于 建，李勁松，張景航，蘇 蔚

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科，河南 新鄉(xiāng) 453100

結(jié)直腸癌（CRC）是現(xiàn)階段臨床較為常見惡性腫瘤之一，資料顯示，隨著人們飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣的改變，我國(guó)CRC發(fā)生率逐年升高，并呈現(xiàn)出年輕化的趨勢(shì)［1］。CRC具有發(fā)病隱匿的特點(diǎn)，導(dǎo)致早期診斷、治療仍進(jìn)展有限，隨著腫瘤生物學(xué)的發(fā)展，生物學(xué)標(biāo)志物為CRC的診治開辟了新途徑。新近研究指出，轉(zhuǎn)移抑制因子1（MTSS1）、上皮型鈣黏著蛋白（E-cadherin）均為惡性腫瘤效果因子，二者在結(jié)直腸組織中表達(dá)下調(diào)，可能是CRC發(fā)生的誘因［2-3］?；诖?，本研究嘗試探究MTSS1、E-cadherin在CRC患者組織及癌旁組織中的表達(dá)及臨床意義，旨在為臨床診治本病提供參考，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年6月—2020年6月新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院收治的120例CRC患者作為研究對(duì)象，其中女48例，男72例；年齡48～82歲，平均年齡（66.37±7.81）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI） 18.1～28.7 kg/m2，平均體質(zhì)量（24.35±2.17）kg/m2。兩組患者一般資料具有可比性（P＞0.05）。

1.2 選例標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）》［4］中CRC診斷標(biāo)準(zhǔn)。（2）首次確診。（3）認(rèn)知功能良好，無(wú)溝通交流障礙。（4）無(wú)結(jié)直腸手術(shù)史。（5）患者知曉本研究，已簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他原發(fā)性惡性腫瘤。（2）采集組織標(biāo)本前接受放化療治療。（3）凝血功能障礙患。（4）嚴(yán)重感染性疾病。（5）免疫性疾病。（6）嚴(yán)重心腦血管疾病。

1.3 方法

所有患者均于確診后通過手術(shù)或結(jié)直腸鏡活檢采集癌組織、癌旁正常組織（距癌旁＞5 cm）標(biāo)本，組織標(biāo)本大小約0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm，嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作原則，組織標(biāo)本置入凍存管內(nèi)，并做好標(biāo)記，于30 min內(nèi)放入液氮中保存，由專業(yè)檢測(cè)人員統(tǒng)一檢測(cè)，采用熒光定量PCR法檢測(cè)癌組織、癌旁正常組織MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平，取組織標(biāo)本，采用磷酸緩沖鹽溶液清洗后充分研磨，隨后提取總RNA，并測(cè)定RNA含量，將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行基因擴(kuò)增，采用2-ΔΔCt法計(jì)算MTSS1、E-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）比較癌組織、癌旁正常組織MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平。（2）比較不同臨床資料CRC患者癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平，臨床資料包括性別、年齡、BMI、CRC家族史、飲酒史、腫瘤分化程度、Dukes分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。BMI評(píng)估：低于18.5 kg/m2為過輕，18.5～23.9 kg/m2為正常，24.0～27.9 kg/m2為過重，28.0～32.0 kg/m2為肥胖，高于32 kg/m2為非常肥胖。腫瘤分化程度、Dukes分期、浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均依據(jù)《中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）》［4］中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)判定。（3）分析癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)與CRC臨床特征的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)描述，計(jì)量資料采取Bartlett方差齊性檢驗(yàn)與Kolmogorov-Smirnov正態(tài)性檢驗(yàn)，均確認(rèn)具備方差齊性且服從正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）描述，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩組間比較采用SNK-q檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)系數(shù)模型，均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織、癌旁正常組織MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平情況

CRC患者癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平均較癌旁正常組織低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 癌組織、癌旁正常組織MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平情況（±s）

表1 癌組織、癌旁正常組織MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平情況（±s）

組別癌組織（n=120）癌旁正常組織（n=120）t值P值MTSS1 0.82±0.24 31.56±10.48 32.123＜0.001 E-cadherin 0.38±0.08 0.56±0.12 13.672＜0.001

2.2 不同臨床資料癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平情況

不同性別、年齡、BMI、CRC家族史、飲酒史CRC患者癌組織中MTSS1及E-cadherin蛋白表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同腫瘤分化程度、Dukes分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CRC患者癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同臨床資料癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平情況（±s）

表2 不同臨床資料癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平情況（±s）

臨床資料性別男（n=72）女（n=48）年齡（歲）＜60（n=45）≥60（n=75）BMI過輕（n=26）MTSS1t值或F/P值0.693/0.490 E-cadherin t值或F/P值1.462/0.147 0.81±0.22 0.84±0.25 0.37±0.06 0.39±0.09 0.681/0.498 1.436/0.154 0.83±0.24 0.80±0.23 0.40±0.08 0.38±0.07 0.581/0.629 1.472/0.226 0.80±0.22 0.36±0.07

續(xù)表2

2.3 癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)與CRC臨床特征的相關(guān)性

經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)CRC患者癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)腫瘤分化程度呈正相關(guān)，與Dukes分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)與CRC臨床特征的相關(guān)性

3 討論

CRC是一種惡性程度高、預(yù)后較差的惡性腫瘤，約50%的患者確診時(shí)已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移，超過30%的患者在術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)，因此積極探索CRC的發(fā)病機(jī)制及早期診斷靶標(biāo)，一直是臨床研究的重點(diǎn)問題［5］。

MTSS1是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的抑癌因子，本研究發(fā)現(xiàn)，CRC患者癌組織中MTSS1蛋白表達(dá)水平明顯低于癌旁正常組織，提示MTSS1可能與CRC發(fā)生有關(guān)。MTSS1也被稱作腫瘤抑制基因，其通過與肌動(dòng)蛋白結(jié)合，發(fā)揮調(diào)控肌動(dòng)蛋白纖維組裝及細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)的作用，且能調(diào)節(jié)細(xì)胞及細(xì)胞間基質(zhì)的相互作用，在腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性調(diào)節(jié)中發(fā)揮抑制作用。相關(guān)研究［6］也證實(shí)MTSS1的表達(dá)可以抑制甲狀腺癌細(xì)胞增殖，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而控制腫瘤進(jìn)展，延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。本研究還發(fā)現(xiàn)CRC患者癌組織中E-cadherin蛋白表達(dá)水平明顯降低，也可能參與CRC的發(fā)生過程。E-cadherin是一種鈣依賴性的跨膜蛋白，在維持上皮細(xì)胞之間黏附作用、維持細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)作用方面具有重要作用，其在正常細(xì)胞組織中應(yīng)保持高表達(dá)水平，從而保持細(xì)胞之間的聚集功能［7］。文獻(xiàn)報(bào)道［8］指出，細(xì)胞組織中E-cadherin的表達(dá)水平降低可導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)合體解散，增強(qiáng)細(xì)胞的擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移能力，是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的關(guān)鍵。由此可見，MTSS1、E-cadherin在CRC發(fā)生過程中可能發(fā)揮抑癌作用。

本研究通過對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)不同腫瘤分化程度、Dukes分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CRC癌組織中MTSS1和E-cadherin蛋白表達(dá)水平存在明顯差異，進(jìn)一步通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)二者表達(dá)水平與腫瘤分化程度呈正相關(guān)，與Dukes分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，提示癌組織中MTSS1、E-cadherin表達(dá)缺失可能是導(dǎo)致CRC腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的因素。本研究認(rèn)為，MTSS1、E-cadherin在CRC中作為腫瘤抑制型基因，其表達(dá)水平越低，對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移的抑制作用越低，腫瘤惡性生物學(xué)行為越活躍，因此通過相關(guān)措施上調(diào)MTSS1、E-cad-herin蛋白的表達(dá)，或許能發(fā)揮抑制腫瘤進(jìn)展的作用，具有較大待開發(fā)潛力。

綜上可知，CRC患者癌組織中MTSS1、E-cadherin蛋白表達(dá)水平明顯降低，其表達(dá)水平與CRC腫瘤分化程度、Dukes分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，早期檢測(cè)MTSS1、E-cadherin表達(dá)水平可能有助于臨床評(píng)估CRC患者病情，具有較高臨床應(yīng)用價(jià)值。