張亞偉, 邢 宇, 劉麗恒, 王 欣

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院/北京婦幼保健院 產(chǎn)科, 北京, 100026)

子癇前期是妊娠期特有的一種產(chǎn)科疾病，指平素血壓正常的婦女妊娠20周以后出現(xiàn)血壓突然升高、尿蛋白、水腫，伴有頭痛、惡心、眼花、腹部不適等臨床表現(xiàn)，該病可損害患者腎臟、肝臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及血液系統(tǒng)等多器官，嚴(yán)重者可出現(xiàn)抽搐、昏迷甚至死亡，對(duì)母嬰健康有很大危害。臨床上將子癇前期根據(jù)發(fā)生時(shí)間分為早發(fā)型和晚發(fā)型子癇前期，根據(jù)臨床癥狀表現(xiàn)程度分為輕度和重度子癇前期，早發(fā)型患者多為重度子癇前期患者[1]。不對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)是一種內(nèi)源性一氧化氮合酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，能夠抑制一氧化氮的合成，使一氧化氮/一氧化氮合酶通路發(fā)生障礙，一氧化氮合成減少，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙[2]。磷脂結(jié)合蛋白膜聯(lián)蛋白V(AnnexinⅤ)通過(guò)細(xì)胞外翻的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合形成二聚體，參與抗凝、抗炎、抗免疫和促使細(xì)胞凋亡等[3]。生存蛋白(Survivin)是一種凋亡抑制蛋白家族的新成員，常表達(dá)于腫瘤和胚胎組織中，與腫瘤細(xì)胞的分化增殖及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[4]。本研究觀察ADMA、AnnexinⅤ、Survivin在子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織中的水平，進(jìn)而定量分析其對(duì)子癇前期的影響和作用，為該病的臨床診治提供新參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月—2019年2月產(chǎn)科住院的子癇前期患者60例為子癇前期組，平均年齡(31.3±1.3)歲，平均孕周(36.3±2.4)周，早發(fā)型24例、晚發(fā)型36例，輕度34例、重度26例。另外選取同期于產(chǎn)科住院的健康產(chǎn)婦60例為健康產(chǎn)婦組，平均年齡(30.9±1.3)歲，平均孕周(36.7±2.6)周。2組平均年齡、平均孕周等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。所有產(chǎn)婦及家屬均對(duì)本研究知情，并簽署知情通知書(shū)，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn): 子癇前期患者符合《妊娠期高血壓疾病診治指南(2020)》[5]中對(duì)子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)及分類標(biāo)準(zhǔn)，其中子癇前期發(fā)生時(shí)間早于34孕周為早發(fā)型，發(fā)生時(shí)間≥34孕周為晚發(fā)型；患者收縮壓、舒張壓≥140、90 mmHg, 尿蛋白≥0.3 g/24 h或隨機(jī)尿蛋白(+)診斷為輕度子癇前期; 患者收縮壓、舒張壓≥160、110 mmHg, 尿蛋白≥2.0 g/24 h或隨機(jī)尿蛋白≥()或有其他臟器損害指標(biāo)異常診斷為重度子癇前期; 所有孕婦均為單胎妊娠，分娩方式為剖宮產(chǎn)。

排除標(biāo)準(zhǔn): 有其他妊娠合并癥及并發(fā)癥者; 慢性高血壓產(chǎn)婦; 心臟病產(chǎn)婦; 嗜好煙酒產(chǎn)婦; 糖尿病產(chǎn)婦; 肝、腎功能不全產(chǎn)婦; 存在精神、語(yǔ)言障礙的產(chǎn)婦。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集: 抽取所有產(chǎn)婦清晨空腹靜脈血5 mL, 以離心半徑為10 cm、3 000轉(zhuǎn)/min離心處理15 min, 分離上層血清, -80 ℃保存待用; 胎盤(pán)組織于剖宮產(chǎn)術(shù)胎盤(pán)分娩出后5 min之內(nèi)采集，在胎盤(pán)母體面近臍帶處避開(kāi)鈣化、梗死及血管密集區(qū)域，取1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm大小的胎盤(pán)組織，經(jīng)生理鹽水沖洗滅菌后用紗布吸干，之后在低溫環(huán)境下置于有柄研磨器中均勻研磨，轉(zhuǎn)移至2.5 mL離心管中。在4 ℃低速冷凍離心機(jī)以3 000轉(zhuǎn)/min離心處理20 min, 收集上清液, -70 ℃保存待用。

1.2.2 血清及胎盤(pán)組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平檢測(cè): 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定血清及胎盤(pán)組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平。將含有ADMA、AnnexinⅤ、Survivin的血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗滌1次; 與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，然后將多余抗體洗除，加入底物四甲基聯(lián)苯胺顯色; 四甲基聯(lián)苯胺在辣根過(guò)氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺與血清及胎盤(pán)組織中的ADMA、AnnexinⅤ、Survivin水平呈正相關(guān)。450 nm波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清及胎盤(pán)組織中ADMA、AnnexinⅤ、Survivin濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述, 2組比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2組產(chǎn)婦血清及胎盤(pán)組織中的ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平比較

子癇前期組產(chǎn)婦血清及胎盤(pán)組織中的ADMA表達(dá)水平高于健康產(chǎn)婦組，AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平低于健康產(chǎn)婦組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表1。

表1 2組產(chǎn)婦血清及胎盤(pán)組織中的ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平比較

2.2 早發(fā)型與晚發(fā)型子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平比較

早發(fā)型子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織ADMA表達(dá)水平高于晚發(fā)型子癇前期患者, AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平低于晚發(fā)型子癇前期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表2。

表2 早發(fā)型與晚發(fā)型子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平比較

2.3 輕度與重度子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平比較

輕度子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織ADMA表達(dá)水平低于重度子癇前期患者，AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平高于重度子癇前期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表3。

表3 輕度與重度子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達(dá)水平比較

2.4 ADMA、AnnexinⅤ、Survivin之間相關(guān)性分析

ADMA、AnnexinⅤ、Survivin之間進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析, ADMA與AnnexinⅤ、Survivin呈負(fù)相關(guān)(r=-0.481、-0.683,P=0.001、0.001), AnnexinⅤ與Survivin呈正相關(guān)(r=0.495,P=0.001), 見(jiàn)圖1。

3 討 論

子癇前期是妊娠期的一種嚴(yán)重并發(fā)癥，是導(dǎo)致妊娠期婦女與圍產(chǎn)兒發(fā)病和死亡的重要原因之一，且近年來(lái)發(fā)病率有明顯上升趨勢(shì)[6]。子癇前期可在不同程度上影響母嬰健康及妊娠結(jié)局。產(chǎn)科及圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域一直將子癇前期的病因和發(fā)病機(jī)制作為熱點(diǎn)研究[7-8], 結(jié)果表明，該疾病可能起源于胎盤(pán)血管結(jié)構(gòu)異常、血管內(nèi)皮細(xì)胞受損及炎癥免疫過(guò)度激活，但目前尚未完全定論。

ADMA是甲基化蛋白質(zhì)精氨酸在蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶作用下產(chǎn)生的一種蛋白代謝產(chǎn)物，是一種內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制劑，對(duì)一氧化氮合酶的活性具有抑制作用，主要通過(guò)影響一氧化氮的合成起到調(diào)節(jié)血壓的作用。ADMA的含量高低主要受降解酶二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)的調(diào)控[9]。已有研究[10]證實(shí), ADMA氧化應(yīng)激反應(yīng)這一病理生理改變可引起DDHA的表達(dá)減少和(或)活性減弱，導(dǎo)致ADMA濃度增加，從而促進(jìn)內(nèi)皮功能失調(diào)，增加血管阻力，最終導(dǎo)致高血壓的出現(xiàn)，并參與子癇前期的發(fā)生。研究[11-12]顯示，子癇前期患者在早期妊娠時(shí)血清ADMA水平正常，子癇前期發(fā)生期其水平升高，分娩后再次下降。DDAH降低引起全身性血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，部分胎盤(pán)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化導(dǎo)致胎盤(pán)血管內(nèi)皮損傷。血管形態(tài)發(fā)生改變，收縮增強(qiáng)，影響胎盤(pán)血流灌注量，嚴(yán)重威脅胎兒的正常發(fā)育。本研究對(duì)子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織中ADMA水平進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示, ADMA在子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織中高表達(dá)，且隨著病情加重其表達(dá)水平增高，與相關(guān)研究[13-14]顯示的ADMA參與子癇前期的發(fā)生結(jié)果相符。

AnnexinⅤ是膜聯(lián)蛋白家族成員之一，廣泛分布于人體內(nèi)，在細(xì)胞及膜表面參與運(yùn)轉(zhuǎn)鈣依賴調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的活動(dòng)。AnnexinⅤ在細(xì)胞外有鈣離子的情況下與磷酯酰絲氨酸結(jié)合，進(jìn)而起到抗凝、抗血栓形成、抗炎、抗免疫的作用。AnnexinⅤ在妊娠期間高表達(dá)于合體細(xì)胞滋養(yǎng)層，主要由胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞分泌[15]。研究[16-17]表明，由于AnnexinⅤ抗凝的活性參與子癇前期的病理機(jī)制，子癇前期患者凝血和纖溶系統(tǒng)失衡導(dǎo)致胎盤(pán)絨毛間高凝狀態(tài)，形成胎盤(pán)微血管血栓，繼而導(dǎo)致胎盤(pán)組織缺血、缺氧，限制胎兒生長(zhǎng)，參與子癇前期的發(fā)生。本研究對(duì)子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織中AnnexinⅤ水平進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示, AnnexinⅤ在子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織者中低表達(dá)，且隨著病情加重其水平降低。

Survivin是一種凋亡抑制因子。研究[18]認(rèn)為，Survivin可促進(jìn)胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞的存活和增殖，使滋養(yǎng)細(xì)胞適度侵襲，對(duì)胚胎著床和胎盤(pán)發(fā)育至關(guān)重要，并維持正常妊娠。研究[19]發(fā)現(xiàn)，Survivin的表達(dá)水平在未使用降壓藥的子癇前期患者中顯著降低，這種改變誘導(dǎo)的細(xì)胞過(guò)度凋亡可使胎盤(pán)發(fā)育受限，引起妊娠并發(fā)癥，因此Survivin參與子癇前期的發(fā)生，影響妊娠結(jié)局。本研究對(duì)子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織中Survivin水平進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示, Survivin在子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織者中呈低表達(dá)，且隨著病情加重而降低，與曾玲娟等[20]研究認(rèn)為的Survivin參與子癇前期的發(fā)生結(jié)果相符。

另外本研究還對(duì)ADMA、AnnexinⅤ、Survivin之間的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示, ADMA與AnnexinⅤ、Survivin均呈負(fù)相關(guān), AnnexinⅤ與Survivin呈正相關(guān)，此結(jié)果說(shuō)明ADMA、AnnexinⅤ、Survivin存在一定相關(guān)性，且共同參與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述, ADMA、AnnexinⅤ、Survivin在子癇前期患者血清及胎盤(pán)組織中呈特異性表達(dá)，且與病情輕重關(guān)系密切，為臨床上子癇前期的診治提供了新的理論參考。