黃文靜 陳克河

流行病學(xué)調(diào)查顯示，在消化道的惡性腫瘤中，胃癌發(fā)病率占消化道惡性腫瘤的40%～50%[1]。隨著人們?nèi)粘Ｉ罟?jié)奏以及生活方式的改變，胃癌患者呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)[2]。目前，在世界范圍內(nèi)，胃癌患者的發(fā)病率在惡性腫瘤中居于第二位，死亡率高達(dá)23.2%，居于惡性腫瘤死亡率的首位[3]。在對(duì)胃癌的診斷過(guò)程中，目前所已知的腫瘤標(biāo)志物的診斷特異度不高，診斷效能低下。再生因子4(REG Ⅳ)主要在患者的近端胃腸道表達(dá)，在腫瘤組織以及炎性細(xì)胞中異常表達(dá)，同時(shí)參與了患者的腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移[4]。氧調(diào)節(jié)蛋白(ORP150)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較為重要的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)對(duì)肽類物質(zhì)，有研究報(bào)道顯示[5]，患者的ORP150水平與胃癌的發(fā)生發(fā)展具有顯著的相關(guān)性。微小核酸物質(zhì)miRNA-223對(duì)于患者的腫瘤細(xì)胞的增殖以及浸潤(rùn)具有顯著的抑制性作用[6]，本研究通過(guò)分析REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌的診斷價(jià)值，為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我院2018年1月至2020年3月收治的126例胃癌患者作為研究對(duì)象，其中男性59例，女性67例，年齡平均為(65.44±5.31)歲，平均體重指數(shù)(24.15±1.33)kg/m2，病變部位：胃底賁門26例、胃體50例、胃竇50例，分化程度：低分化39例、中分化32例、高分化55例，TNM分期：Ⅰ期患者34例、Ⅱ期患者35例、Ⅲ期患者38例、Ⅳ期患者19例。另選我院同期體檢正常者126例作為對(duì)照組。2組一般資料之間的差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。所有患者均知情同意，并經(jīng)倫理委員會(huì)論證。

表1 2組患者的基礎(chǔ)資料比較

胃癌患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，②所有患者的病理分期為Ⅰ～Ⅳ期；③在本次研究前，所有患者均未開(kāi)展放化療以及手術(shù)治療；④患者的預(yù)期生存時(shí)間在3個(gè)月以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重的肝腎功能障礙患者；②合并其他腫瘤疾病患者；③消化道穿孔以及嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良患者。

1.2 檢測(cè)方法

所有研究對(duì)象入組后，采集肘靜脈血液4 ml，3500 r/min離心15 min，采用酶聯(lián)免疫法對(duì)患者的REG Ⅳ、ORP150水平進(jìn)行檢測(cè)，檢驗(yàn)試劑由上海羅氏提供，操作流程嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。miR-223通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)表達(dá)水平。使用Trizol試劑按試劑盒說(shuō)明書從患者的血細(xì)胞中提取總RNA，勻漿后依次加入trizol、氯仿、異丙醇及75%乙醇抽提樣本總RNA，獲取RNA后使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒中RNA保存液溶解，于-20℃保存。向總RNA中先后加入去除gDNA的DNA eraser及逆轉(zhuǎn)錄酶，按說(shuō)明書配置成20 μl的體系，在37℃的條件下行RT-PCR 15 min，在85℃的條件下維持15 s后終止。以逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA作為模板進(jìn)行qPCR反應(yīng)。以GAPDH的表達(dá)量作為內(nèi)參。

1.3 分析方法

1.3.1 2組REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較 分別對(duì)觀察組以及對(duì)照組的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平進(jìn)行比較。

1.3.2 不同分期以及分化程度胃癌患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較 分別對(duì)不同TNM分期以及不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較。

1.3.3 相關(guān)性分析 采用spearman相關(guān)性分析對(duì)患者的REG Ⅳ、ORP150、miRNA-223水平與患者的分化程度以及TNM分期情況的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1.3.4 聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線分析 分別對(duì)REG Ⅳ、ORP150、miRNA-223單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能進(jìn)行分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

觀察組REG Ⅳ、ORP150水平顯著高于對(duì)照組，miRNA-223水平顯著低于對(duì)照組，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見(jiàn)表2。

表2 2組REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

2.2 不同TNM分期患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

Ⅰ～Ⅱ期患者的REG Ⅳ、ORP150水平顯著低于Ⅲ～Ⅳ期，miRNA-223水平顯著高于Ⅲ～Ⅳ期患者，差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同TNM分期患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

2.3 不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平之間的差異之間的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，經(jīng)過(guò)兩兩比較，隨著腫瘤的分化程度的進(jìn)展，患者的REG Ⅳ、ORP150水平顯著升高，miRNA-223水平顯著降低，見(jiàn)表4。

表4 不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

2.4 相關(guān)性分析

通過(guò)相關(guān)性分析，胃癌的進(jìn)展(分化程度、TNM分期)與REG Ⅳ、ORP150呈現(xiàn)正相關(guān)，與miRNA-223呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表5。

表5 相關(guān)性分析

2.5 胃癌聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線分析

REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌的診斷靈敏度顯著高于單獨(dú)檢測(cè)。通過(guò)ROC曲線分析，對(duì)于胃癌的診斷而言，患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平的臨界值分別為6.11 ng/mL，10.52 ng/mL以及4.77 fmoL/L，見(jiàn)表6以及圖1。

圖1 胃癌聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線分析

表6 胃癌聯(lián)合檢測(cè)分析

3 討論

胃癌是臨床常見(jiàn)的消化道腫瘤疾病之一，有研究報(bào)道指出[8]，隨著生活方式的不斷變化，胃癌的發(fā)生率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，同時(shí)，胃癌患者病死率較高。在臨床治療中，由于消化道腫瘤通常較為隱匿，當(dāng)患者被確診為胃癌時(shí)，多數(shù)已經(jīng)發(fā)展為中晚期，嚴(yán)重影響患者的生命安全以及生命質(zhì)量[9]。所以，在臨床上，早期對(duì)患者的疾病進(jìn)行診斷，早期開(kāi)展干預(yù)性治療，對(duì)于患者的預(yù)后具有積極的意義。

本研究中，觀察組患者的REG Ⅳ、ORP150顯著高于對(duì)照組，miRNA-223水平顯著低于對(duì)照組，且隨著胃癌患者的疾病分化程度進(jìn)展以及TNM分期的升高，患者的REG Ⅳ、ORP150水平顯著升高，miRNA-223水平顯著降低。分析認(rèn)為，ORP150主要在患者的腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)較高的表達(dá)，有研究報(bào)道指出[10]，患者的ORP150與患者的腫瘤細(xì)胞的凋亡顯著相關(guān)，在腫瘤細(xì)胞的無(wú)序生長(zhǎng)過(guò)程中，患者的局部組織處于缺糖、酸中毒以及嚴(yán)重的缺氧狀態(tài)，通過(guò)對(duì)患者的CHOP的顯著性表達(dá)調(diào)控，進(jìn)而影響患者的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常折疊作用，進(jìn)一步造成局部組織的癌變[11]。彭浩等[12]通過(guò)對(duì)胃癌患者的ORP150表達(dá)水平的分析發(fā)現(xiàn)，隨著患者的疾病進(jìn)展，患者的ORP150顯著升高，與本研究相互印證。在對(duì)患者的診斷過(guò)程中，REG Ⅳ主要在患者的胃腸道以及胰腺組織中進(jìn)行分泌性蛋白，在患者的REG Ⅳ的表達(dá)過(guò)程中，其顯著的表達(dá)產(chǎn)物可以顯著促進(jìn)患者的細(xì)胞的增殖，進(jìn)一步加劇患者的胃癌的進(jìn)展，在對(duì)患者的胃癌的REG Ⅳ表達(dá)中，29.4%的胃癌患者可表現(xiàn)為顯著的REG Ⅳ陽(yáng)性[13]。但是僅僅依靠REGⅣ對(duì)胃癌進(jìn)行診斷尚缺乏準(zhǔn)確性。黃容旺等通過(guò)對(duì)胃癌患者的REG Ⅳ水平的分析發(fā)現(xiàn)，隨著患者的胃癌的進(jìn)展，患者的REG Ⅳ顯著升高，與本研究相互印證[14]。

最近的研究發(fā)現(xiàn)，微小核酸物質(zhì)在胃癌患者的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。有研究報(bào)道指出，微小核酸物質(zhì)主要存在于真核細(xì)胞中，大量的研究證實(shí)，血液中的miRNA-223可作為患者的腫瘤標(biāo)志物，在胃癌的疾病進(jìn)展中，miRNA-223主要通過(guò)對(duì)患者的FBXW7hCdc4的顯著性抑制性作用，進(jìn)而對(duì)腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展發(fā)揮作用。王靜等通過(guò)對(duì)胃癌患者的miRNA-223水平分析發(fā)現(xiàn)，隨著患者的疾病進(jìn)展，患者的miRNA-223水平顯著降低，與本研究相互印證[15]。

另外，通過(guò)對(duì)患者的ROC曲線分析，對(duì)于胃癌患者的診斷而言，患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平的臨界值分別為6.11 ng/mL，10.52 ng/mL以及4.77 fmoL/L，以上數(shù)值可作為臨床診斷胃癌的重要依據(jù)，同時(shí)在對(duì)患者的治療中，以上數(shù)據(jù)可作為患者治療效果評(píng)價(jià)的重要依據(jù)。

綜上所述，REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌的診斷具有重要意義。