方 黎 李 偉

肺癌具體發(fā)病機(jī)制尚未完全揭示，早期患者病情較輕，無明顯癥狀，甚至可能未表現(xiàn)出任何不適感，因而在確診時(shí)多已發(fā)展至晚期[1]，因此臨床中及時(shí)評估和預(yù)測患者病情變化具有十分重要的意義[2]。細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1，human cytokeratin fragment antigen 21-1)是近年發(fā)現(xiàn)的肺癌診斷標(biāo)志物，存在于單層及復(fù)層上皮腫瘤細(xì)胞介質(zhì)中，CYFRA21-1可參與惡性腫瘤增殖、分化、浸潤及遷移過程。胃泌素釋放肽前體(ProGRP，pro-gastrin releasing peptide)屬于腦腸激素，ProGRP表達(dá)異常與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切的關(guān)系。金屬蛋白酶組織抑制劑1(TIMP-1，tissue inhibitor of metalloproteinase-1)與肺癌的發(fā)生與發(fā)展有密切的相關(guān)性[3-4]，但其表達(dá)水平與患者預(yù)后及病理特征的關(guān)系仍鮮有報(bào)道。本研究探討了患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP表達(dá)水平與肺癌病理特征的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院于2018年1月至2020年5月間收治的75例肺癌患者作為觀察組。男性患者39例、女性患者36例，平均年齡(53.47±6.18)歲，其中<45歲的患者19例、45～60歲的患者26例、>60歲的患者30例；無吸煙史33例、有吸煙史42例；病理類型：非小細(xì)胞肺癌41例、小細(xì)胞肺癌34例；腫瘤的分化程度：高分化25例、中分化21例、低分化29例；TNM分期：Ⅳ期28例、Ⅲ期21例、Ⅱ+Ⅰ期26例；腫瘤大小≤3 cm 40例、腫瘤大小≥3 cm 35例；淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移34例、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例；無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移45例、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移30例。參與本組研究的患者均符合如下條件：①經(jīng)影像學(xué)和病理組織學(xué)檢測確診為肺癌；②保存有完整影像學(xué)資料；③入組前未接受任何治療；④無急性或慢性感染；⑤無其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病；⑥患者及其家屬對本研究知情并簽署知情同意書。另外選取50例同時(shí)期存在肺部病變的非肺癌患者作為對照組，其中男性26例、女性24例，平均年齡(54.82±6.43)歲。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：①無腫瘤相關(guān)疾?。虎诓±頇z測確診為非肺癌；③患者及其家屬對本研究知情并簽署知情同意書。若患者符合如下任一指標(biāo)則將其排除出本研究：①未接受病理學(xué)檢查；②患者無法接受定期隨訪；③患者存在肝硬化、甲狀腺疾病；④存在其他部位原發(fā)腫瘤患者；⑤胚胎性腫瘤患者；⑥主動(dòng)申請退出本研究。2組受試者性別、年齡一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，分組合理，具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)審議并批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法

采集所有受試者空腹靜脈血3 mL置于肝素抗凝管中，靜置30～60 min，于離心機(jī)中3000 r/min離心10 min，收集上清液，即為患者的血清樣本。采用微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測患者血清中CYFRA21-1及ProGRP水平，儀器為羅氏化學(xué)發(fā)光檢測儀，配套試劑盒購自羅氏檢測公司；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測患者血清中TIMP-1水平，儀器為雅培化學(xué)發(fā)光檢測儀，所用試劑盒購自南京晶美生物科技有限公司。所有試劑操作均遵照試劑盒說明書的操作步驟進(jìn)行。

1.3 評價(jià)指標(biāo)

觀察2組研究對象的CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的差異，分析不同特征肺癌患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的差異，進(jìn)一步分析影響肺癌患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平

觀察組患者的血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP表達(dá)水平均明顯高于對照組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平

2.2 肺癌患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP水平與臨床病理特征的關(guān)系

觀察組患者中不同性別、不同年齡階段及有無吸煙史患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP表達(dá)水平比較均無明顯差異(P>0.05)；不同病理類型、病理分化程度及腫瘤大小患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP水平無明顯差異(P>0.05)，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP水平顯著低于TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，見表2。

表2 患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP水平與臨床特征關(guān)系

2.3 影響肺癌患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的因素分析

以TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移作為自變量，以患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平作為因變量，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移為其影響因素，見表3。

表3 影響肺癌患者CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的因素分析

3 討論

肺癌是臨床中較為常見的且死亡率居高不下的惡性腫瘤之一，因其發(fā)病率和死亡率不斷升高，已對人類的生命健康安全造成嚴(yán)重威脅[5]。肺癌患者的無瘤生存時(shí)間不足38個(gè)月，手術(shù)及相關(guān)綜合性治療措施治療后，肺癌患者在3年內(nèi)的死亡率高于35%[6]。因肺癌的病情進(jìn)展較快，臨床上認(rèn)為，對肺癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療可以極大地提高肺癌的治療有效率，因此，肺癌的診斷研究一直是腫瘤研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。目前，臨床中常采用X線片、CT、纖維支氣管鏡、支氣管造影及細(xì)胞學(xué)檢查等手段對肺癌患者進(jìn)行診斷檢查，在確診的患者中有80%已屬中晚期，因此患者失去手術(shù)的最佳時(shí)機(jī)。這些肺癌檢查手段具有一定的局限性，且目前尚缺乏特異性檢測與預(yù)測指標(biāo)，另外，對陽性患者再次進(jìn)行細(xì)胞學(xué)和病理學(xué)檢測的依從性較低，因此肺癌的確診率一直很低，多數(shù)患者在確診時(shí)多已發(fā)展至中晚期并伴隨局部侵襲與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。如果肺癌患者在Ⅰ期能夠被確診，并進(jìn)行恰當(dāng)?shù)闹委?，那?年內(nèi)的生存率可以提高至90%以上[7]。因此，加強(qiáng)患者血清腫瘤標(biāo)志物檢測對肺癌患者的初期診斷、治療及預(yù)后均具有重要的臨床意義。

隨著生物學(xué)的發(fā)展，腫瘤標(biāo)志物檢測在肺癌初期診斷和治療中已取得重大進(jìn)展，其便捷、無創(chuàng)、經(jīng)濟(jì)及準(zhǔn)確性受到臨床醫(yī)生的重視，已成為肺癌患者診斷與治療的重要方法和途徑。通常情況下，腫瘤標(biāo)志物價(jià)值主要取決于其特異性及敏感性[8]。目前臨床上常用的肺癌血清腫瘤標(biāo)志物主要包括癌胚抗原(CEA)、Cyfra21-1、鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCCA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、ProGRP、癌抗原125、糖鏈抗原19-9、腫瘤特異性生長因子等。單一腫瘤標(biāo)志物診斷肺癌存在一定局限性，腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測診斷肺癌成為近年來的研究熱點(diǎn)。

Cyfra21-1是人體內(nèi)細(xì)胞角蛋白19的兩個(gè)可溶性片段之一，是構(gòu)成細(xì)胞骨架中的一種間絲狀物質(zhì)，其分子量約為30 kD，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，細(xì)胞角蛋白(Cytokeratin，CK)可刺激Cyfra21-1釋放，參與癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致血清中Cyfra21-1含量升高[9]。有研究指出，細(xì)胞角蛋白19在包括層狀、鱗狀上皮細(xì)胞等諸多正常組織中均廣泛存在[10]。本組研究結(jié)果顯示，肺癌組患者血中CYFRA21-1水平明顯升高且高于對照組，在肺癌、食管癌等上皮來源的腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)中，蛋白酶激活后加速了細(xì)胞角蛋白的降解，使其以片段的形式釋放于血清中，對肺癌的診斷及預(yù)后評估具有十分重要的意義。胃泌素釋放肽(gastrin-releasing peptide，GRP)是從胃組織中分離出的一種類似蛙皮素(Bombesin)羧基末端的肽類物質(zhì)，因其在血液中含量穩(wěn)定而成為新型腫瘤標(biāo)志物[11]。但GRP在血清中半衰期較短，臨床中多難以有效及時(shí)進(jìn)行檢測診斷。有學(xué)者指出，肺癌細(xì)胞可以合成并分泌ProGRP，而ProGRP可通過旁分泌及細(xì)胞間相互作用促進(jìn)腫瘤分化增殖，加速病灶轉(zhuǎn)移，通過測量血清中ProGRP可有效反映肺癌的發(fā)生及發(fā)展[12]。本組研究結(jié)果顯示，肺癌組患者血中TIMP-1及ProGRP水平均明顯升高，且高于對照組。該結(jié)果提示TIMP-1及ProGRP均參與肺癌的進(jìn)展過程，TIMP-1及ProGRP可能是肺癌的腫瘤標(biāo)志物。有研究報(bào)道，ProGRP在正常人群中含量很低，血清總ProGRP濃度上限為50 pg/ml，然而在肺癌患者血清中ProGRP水平顯著升高，且高于正常人群及肺部良性病變組[13]。ProGRP是GRP重要的前體結(jié)構(gòu)，在神經(jīng)纖維、肺組織及非胃竇組織中均有合成及分泌，且ProGRP在血清中穩(wěn)定性較高。

本組研究結(jié)果提示CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP均參與肺癌的進(jìn)展過程，CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP可能是肺癌的腫瘤標(biāo)志物。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)分析認(rèn)為，CYFRA21-1是細(xì)胞骨架的重要成分，其表達(dá)水平的升高能導(dǎo)致肺癌細(xì)胞侵襲能力的上升，促進(jìn)其對于鄰近正常肺泡上皮組織的浸潤；TIMP-1表達(dá)水平的升高則會(huì)促進(jìn)肺癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移；ProGRP表達(dá)水平的升高能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞變形能力的改變，促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。肺癌組患者中不同年齡、性別及吸煙史患者血中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平無明顯差異，表明CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP與患者的年齡、性別及吸煙史無關(guān)。進(jìn)一步對不同病理特征患者血中CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP水平分析發(fā)現(xiàn)，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者血中CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP水平低于TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血中CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者。分析認(rèn)為，CYFRA21-1、TIMP-1與ProGRP的表達(dá)均與浸潤程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，隨著患者病情加重，患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移強(qiáng)度增高，且患者細(xì)胞外基底膜分解能力增強(qiáng)，進(jìn)而導(dǎo)致其水平異常增高，因而CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP可以用作肺癌的篩查腫瘤標(biāo)志物，與文獻(xiàn)報(bào)告結(jié)果一致[14]。然而，CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP的表達(dá)水平與肺癌的病理類型、分化程度及腫瘤體積無關(guān)。

綜上所述，在肺癌患者血清中CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP表達(dá)水平明顯上升，同時(shí)CYFRA21-1、TIMP-1及ProGRP水平的上升與肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)，但本研究為單中心研究且臨床樣本數(shù)較少，有待后續(xù)深入研究。