李春平 趙加鼎 葉吉榮 任文輝 趙家才*

1.云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，昆明 650212；2.云南省保山市保山豬研究所，云南施甸 678200；3.云南省富源縣大河豬研究所，云南富源 655500；4.云南省楚雄州種豬種雞場(chǎng)，云南楚雄 675000

云南屬亞熱帶和熱帶高原季風(fēng)氣候類型，以亞熱帶氣候分布較廣，由于受地理位置和地貌的影響，不同于全國各地，特點(diǎn)是光、熱、水、氣豐富，氣候垂直變化顯著。云南動(dòng)物種類十分豐富，地方豬種是當(dāng)?shù)厝藗冮L(zhǎng)期勞動(dòng)的產(chǎn)物，遺傳資源多樣，是云南發(fā)展畜牧業(yè)的寶貴資源，也是云南畜牧業(yè)的重要組成部分。滇南小耳豬、撒壩豬、大河豬和保山豬，2011年均被評(píng)為“云南六大名豬”，近年來受諸多因素的影響，地方豬種飼養(yǎng)數(shù)量在急劇下降，地方豬種已處于瀕危狀態(tài)。2019年開始，全國畜牧總站進(jìn)行撒壩豬、大河豬、保山豬遺傳物質(zhì)制作保存，推動(dòng)促進(jìn)豬精液冷凍保存技術(shù)不斷進(jìn)步和完善。2019-2021年，筆者先后對(duì)云南省內(nèi)的主要豬種進(jìn)行精液冷凍制作保存，結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 種公豬及其精液的來源和要求

供試驗(yàn)的撒壩豬精液來源于楚雄州種豬種雞場(chǎng)、大河豬精液來源于富源縣大河豬研究所種豬場(chǎng)、保山豬精液來源于保山市保山豬研究所、滇南小耳豬精液來源于中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所西南家豬分子育種基地。種公豬的質(zhì)量符合《中華人民共和國畜牧法》和《中華人民共和國動(dòng)物防疫法》的要求，依法建立保種場(chǎng)，規(guī)范飼養(yǎng)和防疫。非洲豬瘟病原學(xué)及其病毒抗體檢測(cè)陰性，口蹄疫免疫抗體合格率83%以上且病原學(xué)檢測(cè)陰性，豬瘟病原學(xué)檢測(cè)陰性，豬偽狂犬病病毒gE 抗體檢測(cè)陰性，豬繁殖與呼吸綜合征病原學(xué)及其病毒抗體檢測(cè)陰性。

1.2 種公豬的飼養(yǎng)方式

種公豬飼養(yǎng)方式為舍飼，舍內(nèi)保持干燥，通風(fēng)良好，運(yùn)動(dòng)充足，按營養(yǎng)需要供給日糧，采精頻繁時(shí)加喂雞蛋，供給清潔飲水，使種公豬始終保持良好的生理狀態(tài)和種用體況。

1.3 生物安全措施

種公豬必須進(jìn)行嚴(yán)格的免疫和檢疫，養(yǎng)殖區(qū)建立完善的消毒通道，種公豬進(jìn)站時(shí)要徹底淋浴消毒，需要進(jìn)養(yǎng)殖區(qū)的人員、車輛、物品等要消毒后才能進(jìn)入，每年按照免疫程序接種疫苗，養(yǎng)殖區(qū)定期消毒，嚴(yán)格門衛(wèi)制度，疫區(qū)人員、車輛、物品嚴(yán)禁進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)域，來自非疫區(qū)進(jìn)場(chǎng)人員車輛嚴(yán)格消毒和登記，防止疫情傳入和流行。

1.4 種公豬的采精方法

種公豬用人工徒手法采精[1]，采精時(shí)用發(fā)情母豬做臺(tái)畜，誘導(dǎo)公豬性興奮、勃起爬跨，擇機(jī)人工徒手采精。

1.5 種公豬的精液品質(zhì)檢查

種公豬采精后，采集的種公豬精液要避光、保溫、防塵、防輻射。種公豬精液品質(zhì)檢驗(yàn)：參照中華人民共和國《牛冷凍精液國家標(biāo)準(zhǔn)GB4143—2008》檢驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，分別測(cè)定其采精量、精子密度、原精活力，原精活力60%以上的種公豬原精用精液營養(yǎng)稀釋液按1∶1 的比例稀釋保存或用于制作冷凍精液。異地制作冷凍精液，稀釋后的種公豬精液需要避光保存于12～17 ℃下快遞運(yùn)輸投送，符合冷凍制作的精液，先計(jì)算精液中的總精子數(shù)（采精量乘以精子密度），再確定冷凍稀釋液的需要量。

1.6 種公豬冷凍精液的制作流程

1）種公豬精液的離心處理。經(jīng)檢驗(yàn)，鮮精活力達(dá)60%以上，且無其他異常的鮮精分裝于40～50 mL離心管中，然后把離心管和豬精液置于離心機(jī)內(nèi)，使離心管保持平衡（離心機(jī)溫度控制在17 ℃），以3 000 r/min 離心10 min，離心后取出離心管，棄去精液上清液[2]，收集離心管底部濃稠的精液進(jìn)行稀釋。

2）離心后種公豬精液的稀釋、平衡與分裝標(biāo)記。收集經(jīng)離心獲得的濃稠精液用冷凍稀釋液稀釋，加入冷凍稀釋液后使每毫升精液精子總數(shù)為6.0 億個(gè)；先加入豬精液冷凍稀釋液Ⅰ液（冷凍稀釋液Ⅰ液不含甘油），在4 ℃的冰箱內(nèi)平衡2～3 h 以上，平衡后的豬精液分裝前加入豬精液冷凍稀釋液Ⅱ液（冷凍稀釋液Ⅱ液含甘油和活性劑），Ⅱ液加入后混勻立即于4 ℃的低溫操作柜中分裝、標(biāo)記和封口，Ⅰ液和Ⅱ液的添加量各為稀釋液總量的一半。

3）種公豬精液的冷凍、解凍、包裝和冷凍精液質(zhì)量檢查。分裝標(biāo)記后的豬細(xì)管精液在溫度4～5 ℃的低溫操作柜中整齊地碼放在冷凍架上，再把冷凍架和豬細(xì)管精液放入裝有液氮的大口罐中，豬細(xì)管精液離液氮面3～5 cm，熏蒸冷凍13 min 后取出，冷凍后的豬細(xì)管精液放入液氮中，也可用程控儀冷凍，然后隨機(jī)抽樣解凍，冷凍精液解凍溫度38 ℃，37 ℃下檢查解凍后精子活力，解凍活力30%以上的豬冷凍精液裝入拇指管，每管25 支，每8 支拇指管用1 個(gè)紗布袋包裝，入庫保存。

1.7 數(shù)據(jù)來源與處理

數(shù)據(jù)來源于豬采精檢測(cè)記錄，用生物統(tǒng)計(jì)法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和顯著性檢驗(yàn)[3]。

2 結(jié)果與分析

保山豬精液質(zhì)量?jī)?yōu)于滇南小耳豬、大河豬和撒壩豬，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，不同豬種間采精量、原精活力、精子密度、冷凍精液解凍活力差異均不顯著（ ＞0.05）。

2.1 不同豬種精液品質(zhì)

由表1可知，大河豬精液精子密度高于滇南小耳豬、撒壩豬、保山豬；保山豬采精量、原精活力、解凍活力均高于滇南小耳豬、大河豬和撒壩豬，但差異不顯著（ ＞0.05）。

表1 不同種豬精液品質(zhì)比較

2.2 不同豬種精液可利用率

種公豬繁殖能力的高低是衡量公豬種用價(jià)值的指標(biāo)，繁殖力是決定養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的主要因素之一，精液質(zhì)量直接影響繁殖率。由表2可知，不同豬種精液可利用率差異不顯著。云南地方豬種采精量和精子密度低于培育豬種，人工采精比較困難，在保種、選育和雜交利用中必須重視。

表2 不同豬種精液活力比較

2.3 不同離體運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)公豬精液活力

由表3可知，公豬采精后，精液用營養(yǎng)液作1∶1稀釋，降溫保存于12～17 ℃運(yùn)送，只要保存精液條件適宜，在40 h 內(nèi)精液品質(zhì)下降不明顯，可用于制作冷凍精液，營養(yǎng)稀釋液和保存溫度是保證長(zhǎng)途運(yùn)輸精液質(zhì)量的決定因素。

表3 不同離體運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)公豬精液活力比較

3 討 論

1）加強(qiáng)種公豬精液品質(zhì)檢查是評(píng)價(jià)和選擇種公豬繁殖力的有效措施。家畜中豬的繁殖率高，出欄率顯著高于牛和羊，生產(chǎn)周期短，效益較高，單位肉的平均成本較低，為我國食品的主要來源。種公豬個(gè)體間精液品質(zhì)差異顯著，注重種公豬精液品質(zhì)檢測(cè)，加強(qiáng)選種選育，及時(shí)淘汰繁殖性能差的個(gè)體，提高豬的繁殖率，減少損失。

2）豬精液冷凍保存和遺傳資源保護(hù)有利于種業(yè)振興。從本研究結(jié)果得出，豬精液冷凍保存凍精解凍活力良好，精子復(fù)蘇率較高，精子頂體完整率較高。推廣豬精液冷凍保存技術(shù)，制作保存豬冷凍精液，可以提高優(yōu)良種公豬的利用率，為地方品種保護(hù)提供有效措施，有利于良種工程提升，克服制約地方豬種質(zhì)資源保護(hù)和推廣應(yīng)用瓶頸。