覃華開(kāi)，莫 岳，何偉儀，韋 忠

（柳州市公安局物證鑒定所，廣西 柳州545100）

氟乙酸（鹽）屬于劇毒物質(zhì)，對(duì)人畜毒害極大而且容易引起二次中毒。我國(guó)早已禁止生產(chǎn)和使用，但由于其生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、殺鼠效果好，國(guó)內(nèi)仍有許多地下工廠非法生產(chǎn)，包裝成殺鼠劑在全國(guó)范圍內(nèi)廣泛銷售。用氟乙酸鈉對(duì)人、畜、禽投毒和誤服中毒的案件在新聞媒體上也時(shí)有報(bào)道[1]。氟乙酸（鹽）屬于小分子、大極性的物質(zhì)，易溶于水，采用常規(guī)的分析手段難以進(jìn)行檢測(cè)。所以往往需要使用更靈敏的高端儀器進(jìn)行檢測(cè)[2-4]，或進(jìn)行衍生化反應(yīng)改變其極性，進(jìn)而利用現(xiàn)有的儀器進(jìn)行檢驗(yàn)分析。對(duì)氟乙酸的衍生方法主要有五氟芐溴衍生化法、酰胺衍生化法、α-溴苯乙酮酯衍生化法、甲醇酯化衍生化法等[5-9]，這些衍生化方法多是從檢材中提取出氟乙酸，要求在無(wú)水的條件下進(jìn)行衍生化反應(yīng)，還要經(jīng)過(guò)一系列復(fù)雜的純化處理，對(duì)基層一線檢驗(yàn)有很大難度。

Miki等[10]開(kāi)發(fā)了三相系統(tǒng)衍生萃取法同步測(cè)定氟乙酸和苯氧基酸類除草劑，該三相體系由水樣、萃取溶劑甲苯（含五氟芐基溴〔PFB-Br〕）、與聚合物結(jié)合的三丁基甲基溴化銨為相轉(zhuǎn)移催化劑組成，所需試劑比較多，樣品前處理也相對(duì)復(fù)雜。封世珍等[11]在水相中添加衍生化試劑（N,N-二乙基對(duì)苯二胺硫酸鹽，英文名N, N- dimethyl-p-phenyylendimine，簡(jiǎn)稱DEPA）和催化劑（N,N-二環(huán)己烷碳酰亞胺，英文名dicyelohexylcar bodimide，簡(jiǎn)稱DDC），將氟乙酸鈉直接在水相中進(jìn)行衍生并用有機(jī)溶劑提取濃縮，選擇氣相色譜-氮磷檢測(cè)器（GC-NPD)、薄層色譜（TLC）及氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）法進(jìn)行分析，該方法簡(jiǎn)化了衍生提取過(guò)程，雖操作簡(jiǎn)便，但氟乙酸鈉 DEPA的水相衍生物只有很小一部分被有機(jī)相提取，而絕大部分的衍生物還在水相中，提取率低，造成方法靈敏度不高。葉樹(shù)海等[12]通過(guò)液相色譜高分辨質(zhì)譜系統(tǒng)（TripleTOF）建立氟乙酸鈉衍生物液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢驗(yàn)方法，采用DEPA和DDC對(duì)氟乙酸鈉進(jìn)行衍生，并分別對(duì)水相衍生體系和有機(jī)相衍生體系中的衍生產(chǎn)物進(jìn)行了測(cè)定，證實(shí)了后者的衍生物提取率低。本文則采用了最常見(jiàn)的衍生化試劑PFB-Br及酸性的四丁基硫酸氫銨（IPC-TBA-HS）為相轉(zhuǎn)移催化劑對(duì)氟乙酸鈉進(jìn)行衍生并同步有機(jī)相提取，不僅操作簡(jiǎn)便，也獲得了較高靈敏度。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890B/5977A型GC-MS儀（美國(guó)Agilent公司），色譜柱：HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 mm）及MassHunter化學(xué)工作站；EYELA CM-1000振蕩器（上海愛(ài)朗儀器有限公司）。

氟乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品水液（1.0 mg/mL，北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司）；敵敵畏、樂(lè)果、對(duì)硫磷、毒鼠強(qiáng)、葉蟬散、莠去津、克百威、甲基對(duì)硫磷、水胺硫磷、特丁硫磷的丙酮液（均為1.0 mg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所生產(chǎn)）；乙酸乙酯（分析純，廣東光華科技有限公司）；五氟芐基溴（純度99%，Sigma公司）；四丁基硫酸氫銨（純度 99%，河北百靈威超精細(xì)材料有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液配制

分別稱取相同質(zhì)量的四丁基硫酸氫銨和純水混合溶解，配制50%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）四丁基硫酸氫銨水溶液；準(zhǔn)確稱取0.13 g PFB-Br，用5 mL乙酸乙酯溶解，轉(zhuǎn)至50 mL容量瓶，稀釋至刻度，配制10 mmol/L PFB-Br乙酸乙酯溶液；精密吸取各標(biāo)準(zhǔn)品適量，以水配成各標(biāo)準(zhǔn)品濃度均為10 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 樣品處理方法

取2 g檢材（食材或嘔吐物）于具塞試管中，加入5 mL純水，振蕩（或超聲）提取5 min，離心（8 000 r/min，10 min），取上層清液備用。取1 mL檢材（樣本）提取液依次加入0.1 mL 50%四丁基硫酸氫銨水溶液和1 mL 10 mmol/L PFB-Br乙酸乙酯溶液，在振蕩器上振蕩5 min，靜置分層（或離心分層），取上清液供GC-MS分析。

1.2.3 儀器條件

1）GC色譜條件。色譜柱：HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 mm）；升溫程序：進(jìn)樣口溫度250 ℃；柱溫80 ℃保持1 min，以15℃/min升至280 ℃保持5 min；載氣：高純He，流量：恒流1 mL/min；分流進(jìn)樣，分流比10∶1。

2）質(zhì)譜條件。離子源：EI，電子能量69.9 eV，傳輸線溫度280 ℃；離子源溫度：230 ℃；電子倍增器電壓為調(diào)諧電壓；溶劑切割時(shí)間：4.2 min；掃描方式：SCAN，質(zhì)量掃描范圍45～450 amu；SIM：m/z181為定量離子，m/z258、61為定性參考離子。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性關(guān)系考察

精密稱取氟乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品配制成待測(cè)樣品濃度分別為 0.1、0.2、0.5、1、2、5、10 μg/mL的溶液（以純水為空白樣），按照步驟1.2.2方法進(jìn)行操作，分別進(jìn)行GC-MS測(cè)定。以PFB-MFA的峰面積（y）為縱坐標(biāo)，以氟乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液濃度（x,μg/mL）為橫坐標(biāo)作線性回歸。在濃度0.1～10 μg/mL的范圍內(nèi)呈線性，線性方程為：y=19.94x+1 626.44；R2=0.999 7，相關(guān)性好。按信噪比（S/N）=3計(jì)算，樣品中氟乙酸鈉檢出限可達(dá)50 ng/mL。

2.2 方法專屬性

取空白食材2 g，添加混合毒藥標(biāo)準(zhǔn)品各10 μg。按照1.2.2方法進(jìn)行樣品處理，進(jìn)行GC/MS分析，得到混合毒藥的總離子流圖和氟乙酸根離子衍生物（PFB-MFA）提取離子流圖（見(jiàn)圖1）。結(jié)果表明該方法可將十幾種毒藥較好地進(jìn)行分離，藥物之間不影響測(cè)定?？瞻资称窡o(wú)干擾。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)考察

取空白米飯、面粉和熟肉各10 g，分別用10 mL純水浸泡，超聲5 min，離心（8 000 r/min，10 min）提取分離上層清液。以下按1.2.2的實(shí)驗(yàn)操作步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并考察各基質(zhì)樣品中高、中、低三個(gè)濃度水平的回收率情況。各重復(fù)5次；回收率均在80%以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%，無(wú)明顯基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各樣品中氟乙酸鈉的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）Table 1 Recoveries and RSDs of sodium fluoroacetate in the sample (n=5)

2.4 討論

在相轉(zhuǎn)移催化劑（IPC-TBA-HS）的作用下，氟乙酸鈉與五氟芐基溴（PFB-Br）有機(jī)溶液可在有水存在的情況下同步進(jìn)行衍生及其衍生產(chǎn)物的提取，進(jìn)行衍生化時(shí)，對(duì)水液的pH值有一定要求，應(yīng)在酸性條件下進(jìn)行。由于IPC-TBA-HS試劑本身具有酸性，所以對(duì)中性樣品可不用調(diào)節(jié)pH值，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用pH試紙對(duì)檢材溶液進(jìn)行測(cè)試以確定其pH值。

在1 mL水樣中，氟乙酸鈉濃度在0.1～10 μg/mL范圍內(nèi)，衍生化試劑五氟芐基溴的濃度增加對(duì)衍生產(chǎn)物的影響并不明顯，衍生化試劑以低濃度低用量即可滿足檢驗(yàn)要求。實(shí)驗(yàn)對(duì)10 μg/mL的氟乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液使用濃度為10、50 mmol/L 的衍生化試劑分別進(jìn)行衍生，對(duì)衍生產(chǎn)物（PFB-MFA）的峰面積進(jìn)行了比較，兩者沒(méi)有區(qū)別。

3 案例應(yīng)用

應(yīng)用本方法對(duì)我市某小區(qū)內(nèi)的寵物狗連續(xù)死亡案件現(xiàn)場(chǎng)地面上發(fā)現(xiàn)的燒鴨塊和中毒狗的嘔吐物進(jìn)行了檢驗(yàn)，檢材按本方法進(jìn)行處理后，使用GC-MS儀器快速檢驗(yàn)出了氟乙酸類毒物成分（見(jiàn)圖2）。

4 結(jié)論

本文開(kāi)發(fā)的中毒案件食物檢材及嘔吐物中的氟乙酸（鹽）GC-MS快速檢驗(yàn)方法，具有良好線性范圍，方法操作簡(jiǎn)便，分離效果好，選擇性強(qiáng)，靈敏度也高，適合中毒案件中體外檢材的氟乙酸（鹽）的快速定性定量檢驗(yàn)，可滿足日常辦案要求。