楊 雪，覃 圣，王 慧，千志松，戴珍珍，彭瑜雪，馬小琴，蔡 勇

（1. 西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730030；2. 西北民族大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)部，甘肅 蘭州 730030）

脂肪組織與動物體能量代謝息息相關(guān)。脂肪除大量沉積于皮下、腹部和內(nèi)臟器官周圍外，許多品種的綿羊尾部也具有超強(qiáng)的脂肪存儲能力[1]。

藏羊（Tibetan sheep，TS）又稱藏系綿羊，屬短瘦尾型綿羊，是我國現(xiàn)存最古老的羊種。高原型藏羊是藏系綿羊的主要類型，占藏羊總數(shù)量的91.4%，具有耐寒、耐干燥的特點(diǎn)。高原型藏羊主要分布于海拔為3 000～5 000 m的高寒地區(qū)，為高原農(nóng)牧民提供肉、毛等資源[2]。小尾寒羊（Small-Tailed Han sheep，STHS）是我國典型的短脂尾型綿羊品種，具有生長發(fā)育快、繁殖能力強(qiáng)、性能遺傳穩(wěn)定等特點(diǎn)，在我國綿羊養(yǎng)殖中占據(jù)重要地位[3]。不同品種的綿羊體脂分布差異很大，藏羊脂肪以大網(wǎng)膜脂肪（omental adipose tissue，OAT）、內(nèi)臟脂肪（visceral adipose tissue，VAT）為主，小尾寒羊脂肪以皮下（subcutaneous adipose tissue，SAT）、大網(wǎng)膜（omental adipose tissue，OAT）、尾部（tail adipose tissue，TAT）為主。隨著社會及經(jīng)濟(jì)水平不斷發(fā)展，一些抗病性較強(qiáng)且適應(yīng)能力較好的綿羊品種瀕臨滅絕[4-5]。因此，本文擬以藏羊?yàn)檠芯繉ο螅∥埠蜃鳛閷φ?，利用常?guī)組織學(xué)染色方法對兩種羊不同部位脂肪組織結(jié)構(gòu)及其脂肪細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行研究，以期為藏羊脂肪組織的相關(guān)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

試驗(yàn)選擇健康8 月齡藏羊和小尾寒羊各5 只，不區(qū)分雌、雄，均來自甘肅省天?？h武勝驛鎮(zhèn)屠宰場。

1.2 試劑與儀器

主要試劑：多聚甲醛粉、無水乙醇、二甲苯、濃鹽酸、苯酒精、蒸餾水、固體石蠟、HE 染色試劑盒，均購自北京索萊寶科技有限公司。

主要儀器：組織切片機(jī)、攤片機(jī)、全自動組織包埋機(jī)，均購自萊卡公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣本處理

屠宰后，采集試驗(yàn)羊大網(wǎng)膜、腎周和尾部脂肪組織各1 cm3，4%多聚甲醛固定48 h，更換多聚甲醛復(fù)固定。

1.3.2 脂肪組織石蠟切片制作

沖洗固定的脂肪組織塊，梯度酒精脫水，透明，石蠟包埋，切片、攤片、烤片。切片厚度為5 μm，常規(guī)HE染色。

1.3.3 脂肪組織測定與計(jì)算

參照寇潔[6]的方法，隨機(jī)選取10張切片，每張于200倍視野下隨機(jī)取5 個(gè)不同區(qū)域，采用Image-Proplus 6.0 圖像處理軟件測量藏羊和小尾寒羊各部位的HE染色切片中脂肪細(xì)胞數(shù)量和面積，計(jì)算不同部位單位面積內(nèi)脂肪細(xì)胞的數(shù)量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)采用EXCEL 軟件預(yù)處理，SPSS 17.0 軟件進(jìn)行差異顯著性分析。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 藏羊和小尾寒羊脂肪細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)比較（見圖1）

圖1 藏羊和小尾寒羊脂肪細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)比較Fig.1 Comparison of histological charateristics of adipose cells tissue of Tibetan sheep and Small-Tailed Han sheep

由圖1可知，細(xì)胞核被脂肪細(xì)胞壓縮在邊緣處，脂肪組織間存在毛細(xì)血管分布。藏羊尾部脂肪細(xì)胞大而飽滿，輪廓清晰，細(xì)胞多呈圓形、橢圓形或者多邊形狀。小尾寒羊大網(wǎng)膜脂肪、腎周脂肪可見細(xì)胞大而飽滿，脂肪細(xì)胞密集分布，細(xì)胞多呈橢圓或者多邊形狀。

將藏羊脂肪細(xì)胞與小尾寒羊脂肪細(xì)胞進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)藏羊大網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞及尾部脂肪細(xì)胞形態(tài)多樣。

2.2 藏羊和小尾寒羊不同部位脂肪組織比較（見表1）

表1 藏羊和小尾寒羊不同部位脂肪組織比較Tab.1 Comparison of adipose tissue cells in different parts between Tibetan sheep and Small-Tailed Han sheep

由表1 可知，小尾寒羊尾部脂肪平均直徑顯著高于大網(wǎng)膜脂肪與腎周脂肪（P＜0.05），分別為52.36、48.95、43.57 μm。藏羊尾部脂肪平均直徑高于腎周脂肪、大網(wǎng)膜脂肪，但腎周脂肪與尾部脂肪差異不顯著（P＞0.05），尾部脂肪與腎周脂肪平均直徑顯著高于大網(wǎng)膜脂肪（P＜0.05）。

藏羊腎周脂肪、尾部脂肪的平均直徑均顯著大于小尾寒羊（P＜0.05），其腎周脂肪細(xì)胞、尾部脂肪細(xì)胞平均直徑分別為58.40、59.81 μm；藏羊、小尾寒羊大網(wǎng)膜脂肪平均直徑分別為50.13、48.95 μm，差異不顯著（P＞0.05）。

由表1 可知，藏羊尾部脂肪細(xì)胞面積顯著高于大網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞面積（P＜0.05），小尾寒羊尾部脂肪細(xì)胞面積顯著高于腎周脂肪細(xì)胞面積（P＜0.05）。

藏羊的尾部、腎周脂肪細(xì)胞面積均顯著高于小尾寒羊（P＜0.05），但兩者大網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞面積差異不顯著（P＞0.05），分別為2 098.73、1 983.12 μm2。

由表1可知，藏羊大網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞數(shù)量顯著高于尾部、腎周脂肪細(xì)胞數(shù)量（P＜0.05），小尾寒羊腎周脂肪細(xì)胞數(shù)量顯著高于尾部、大網(wǎng)膜脂肪（P＜0.05）。

小尾寒羊的尾部、腎周脂肪數(shù)量均顯著高于藏羊（P＜0.05），大網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞數(shù)量顯著低于藏羊（P＜0.05）。

3 討論

3.1 不同品種綿羊脂肪細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)分析

本試驗(yàn)結(jié)果表明，藏羊與小尾寒羊大網(wǎng)膜、腎周和尾部的脂肪細(xì)胞均輪廓清晰、明顯。結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，藏羊脂肪組織中，腎周脂肪細(xì)胞和尾部脂肪細(xì)胞體積較相似，均顯著大于大網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞，且單位面積內(nèi)腎周脂肪細(xì)胞的數(shù)量低于大網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞。藏羊脂肪組織中的尾部脂肪細(xì)胞直徑最大，小尾寒羊脂肪組織中尾部脂肪細(xì)胞直徑最大，與藏羊和小尾寒羊的脂肪細(xì)胞成熟程度密切相關(guān)。

動物脂肪細(xì)胞分泌的一種蛋白質(zhì)激素瘦素，能夠調(diào)節(jié)動物食欲；機(jī)體脂肪儲存量越大，瘦素分泌越多，動物抵御寒冷的能力越強(qiáng)。脂尾型綿羊沉積能力更強(qiáng)，分化程度較高，也側(cè)面反映了生長環(huán)境對綿羊生長發(fā)育的影響。藏羊長期在惡劣的環(huán)境下生存，更能夠抵御嚴(yán)寒，適應(yīng)高海拔低氧的環(huán)境。

3.2 不同品種綿羊脂肪組織細(xì)胞平均直徑及面積分析

不同品種綿羊相同部位之間脂肪細(xì)胞平均直徑差異顯著，藏羊大網(wǎng)膜脂肪、腎周脂肪、尾部脂肪細(xì)胞直徑均大于小尾寒羊。徐紅偉[7]、康丹菊[8]研究發(fā)現(xiàn)，藏羊網(wǎng)膜脂肪、尾部脂肪面積大于小尾寒羊，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

藏羊與小尾寒羊不同部位脂肪組織各有優(yōu)、缺點(diǎn)。藏羊尾部脂肪平均直徑高于腎周脂肪、大網(wǎng)膜脂肪，但腎周脂肪與尾部脂肪差異不顯著，尾部脂肪與腎周脂肪平均直徑顯著高于大網(wǎng)膜脂肪；而小尾寒羊脂肪細(xì)胞平均直徑的大小次序?yàn)槲膊恐荆敬缶W(wǎng)膜脂肪＞腎周脂肪，3個(gè)部位間差異顯著。

楊廣禮等[9]研究發(fā)現(xiàn)，小尾寒羊的尾脂脂肪細(xì)胞面積顯著大于心脂、腎脂脂肪細(xì)胞，表明瘦尾型綿羊與短脂尾型綿羊的直徑、面積差異較大，且不同尾型對脂肪細(xì)胞面積具有一定影響；不同尾型綿羊不同部位脂肪組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)不一，脂肪組織沉積能力不同。

孫偉芳[10]研究發(fā)現(xiàn)，脂尾型綿羊尾部脂肪細(xì)胞的直徑、面積均高于短脂尾型綿羊。綜上可知，不同品種的綿羊其脂肪細(xì)胞的直徑、面積均不相同；即使品種相同，其不同部位的細(xì)胞數(shù)量也不相同。

藏羊不同部位脂肪組織單位面積內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的大小次序?yàn)榇缶W(wǎng)膜脂肪＞腎周脂肪＞尾部脂肪，說明藏羊生長發(fā)育中脂肪主要沉積于網(wǎng)膜、內(nèi)臟；而小尾寒羊單位面積細(xì)胞數(shù)量由大到小的順序?yàn)槟I周脂肪＞大網(wǎng)膜脂肪＞尾部脂肪，說明小尾寒羊生長發(fā)育早期脂肪主要沉積于腎周、網(wǎng)膜。

王燕新等[11]研究發(fā)現(xiàn)，幼齡動物脂肪沉積主要為脂肪細(xì)胞數(shù)量增多，而成年動物主要為脂肪細(xì)胞體積增大。韓吉龍[12]研究發(fā)現(xiàn)，在生長發(fā)育的早期階段，幼年脂尾羊尾部脂肪以細(xì)胞數(shù)目增多為主，從側(cè)面反映了在生長發(fā)育早期，尾部脂肪發(fā)育速度、沉積速度快。

楊東等[13]研究發(fā)現(xiàn)，脂肪細(xì)胞的大小與脂肪的沉積呈正相關(guān)，說明細(xì)胞增大越快，沉積能力越強(qiáng)；側(cè)面印證了脂肪的發(fā)育速度與細(xì)胞的增大速度有關(guān)，且與細(xì)胞沉積能力直接相關(guān)。劉政等[14]研究發(fā)現(xiàn)，脂肪細(xì)胞肥大的主要原因是細(xì)胞增大和細(xì)胞數(shù)目增多，而藏羊網(wǎng)膜脂肪數(shù)量多于小尾寒羊，說明綿羊以細(xì)胞數(shù)目增加和細(xì)胞增大為主，且與脂肪代謝有關(guān)。任瑞等[15]研究發(fā)現(xiàn)，綿羊適應(yīng)生活環(huán)境的程度與其基因型具有一定關(guān)聯(lián)，而基因型不同的綿羊，脂肪細(xì)胞分化情況也不同。Miao等[16]利用RNA-seq技術(shù)對小尾寒羊和多塞特羊脂肪組織的miRNAs進(jìn)行全基因組分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小尾寒羊脂肪組織中脂質(zhì)代謝活性較低。

此外，瘦尾型綿羊與短脂尾型綿羊因基因組之間存在差異，所適應(yīng)的生活環(huán)境也具有一定差異；綿羊生活在合適的環(huán)境當(dāng)中，可更好地發(fā)揮脂肪組織的功能。除綿羊基因型外，影響綿羊脂肪結(jié)構(gòu)最顯著的因素為飼養(yǎng)系統(tǒng)（營養(yǎng)飼料或牧草、牧草的植物學(xué)組成）、年齡和胴體重量、性別和解剖位置。

4 結(jié)論

藏羊與小尾寒羊脂肪組織細(xì)胞直徑最大的均為尾部脂肪細(xì)胞，與其脂肪細(xì)胞成熟程度密切相關(guān)。藏羊脂肪細(xì)胞平均直徑顯著大于小尾寒羊；小尾寒羊各部位脂肪組織細(xì)胞的直徑、面積及數(shù)量均存在差異。綜上所述，不同尾型綿羊不同部位脂肪組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)不一，且脂肪組織沉積能力不同。