD遺傳易感性的關(guān)聯(lián)性，結(jié)果表明該位點基因多態(tài)性與SPTD的患病風(fēng)險無顯著性關(guān)聯(lián)，然而依據(jù)出生時的孕周將病例組進行分組與對照組比較后發(fā)現(xiàn)，攜帶TC或CC基因型的個體較攜帶TT基因型的個體發(fā)生早期SPTD的風(fēng)險顯著升高。研究結(jié)論不同的原因，考慮可能是IL-10基因地區(qū)和種族之間的差異對SPTD遺傳易感性不同而所致。