李志廣

摘要：喹諾酮類抗生素是一種經(jīng)過人工合成的抗菌藥物，除了作為醫(yī)療藥物使用以外，它還主要被當作畜牧業(yè)飼料的添加成分，目的是提高飼料的有效利用率以及畜牧養(yǎng)殖動物的抗病害能力。以往傳統(tǒng)的免疫法測定喹諾酮類抗生素的水質(zhì)檢測技術(shù)不僅測定周期長，且極容易因不確定的外部環(huán)境因素影響測定結(jié)果的準確性。基于此，對一種基于固相萃取檢測的液相色譜三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用測定法，在水中喹諾酮類抗生素測定試驗上的應用進行理論講解。希望通過此文可以為水質(zhì)檢測部門，在畜牧業(yè)污水質(zhì)量測定上提供一定的理論幫助。

關(guān)鍵詞：喹諾酮類抗生素;固相萃取;三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用

1.????????????? 試驗前期準備

1.1試驗儀器

考慮到畜牧業(yè)污水的化合基質(zhì)成分比較復雜，為了可以獲得遠高于單四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀的信噪比，儀器選用型號為Agilent 7000B GC/MS Triple Quad的液相色譜三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，這種儀器可以在背景樣品中對水中喹諾酮類抗生素的目標化合物進行選擇性定量，質(zhì)量穩(wěn)定性水平在±0.1m/z以內(nèi)，信噪比大于180：1，檢測限的精度等級上基本達到了飛克標準，配套色譜柱規(guī)格為21mm*50mm，φ1.7μm。

除了儀器之外，試驗中還準備了SPE固相萃取儀，電源電壓220V，頻率50Hz，儀器配備通道數(shù)量5條，單條通道流速≤16.10ml/min，樣品泵管轉(zhuǎn)速100rpm，萃取準確度為2.5%，儀器運行檔位有三個，分別為流量檔位、液量分配檔位和時間節(jié)點檔位，儀器輸入閥值為100psi，輸出閥值為30psi。

NAI-DCY-12ZG自動型干式氮吹儀，配備12孔圓形水浴，借助儀器配套自帶的Product description軟件，可以將氮吹儀運行示數(shù)在前端操作面板上以可視化的數(shù)字顯示形式呈現(xiàn)。

1.2材料準備

水中喹諾酮類抗生素測定試驗中主要使用如下幾類化學藥劑：工業(yè)優(yōu)級純度氫氧化鈉固體;工業(yè)優(yōu)級純度稀硫酸溶液;色譜純度乙腈;NOR、OFL、ENR標準物質(zhì);蒸餾提純過的去離子水。

2.????????????? 儀器分析條件

在進行實際測定之前，首先應當利用甲醇溶液對測試樣本進行定性處理，將甲酸溶液與甲醇溶液分別梯度洗脫至80%與15%，洗脫時間設置為5min后，采用正乙烷作為無水有機溶液將兩份樣本進行定容。而后在將兩組不同洗脫度的溶液裝進3個樣本泵管中進行實際測試，收集儀器的采集信號，直至三組泵管樣本定量的平行性符合儀器測定標準。

3.????????????? 固相萃取樣品制配

將待測定的水質(zhì)樣本裝入固相萃取樣本柱管內(nèi)，首先加入6ml乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）溶液，它是固相萃取中用于配位滴定的配合物。而后再向樣本柱管內(nèi)通入6ml二氯甲烷進行活化，靜置5min后加入6ml甲醇溶液標定。而后調(diào)整固相萃取樣本的pH值，使送樣可以通過固相萃取儀的富集柱管。在固相萃取儀中完成富集過程后，將柱管安置于氮吹儀的水浴孔上進行至少20min的氮吹，而后用10ml的洗脫液將水質(zhì)樣本的待檢測物轉(zhuǎn)移至洗脫液內(nèi)，收集洗脫液并氮吹至全干，最后用初始流動相將固相萃取樣本進行定容制樣。在固相萃取樣本的制配工序中，最后過孔徑為0.2μm的膜時送樣中不能含有無機酸、鹽與水分。

4.????????????? 測定方法的檢出限

首先在對實際送檢水樣進行喹諾酮類抗生素測定前，應當先以喹諾酮類抗生素為檢出相，制配喹諾酮類抗生素的標準溶液。將試驗前準備濃度為100mg/L的喹諾酮類抗生素標準儲備液，加入制配比例為15：89的甲醇-甲酸比例溶液，，標準溶液中喹諾酮類抗生素含量為100μg/L。而后將上述溶液分別在萃取儀與聯(lián)用儀上實際測試，得到分析結(jié)果，固相萃取樣本導柱中的離子反應面積越大

，則說明送檢樣本的配喹諾酮類抗生素含量越高，而通過計算在色譜樣本中的標準物質(zhì)離子反應程度，就可以直接推算出這種四級桿質(zhì)譜聯(lián)用法的檢出限。

5.????????????? 測定試驗結(jié)果

得出三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用法的最低檢出限后，首先向裝有去離子水的空白樣本加入10μg標準溶液，而后再向裝有待測水樣的柱管內(nèi)加入100μg標準溶液，采用外標一點法對樣本進行加標回收測定。這種方法思路是利用空白樣本中加入喹諾酮類抗生素標準物質(zhì)的對照品溶液濃度，對比測定出待檢水樣中的標準物質(zhì)含量，在Agilent 7000B GC/MS Triple Quad液相色譜三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀上進行不少于5次的多次進樣，通過可視化屏幕得出對照品溶液與待測樣本溶液的峰面積，進而推算出待測水樣中標準物質(zhì)的含量濃度。被測水樣的濃度計算公式為如下：

其中Wi表示為被測水樣中含有喹諾酮類抗生素標準物質(zhì)的濃度含量;Ai表示為對照樣本中含有標準物質(zhì)的濃度含量;（Wi）s與（Ai）a分別表示為在樣本柱管中相同進量體積的被測樣本與對照樣本中含有純品喹諾酮類抗生素標準物質(zhì)的組分重量，用樣本峰面積來表達。為了降低外標定量法的誤差影響，試驗中選擇將5組聯(lián)用儀的進樣示數(shù)，去除最高值與最低值后，進行平均值計算。得出被測水樣如下加標回收實驗結(jié)果：

原被測水樣中NOR物質(zhì)的測定值為7.4μg/L，樣本加標質(zhì)量為10μg，平均回收率為92.8%，相對標準偏差（RSD）為8.7%;OFL物質(zhì)測定值為1.5μg/L，樣本加標質(zhì)量為100μg，平均回收率為93.1%，RSD偏差為8.1%;ENR物質(zhì)測定值為1.6μg/L，樣本加標質(zhì)量為10μg，平均回收率為87.5%，RSD偏差為9.9%。

結(jié)語：綜上所述，采用超高效液相色譜三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用法，進行NOR、OFL與ENR三類喹諾酮類抗生素標準物質(zhì)含量測定，可以在6min以內(nèi)得出被檢樣本中喹諾酮類抗生素物質(zhì)的含量分析數(shù)據(jù)，可以基本保證檢出限在0.3-0.7μg/L精度范圍之間，在測定試驗中發(fā)現(xiàn)三種被測物質(zhì)的加標回收率均在87.5%以上，相對標準偏差不高于10%，測定精度符合飛克檢測限水平要求。借助聯(lián)用儀來進行色譜-質(zhì)譜固相萃取比對的方法，不僅不需要傳統(tǒng)免疫法那樣較長的樣本分析時長，而且在測定精度上具有一定保障，且具有操作簡便、綠色環(huán)保的方案優(yōu)勢，因此可以被環(huán)保行業(yè)和相關(guān)水質(zhì)監(jiān)管部門廣泛應用于畜牧業(yè)含喹諾酮類抗生素的水質(zhì)檢測項目上。

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