王以燕，袁善奎*，農(nóng)向群，李 梅

（1. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125；2. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193）

術(shù)語是在特定學(xué)科領(lǐng)域用來表示基本概念的集合，是制定規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)的理論基礎(chǔ)，并準(zhǔn)確、簡潔表達(dá)相關(guān)詞條的定義。微生物農(nóng)藥的特性不同于化學(xué)農(nóng)藥，因此在術(shù)語表達(dá)方面具有特殊性。本文依據(jù)FAO/WHO《微生物農(nóng)藥指南》以及現(xiàn)有微生物農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)資料[1-3]，總結(jié)了微生物農(nóng)藥基本定義、分類、含量、雜質(zhì)、檢測等幾個方面相關(guān)的術(shù)語和釋義，旨在為微生物農(nóng)藥科研、教學(xué)、生產(chǎn)、推廣及管理等相關(guān)領(lǐng)域提供參考，推動行業(yè)規(guī)范發(fā)展。

1 基本術(shù)語

1.1 微生物農(nóng)藥（microbial pesticide/microbial pest control agent, MPCA）

以天然的或基因修飾的細(xì)菌、真菌、病毒等微生物活體為有效成分的農(nóng)藥。

1.2 微生物農(nóng)藥有效成分（microorganism active substance）

對有害生物控制發(fā)揮作用的微生物及其相關(guān)代謝產(chǎn)物，其可以是活的或者失活的微生物。

1.3 微生物農(nóng)藥母藥（technical grade of MPCA）

用于加工微生物農(nóng)藥制劑的微生物原料，是高純度的微生物農(nóng)藥存在形式，除含有生產(chǎn)過程中用于微生物生長或繁殖、以及用于典型純化或制備的一些物質(zhì)外，通常不含其他添加物或助劑，特殊情況下為便于貯存和運(yùn)輸會加入少量的防腐劑、穩(wěn)定劑或稀釋劑。

1.4 微生物農(nóng)藥制劑（microbial pest control product, MPCP）

以微生物農(nóng)藥活體作為有效成分的農(nóng)藥制劑產(chǎn)品，登記或標(biāo)注用于有害生物控制。

1.5 寄主/宿主（host）

為其他生物（寄生物）提供生存環(huán)境或養(yǎng)分的動物（包括人類）、植物或微生物。

1.6 增殖/繁殖（multiplication）

微生物在侵染過程中進(jìn)行復(fù)制或數(shù)量增加的能力。

1.7 定殖（colonization）

微生物在環(huán)境中增殖或持續(xù)存在的能力，如在生物體表（表皮）或內(nèi)部器官表面（如腸道、肺）、在機(jī)體外表環(huán)境（如表皮）或內(nèi)部環(huán)境（組織器官如消化道等）繁殖和持續(xù)存在的現(xiàn)象。微生物在所定殖的器官或部位持續(xù)時間較長，定殖數(shù)量可能保持穩(wěn)定或增長，也可能緩慢下降。定殖微生物可能是無害的，也可能是功能性或致病性微生物。

1.8 宿存（survival）

活性微生物使用后一定時間內(nèi)在動植物表面、體內(nèi)，或者土壤中保持活性的狀態(tài)。

1.9 侵染（infection）

病原微生物引入或進(jìn)入易感宿主的過程，無論其是否引起病理效應(yīng)或疾病。微生物必須進(jìn)入宿主的體內(nèi)，通常是細(xì)胞，并能夠繁殖形成新的感染單位。簡單地攝入病原體并不意味是侵染。

1.10 侵入（invasion）

微生物進(jìn)入寄主體內(nèi)（如穿透表皮層、腸上皮細(xì)胞等）的過程。病原微生物具有“原發(fā)侵入性”的特性。

1.11 致病性（pathogenicity）

微生物引起寄主疾病和/或造成寄主傷害的能力。很多病原菌通過毒性和侵入性，或者毒性和定殖能力的聯(lián)合作用產(chǎn)生致病性。但有些入侵病原菌引起的疾病是由寄主防御系統(tǒng)造成的異常反應(yīng)。

1.12 感染性（infectivity）

微生物突破或逃避宿主自然屏障、進(jìn)入宿主體內(nèi)并保持存活狀態(tài)或繁殖的能力。感染性可能涉及不同嚴(yán)重程度、部位和數(shù)量，但不涉及是否引起病理效應(yīng)或疾病表征。

1.13 生態(tài)位（ecological niche）

特定物種所占據(jù)的獨(dú)特環(huán)境位置，根據(jù)其在群落或生態(tài)系統(tǒng)中所占據(jù)的實(shí)際物理空間和所發(fā)揮的功能來感知。

1.14 共生現(xiàn)象（symbiosis）

兩種生物之間的一種相互作用，其中一種生物與另一種生物密切相關(guān)，這對兩種生物都有利。

2 分類術(shù)語

2.1 細(xì)菌農(nóng)藥（bacterial pesticide）

具有殺蟲、抑菌生物活性的單細(xì)胞原核微生物農(nóng)藥。其個體微小，形態(tài)簡單，以無性二分裂方式繁殖（裂殖），在自然界中分布最廣、數(shù)量最多。

2.1.1 芽胞1目前文獻(xiàn)中“芽孢”/“芽胞”均有使用，本刊采用“芽胞”。但《農(nóng)藥中文通用名稱》GB 4839-2009、近期的細(xì)菌類標(biāo)準(zhǔn)及我國農(nóng)藥登記注冊庫中的資料都采用“芽孢”。（內(nèi)生胞子）（endospore） 細(xì)菌的休眠體（圓形、橢圓形或柱形）。一個芽胞萌發(fā)后只形成一個細(xì)菌，芽胞抗熱性極強(qiáng)，折光性很強(qiáng)，便于在顯微鏡下計數(shù)。芽胞類細(xì)菌在微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中數(shù)量最多，如蘇云金芽胞桿菌、枯草芽胞桿菌等。

2.1.2 胞囊2文獻(xiàn)中“胞囊”/“孢囊”均有使用，較新近的文獻(xiàn)多用“胞囊”，本刊采用“胞囊”。（cyst） 某些細(xì)菌在外界不利條件下，由整個營養(yǎng)細(xì)胞外壁加厚、細(xì)胞失水而形成一種抵抗干旱但不抗熱的圓形休眠體。

2.1.3 營養(yǎng)體（vegetative） 單個活的生物體，通常能在合適培養(yǎng)基上形成一個菌落實(shí)體。

2.2 真菌農(nóng)藥（fungal pesticide）

具有殺蟲、防病等生物活性的真核微生物農(nóng)藥。一般能通過無性和有性繁殖方式產(chǎn)生的孢子延續(xù)種群，常見有分生孢子、芽生孢子、厚垣孢子等繁殖體或菌絲營養(yǎng)體。

2.2.1 孢子（spore） 真菌的繁殖體，有多種類型。

2.2.1.1 分生孢子（conidium） 由分生孢子梗上產(chǎn)孢細(xì)胞（頂生或側(cè)生、串生或簇生，形狀、大小多種，單胞或多胞）產(chǎn)生無色或有色的無性繁殖細(xì)胞，是真菌農(nóng)藥中最常見的孢子形態(tài)。常見的有球孢白僵菌、金龜子綠僵菌等。

2.2.1.2 芽生孢子（blastospore） 由細(xì)胞出芽生成（細(xì)胞膜和原生質(zhì)體隨某部位細(xì)胞壁向外突出，其一個細(xì)胞核留在母細(xì)胞，另一個進(jìn)入突起中，形成突起過程即為出芽），形態(tài)多變，無性葉狀真菌孢子，酵母菌、隱球菌及念珠菌可產(chǎn)生此類孢子。

2.2.1.3 厚垣孢子（chlamydospore） 由菌絲體膨大（原生質(zhì)濃縮）分裂產(chǎn)生壁厚、壽命長，具有抵御不良環(huán)境的無性休眠真菌孢子。

2.2.2 菌絲營養(yǎng)體/營養(yǎng)菌絲（vegetative hypha） 單條管狀細(xì)絲，是大多數(shù)真菌的結(jié)構(gòu)單位。

2.2.3 微孢子（microsporidium） 在組織細(xì)胞中發(fā)育并分裂，可反復(fù)無性增殖、具傳染性的卵圓形寄生物，屬于低等真菌，簡稱“微孢子菌”，過去稱為“微孢子蟲”。

2.3 病毒農(nóng)藥（viral pesticide）

由核酸和外殼蛋白組成病毒微粒的非細(xì)胞形態(tài)，以昆蟲為宿主，對宿主產(chǎn)生致病性，具有直接和間接控制有害昆蟲生物活性的微生物農(nóng)藥。

2.3.1 桿狀病毒科（Baculoviridae）

2.3.1.1 核型多角體病毒（nucleo-polyhedrovirus, NPV） 含1至多個（單核衣殼/多核衣殼）呈十二面體、四角體、五角體、六角體等桿狀病毒多角體粒子（直徑在0.5～15 μm），在寄主細(xì)胞核內(nèi)，核酸為分段基因組。是應(yīng)用最廣、登記數(shù)量最多的一類病毒微生物農(nóng)藥產(chǎn)品，常見的有棉鈴蟲核型多角體病毒等。

2.3.1.2 顆粒體病毒（granulovirus, GV） 含一個呈圓或橢圓形顆粒狀體，內(nèi)含核型多角體病毒粒子（粒子小、囊膜中多含單核衣殼），包涵體在細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，核酸為雙鏈 DNA。在農(nóng)藥領(lǐng)域中，其應(yīng)用和登記數(shù)量僅次于核型多角體病毒，常見的有小菜蛾顆粒體病毒等。

2.3.2 呼腸孤病毒科（Rroviridae）

2.3.2.1 質(zhì)型多角體病毒（cytoplasmic polyhedrovirus, CPV） 含多個一般為六角形、四角形等球狀多角體（直徑在0.5～10 μm）病毒粒子，包涵體在宿主細(xì)胞質(zhì)內(nèi)增殖，核酸為分段雙鏈RNA。常見的有松毛蟲質(zhì)型多角體病毒等。

2.3.3 細(xì)小病毒科（Parvoviridae）

2.3.3.1 濃核病毒（densovirus, DV） 一種小型二十面體（直徑在18～30 nm）無包膜單鏈DNA病毒粒子，在宿主細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制，感染早期在核內(nèi)形成致密染色質(zhì)區(qū)。常見的有黑胸大蠊?jié)夂瞬《荆ǜ麜鹤g名：蜚蠊雙義濃核病毒）等。

3 有效成分含量術(shù)語

3.1 毒素蛋白含量（protein toxin content）

蘇云金芽胞桿菌（Bt）產(chǎn)品中伴胞晶體經(jīng)堿解成具有殺蟲活性的毒素蛋白的含量，通常采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）法測定，單位為百分含量（%）。

3.2 含菌量（microbial content）

微生物農(nóng)藥產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中所含形態(tài)為活菌落體（含菌絲或孢子等）的細(xì)菌或真菌有效成分含量，多用平板菌落計數(shù)法測定，單位為CFU/g或mL。

3.2.1 菌落形成單位（colony forming units, CFU） 由單個或多個細(xì)胞（如分生孢子、菌絲等）在培養(yǎng)基上經(jīng)培養(yǎng)形成獨(dú)立可見的菌落，用于推算活體的真菌或細(xì)菌農(nóng)藥有效成分含量。

3.3 含孢量（spore content）

微生物農(nóng)藥產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中所含形態(tài)為活孢子的真菌有效成分含量，多用血球計數(shù)板法測定。含孢量＝孢子實(shí)測數(shù)量×活孢率，單位為孢子/g或mL。

3.3.1 活孢率（percentage of alive spores） 在一定培養(yǎng)條件下，可萌發(fā)（孢子芽管長度大于孢子長度一半的視為萌發(fā)）生長的孢子數(shù)占總孢子數(shù)的百分率（%），即孢子萌發(fā)率。

3.4 包涵體（occlusion body, OB/polyhedral inclusion body, PIB）

病毒感染寄主后，在寄主細(xì)胞中大量復(fù)制增殖，形成具有保護(hù)膜包裹的非結(jié)晶、無活性、高折射率蛋白微粒聚集體。即由病毒粒子、固定病毒粒子的蛋白質(zhì)基質(zhì)和保護(hù)性外膜共同組成包涵體結(jié)構(gòu)。包涵體在堿性環(huán)境下被溶解后釋放出病毒粒子，再度侵染寄主。包涵體是病毒水平傳播的主要載體形式，在光學(xué)顯微鏡下可見粒子形態(tài)。

3.4.1 包涵體數(shù)量（OB content/PIB content） 微生物農(nóng)藥產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中所含形態(tài)為包涵體病毒粒子的數(shù)量。其中，多角體病毒常采用血球計數(shù)板法測定，顆粒體病毒可采用細(xì)菌計數(shù)板法或?qū)崟r熒光定量PCR法測定，單位為（OB或PIB）/g或mL。

通常病毒為顆粒體的用OB，多角體的用PIB或IB，但目前國際上主要用OB表示。

3.5 毒力/生物效價（比）（virulence/biopotency (ratio)）

微生物對靶標(biāo)有害生物的致死或抑制能力，以接種一定劑量該微生物所引發(fā)寄主或宿主病害程度來衡量，通過生物藥效試驗(yàn)測定其效價或生物活性性能。以半致死劑量（LD50）、半致死時間（LT50）、致死百分率或抑制率（%）等表示，活性單位還有國際毒力單位（ITU）、國際單位（IU）等[2,4]。

生物效價比是以微生物農(nóng)藥比較試樣、標(biāo)樣引起的生物反應(yīng)，測定微生物農(nóng)藥的生物效價或生物學(xué)活性的比值。

3.5.1 國際毒力單位/國際單位（international toxic unit, ITU/international unit, IU） 在生物測定中能夠顯示一定毒力的最小單位叫“毒力單位”或“單位”。經(jīng)由國際農(nóng)藥相關(guān)組織（或國際協(xié)商）規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)單位就是國際毒力單位（ITU）或國際單位（IU）。這兩個單位的內(nèi)涵基本相同，建議生物效價采用統(tǒng)一、含義更貼切的ITU表示產(chǎn)品的毒力，避免不必要的混亂。其關(guān)鍵是標(biāo)樣的制備和毒力的確認(rèn)。微生物農(nóng)藥的毒力或生物效價可通過與具有確定國際毒力單位或國際單位的標(biāo)樣進(jìn)行對比性生物測定，其結(jié)果用單位重量或體積的國際毒力單位（或國際單位）數(shù)值表示。

4 雜質(zhì)相關(guān)術(shù)語

4.1 微生物污染物（microbial contaminants）

微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中除有效成分微生物（或其產(chǎn)生的物質(zhì)）外的其他微生物或物質(zhì)。微生物突變體或取代物均被認(rèn)為是污染物或雜質(zhì)。

4.1.1 雜菌量（number of microbial contaminants） 在微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中，除有效成分外其他微生物的數(shù)量之和（或稱雜菌菌落總數(shù)）。

4.1.2 雜菌率（percentage of microbial contaminants） 在微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中，除有效成分外其他微生物（如細(xì)菌和真菌等）量占總菌量的百分率。

4.2 相關(guān)次生化合物/代謝物（relevant secondary compound/metabolite）

從毒理學(xué)角度對人或動物健康、或/和對環(huán)境造成危害的任何次生化合物/代謝物。有些毒素也可看作是相關(guān)次生化合物/代謝物。

4.2.1 次生化合物（secondary compound） 微生物產(chǎn)生的，對其生長、擴(kuò)展或繁殖非必需的化合物。

4.3 化學(xué)雜質(zhì)（chemical impurities）

微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中，除有效成分及來自制造過程必需物質(zhì)外的任何其他化學(xué)物質(zhì)。

4.4 水分/干燥減量（water/loss in weight）

用于表示微生物農(nóng)藥水分含量的方法，通常包括兩種：

（1）水分：水占試樣中質(zhì)量的比率。

（2）干燥減量：在規(guī)定條件下，經(jīng)加熱干燥后減少的質(zhì)量占試樣的比率。一般包括水分及少量低揮發(fā)性物質(zhì)的質(zhì)量。僅適用固體農(nóng)藥。

雖然兩種表示方式的測定方法不同，但內(nèi)涵相近，在微生物農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)中多采用后者，相對簡便。

5 檢測方法術(shù)語

5.1 平板菌落計數(shù)法/菌落形成單位法（plate colony counting method/colony forming unit (CFU) method）

將微生物真菌、細(xì)菌試樣稀釋至適當(dāng)倍數(shù)，均勻涂布或傾注于培養(yǎng)基平板上，在合適溫度培養(yǎng)下，通過肉眼觀察或電子計數(shù)器對可見菌落數(shù)量進(jìn)行間接統(tǒng)計，得到微生物農(nóng)藥產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中活體菌落形成單位數(shù)量的方法，單位為CFU/g或mL。

5.1.1 雜菌量/雜菌率測定方法（number or percentage of microbial contaminants determination） 在微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中雜菌量或雜菌率的測定方法多采用平板菌落計數(shù)法，雜菌量單位為CFU/g或mL，雜菌率單位為百分含量（%）。

5.2 血球計數(shù)板法/直接計數(shù)法（blood counting chamber method/direct counting method）

在光學(xué)顯微鏡下通過血球計數(shù)板，直接觀察計數(shù)形態(tài)較大的真菌或多角體病毒等微生物農(nóng)藥的個體數(shù)量。一般需要配制成至適當(dāng)稀釋倍數(shù)的懸液，計數(shù)后計算產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中的含孢量或包涵體數(shù)量的方法，單位為孢子/g或mL、OB(PIB)/g或mL。

5.2.1 細(xì)菌計數(shù)板法（bateria counting chamber method） 在光學(xué)顯微鏡下通過細(xì)菌計數(shù)板，直接觀察計數(shù)形態(tài)較小的顆粒體病毒等微生物農(nóng)藥的個體數(shù)量。一般需要配制成至適當(dāng)稀釋倍數(shù)的懸液，計數(shù)后計算產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中的包涵體數(shù)量的方法，單位一般為OB/g或mL。

5.3 實(shí)時熒光定量PCR法（real-time fluorescence quantitative PCR method）

根據(jù)已知濃度標(biāo)樣（含有目的基因的質(zhì)?；蚧蚪M）的特定保守區(qū)域設(shè)計引物，進(jìn)行熒光定量PCR，繪制核酸保守片段拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算未知試樣熒光定量PCR獲得的保守片段拷貝數(shù)，推算病毒等微生物農(nóng)藥產(chǎn)品的單位質(zhì)量或體積試樣中包涵體（單位為OB/g或mL）或病毒粒子（單位為病毒粒子/g或mL）數(shù)量的方法，主要用于顆粒體病毒和濃核病毒類農(nóng)藥的檢測。

5.4 毒素蛋白含量測定法（protein toxin content determination）

蘇云金芽胞桿菌（Bt）中伴胞晶體經(jīng)堿解成具有殺蟲活性的毒素蛋白。依據(jù)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量差異，通過凝膠電泳SDS-PAGE使其（130 kDa）與試樣中雜蛋白分離，經(jīng)電泳圖像掃描，定量測定微生物農(nóng)藥Bt產(chǎn)品中毒素蛋白含量的方法，單位為百分比含量（%）。

我國未以此數(shù)據(jù)表示Bt產(chǎn)品的含量。美國在Bt產(chǎn)品標(biāo)簽上以毒素蛋白含量作產(chǎn)品組分含量的數(shù)據(jù)之一，并標(biāo)注生物效價數(shù)據(jù)。

5.5 毒力或生物效價（比）測定方法（virulence/biopotency (ratio) determination）

通過生物藥效測定方法比較試樣和標(biāo)樣的生物反應(yīng)來體現(xiàn)微生物農(nóng)藥生物效價或生物活性能力的方法。單位為單位質(zhì)量的國際毒力單位ITU/mg或國際單位IU/mg。此方法主要用于蘇云金芽胞桿菌類（包括以色列亞種）和球形芽胞桿菌等產(chǎn)品有效成分含量測定及部分病毒有效成分“活性”的補(bǔ)充試驗(yàn)和部分鑒別試驗(yàn)。

綜上所述，血球計數(shù)板法（及細(xì)菌計數(shù)板法）和平板菌落計數(shù)法是目前微生物農(nóng)藥有效成分含量測定的主要方法，實(shí)時熒光定量PCR法由于技術(shù)要求較高，所需設(shè)備和檢測成本較貴，企業(yè)還未能普遍采用，僅適用顆粒體病毒和濃核病毒，但這是具有發(fā)展前景的方法之一。毒素蛋白測定法僅適用蘇云金芽胞桿菌類產(chǎn)品的測定。毒力/生物效價法主要用于蘇云金芽胞桿菌類（包括以色列亞種）及球形芽胞桿菌等產(chǎn)品的測定，雖然品種有一定局限性，但其產(chǎn)量卻是最多的；而病毒產(chǎn)品中生物效價比的測定僅作“活體”的輔助補(bǔ)充（或鑒定試驗(yàn)）。