鐘 萍，羅 威，陳鮮麗

（1.湛江幼兒師范?？茖W校，廣東湛江 524084；2.韶關(guān)學院醫(yī)學院，廣東韶關(guān) 512026）

脂類不僅為水生動物提供足夠的營養(yǎng)，也能對水生動物疾病預(yù)防起到免疫調(diào)節(jié)作用（吳學君和湯婷，2015）。適量脂類物質(zhì)不僅能節(jié)約飼料的蛋白來源，適量減少環(huán)境中氮污染，還能提高其飼料利用率，節(jié)約成本。目前，魚油是水產(chǎn)飼料配方中的重要脂類原料。但魚油的成本高，供應(yīng)量嚴重不足，且生產(chǎn)質(zhì)量參差不齊，因此急需尋找一種水產(chǎn)飼料中魚油替代物。植物油因其產(chǎn)量高、成本低被認為是能替代飼料中魚油的理想物質(zhì)之一（易新文等，2013）。研究表明，水產(chǎn)動物飼料中植物油可以部分替代魚油，且替代水平與魚的種類、年齡及個體大小有關(guān)。還有研究表明，飼料中植物油替代魚油的比例可能會影響魚類的生長發(fā)育和魚體健康，其影響程度與植物油種類和比例息息相關(guān)（文遠紅等，2016）。

橄欖油是一種從橄欖樹果實提取的木本油，是一種理想脂肪的重要原料。橄欖油的營養(yǎng)成分為不飽和脂肪酸、多酚、三萜烯二醇、維生素及類胡蘿卜素等，不飽和脂肪酸的含量達到82%～87%，其含量豐富，比大豆油與菜籽油的不飽和脂肪酸含量更高，更優(yōu)于橡膠籽油（Deng等，2015）；研究表明，橄欖油是一種膳食關(guān)鍵成分，長期服用對預(yù)防心血管疾病和癌癥有重要作用。

羅非魚是我國重要經(jīng)濟魚類之一，其市場前景較好，經(jīng)濟價值高；羅非魚生長速率快，養(yǎng)殖周期短，肉質(zhì)鮮美，已成為我國水產(chǎn)市場的重要經(jīng)濟品種（何金釗等，2019）。近年來，羅非魚的研究主要集中在營養(yǎng)研究和疾病免疫等方面（陳濤等，2019），對飼料中橄欖油替代魚油的應(yīng)用研究較少。因此，文章研究添加不同比例的橄欖油替代魚油對羅非魚生長性能的影響，以期為羅非魚的飼料研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 橄欖油、魚粉、豆粕、菜籽粕、棉粕、次粉、礦物質(zhì)預(yù)混料均購置于當?shù)仫暳蠌S，魚類購置當?shù)仞B(yǎng)殖場，挑選健康無病的魚類。

1.2 主要設(shè)備 立體壓力蒸汽滅菌鍋（YXQ-LS-40SII），室內(nèi)養(yǎng)殖循環(huán)養(yǎng)殖桶，數(shù)顯鼓風干燥箱，飼料制作機器，電子天平；恒溫水浴鍋；立式超低溫保溫箱，高效液相質(zhì)譜儀，電冰箱；分析試驗用純水機（PQROOP-01234）；渦旋機，玻璃皿若干燒杯，量筒，玻璃棒，棉花與紗布。

1.3 主要試劑與材料 魚粉，氫氧化鈉（10%，1?mol/L），HCl（10%，1?mol/L），硝酸鉀，NaCl，甲醇。

1.4 飼料配方設(shè)計 以蠶蛹粉、豆餅、菜籽粕、玉米蛋白粉為飼料蛋白原料，飼料橄欖油按0%、20%、40%、60%、80%、100% 等比例代替魚油，將所有原料使用粉碎機進行粉碎，且過50目篩，將所有的飼料原料與油類混合，加適量蒸餾水混勻，放入顆粒機中，將其制成2?mm的顆粒料，將飼料進行烘干處理，放入冰箱備用，配置為6種不同原料，試驗飼料配方組成如表1所示。

表1 試驗飼料配方組成

礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供：CuSO·5H2O?150?mg，F(xiàn)eSO4·5H2O?70?mg，ZnSO4·5H2O?120?mg，KI（2%）80?mg，Ca（H2PO4）2200?mg，NaCl?100?mg，MnSO4·5H2O?130?mg，MgSO4120?mg。

1.5 試驗飼養(yǎng)管理 試驗羅非魚均來自人工培育養(yǎng)殖廠，由水產(chǎn)推廣站提供。養(yǎng)殖試驗開始前對其羅非魚進行饑餓處理，選取840尾體重為4.12?g的健康無病羅非魚，將其隨機分為6組，每組4個重復(fù)，每組重復(fù)35尾魚，6組魚分別投喂標記飼料，按照試驗飼料標記進行分組。魚苗被放入飼養(yǎng)桶內(nèi)飼養(yǎng)，每個飼養(yǎng)桶放入相應(yīng)的魚類，飼養(yǎng)試驗為8周。

試驗在水產(chǎn)試驗養(yǎng)殖基地進行，開始正式試驗前對試驗魚類暫養(yǎng)2周，以便適應(yīng)水產(chǎn)基地養(yǎng)殖桶內(nèi)的水域環(huán)境。每天上午、中午、下午進行投喂，定期巡查，觀察魚類攝食情況和飼料投喂效率，每天準時記錄羅非魚的攝食情況和魚類飼養(yǎng)情況。養(yǎng)殖水為循環(huán)流動自來水，水溫為26～28℃。

1.6 樣品制備及相關(guān)指標測定 羅非魚飼養(yǎng)試驗結(jié)束后立即測量其體重，取出魚體肝胰臟，放入液氮罐中凍存。

采用凱氏定氮法測定飼料及魚體的粗蛋白質(zhì)含量，采用索氏抽提法測定粗脂肪，采用高溫灼燒法測定粗灰分，采用氧彈氏能量儀測定總能。飼料中脂肪酸和魚體不飽和脂肪酸使用高效液相色譜儀進行測定。參照其單種混合標準對其脂肪酸進行定性，而后使用標準方式計算脂肪酸含量。

1.7 飼養(yǎng)指標 飼養(yǎng)試驗結(jié)束后測量魚類的體重與體長，計算魚類增重率（WGR）、成活率、特定生長率（SGR）、相對增重率、餌料系數(shù)（FCR），公式如下：

特定生長率（SGR）/（%/d）=100×（ln終末體重-ln初始體重）/飼養(yǎng)天數(shù)；

餌料系數(shù)（FCR）=總投料量/增重量；

肥滿度（CF）=體重（g）/體長（cm）3×100；

成活率（SR）/%=存活尾數(shù)/初始尾數(shù)×100；

增重率（WGR）/%=（末均重－初均重）/初均重×100。

1.8 試驗數(shù)據(jù)分析 采用Excel?2013進行統(tǒng)計數(shù)據(jù)，用SPSS22.0進行單因素方差分析，結(jié)果數(shù)據(jù)以“均值±標準差”表示，P＜0.05表示組間差異顯著。

2 試驗結(jié)果

2.1 橄欖油替代魚油對羅非魚生長的影響 由表2可知，隨著飼料橄欖油替代水平不斷升高，羅非魚的增重率先上升后下降，在60%水平時增重率為5.27，與對照組存在顯著差異（P＜0.05）。隨著橄欖油替代水平的不斷上升，羅非魚的特定生長率和蛋白質(zhì)效率先上升后下降，飼料中橄欖油替代魚油水平為60%時，其值達到最大水平，分別為2.69和2.54，與對照組存在顯著差異（P＜0.05），而羅非魚的餌料系數(shù)不斷上升，替代水平為100%時其值與對照組存在顯著差異（P＜0.05）。飼料中橄欖油替代比例高于60%時，羅非魚的增重率和蛋白利用率明顯下降，且100%橄欖油替代比例會嚴重影響羅非魚的生長。各試驗組羅非魚存活率和攝食率均不存在明顯差異（P ＞ 0.05）。

表2 橄欖油替代比例對羅非魚生長性能的影響

2.2 橄欖油替代魚油對羅非魚生長形態(tài)的影響 由表3可知，用橄欖油替代魚油對羅非魚魚體的水分、粗灰分和粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響（P＞0.05）；與對照組相比，飼料中橄欖油替代水平為100%時，羅非魚魚體的粗脂肪含量顯著高于對照組（P＜0.05）；飼料中橄欖油替代水平為80%時，羅非魚的肝胰臟脂肪含量顯著高于對照組（P＜0.05），但替代水平為60%時羅非魚的肝胰臟脂肪含量顯著低于對照組（P＜0.05）。用橄欖油替代魚油，各組羅非魚的肝體比和臟體比與對照組無顯著差異（P＞0.05），但用60%的橄欖油替代魚油，羅非魚的肥滿度明顯高于對照組（P＜ 0.05）。

表3 橄欖油替代魚油對羅非魚的生長形態(tài)的影響

2.3 橄欖油替代魚油對羅非魚全魚脂肪酸營養(yǎng)成分影響 由表4可知，羅非魚全魚中共測出26種脂肪酸，其中9種為飽和脂肪酸（SFA），17種為不飽和脂肪酸（UFA）。在羅非魚脂肪酸營養(yǎng)成分中，脂肪酸含量最多的為C16：0和C18：1n-9。從脂肪酸組成看，飼料中用橄欖油替代魚油的比例不斷提高，羅非魚全魚PUFA的含量不斷上升，與對照組相比，用橄欖油替代魚油的比例為40%～100%時，羅非魚全魚PUFA的含量顯著高于對照組（P＜0.05）；而0%替代組羅非魚的SFA和MUFA含量最高，顯著高于其他各組（P＜0.05）。隨著飼料橄欖油替代比例不斷提高，羅非魚 C18：2n-6，C18：3n-3，C22：5n-3和C22：6n-3的含量不斷上升，飼料中用橄欖油替代魚油的比例為20%～100%時，羅非魚全魚C18：2n-6，C18：3n-3，C22：5n-3和C22：6n-3的含量顯著高于對照組（P＜0.05）；各試驗組羅非魚C20：4n-6和C20：5n-3的含量與對照組無顯著差異（P＞0.05）；此外，隨著飼料橄欖油替代比例的增加，羅非魚C16：0，C16：1n-7和C22：0的含量不斷下降，與飼料橄欖油替代魚油的比例呈負相關(guān)。用橄欖油替代魚油，羅非魚的C17：1含量與對照組無顯著差異（P＞0.05）。

表4 橄欖油替代魚油對羅非魚全魚脂肪酸營養(yǎng)成分的影響

3 討論

3.1 橄欖油替代魚油對羅非魚生長的影響 在本試驗結(jié)果中，橄欖油替代比例為60%時羅非魚的增重率最高，超過該比例時，羅非魚生長發(fā)育受到限制，且更高替代比例會抑制羅非魚生長。這與張新黨等（2018）的研究結(jié)果類似，即飼料中植物油代替部分魚油將不會影響其飼料效果。彭祥和等（2014）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中亞麻籽油替代比例超過50%會明顯抑制哲羅魚的生長，替代部分魚油不會明顯影響哲羅魚的生長。因而，本研究飼料中橄欖油的適宜替代水平可能會促進羅非魚生長。本試驗結(jié)果證明，飼料橄欖油的合適添加比例對羅非魚的生長存在明顯影響。飼料中橄欖油的替代比例與羅非魚的生長狀況、年齡和飼料原料組成存在顯著相關(guān)性。

此外，當飼料中橄欖油替代比例超過60%后，飼料中PUFA含量較高，會明顯抑制羅非魚的生長，而且飼料利用率較低，彭祥和等（2014）研究表明，亞麻籽油替代水平過高會嚴重影響羅非魚的生長，同時降低其飼料利用率。本試驗結(jié)果表明，飼料橄欖油替代比例過高會嚴重影響PUFA含量，其含量會超出魚類正常水平，會加重羅非魚脂類代謝負擔，對其生長發(fā)育產(chǎn)生不利影響。

3.2 橄欖油替代魚油對羅非魚生長形態(tài)的影響 研究表明，不同替代比例橄欖油對羅非魚粗蛋白質(zhì)、水分和粗灰分不存在顯著影響，但對羅非魚的粗脂肪存在顯著影響，這與其他魚類的研究結(jié)果類似。當橄欖油替代比例超過60%時，羅非魚脂肪含量會增加，這與其他魚類結(jié)果類似，脂肪能大量沉積在魚體肝臟中（程煒軒等，2021；張新黨等，2018）。這些結(jié)果表明，飼料中不同橄欖油替代水平會對羅非魚脂肪沉積產(chǎn)生重大影響，從而引起魚體脂肪肝綜合征。本研究發(fā)現(xiàn)，投喂高水平橄欖油飼料，羅非魚肝胰臟脂肪含量不斷上升，進而引起肝臟脂肪沉淀量增加。而在其他魚類研究中，飼料中亞麻籽油代替魚油能被魚類利用，不會影響其脂肪沉積。目前，對羅非魚的脂肪沉積機制研究不夠清晰，橄欖油替代魚油在魚類中的研究資料較少，需要進一步研究證明。

3.3 橄欖油替代魚油對羅非魚全魚脂肪酸營養(yǎng)成分的影響 本研究發(fā)現(xiàn)，羅非魚全魚脂肪酸營養(yǎng)成分與飼料配方存在顯著關(guān)系。羅非魚全魚共檢測出26種脂肪酸，其中9種為飽和脂肪酸（SFA），17種為不飽和脂肪酸（PUFA）。羅非魚中全魚脂肪酸C16：0和C18：1n-9含量最高，這與吉羅羅非魚（張新黨等，2018）的結(jié)果類似。羅非魚的營養(yǎng)成分主要由不飽和脂肪酸組成，這些脂肪酸在羅非魚體內(nèi)沉積。

在本試驗中，隨著飼料橄欖油含量的增加，羅非魚不飽和脂肪酸總量顯著增加，其結(jié)果與亞麻籽油飼喂的結(jié)果類似。Deng等（2015）研究發(fā)現(xiàn)，羅非魚將ALA轉(zhuǎn)化為長鏈不飽和脂肪酸，羅非魚能合成長鏈不飽和脂肪酸；這些結(jié)果表明，羅非魚對其飼料不飽和脂肪酸的利用效率較高。PUFA有效降低血壓、抗癌等醫(yī)用價值，因此，羅非魚具有較好的醫(yī)用價值。

在本試驗中，橄欖油的不同替代比例對羅非魚C20：4n-6含量無顯著影響，但羅非魚的C17：1含量與橄欖油替代比例呈正相關(guān)。這些研究結(jié)果表明，飼料中不飽和脂肪酸的利用率與魚類個體大小、代謝水平和環(huán)境有關(guān)。與其他魚類研究結(jié)果相比，羅非魚富含SFA、PUFA和單不飽和脂肪酸，n-3和n-6的含量較高，是補充人體營養(yǎng)物質(zhì)的理想食品來源，并具有廣闊的市場開發(fā)潛力。

4 結(jié)論

通過分析羅非魚全魚脂肪酸營養(yǎng)成分可以得出，羅非魚飼料配方具有一定的開發(fā)價值。測定羅非魚不飽和脂肪酸成分可以推測羅非魚對不飽和脂肪酸的需要量，調(diào)整飼料組成，用以促進生長、節(jié)約飼料蛋白，氨基酸平衡可以促進動物生長，節(jié)約飼料蛋白質(zhì)資源，減少含氮物質(zhì)對環(huán)境的污染。

用橄欖油替代部分魚油可能對羅非魚生長起到積極作用，同時優(yōu)化橄欖油代替比例，提高飼料利用效率，促進羅非魚生長。

飼料中橄欖油替代魚油會改善飼料營養(yǎng)成分，可有效改善羅非魚不飽和脂肪酸含量，有利于羅非魚吸收營養(yǎng)物質(zhì)。