劉星雨，曹素芳，朱秋軼，曾志安，劉 前，李 俊，劉 果，李一峰，陳運(yùn)嬌，曹 庸,*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東 廣州 510642；2.澳優(yōu)乳業(yè)（中國）有限公司，湖南 長沙 410200）

人一生中大約有1/3的時間在睡覺[1]，熬夜與晚睡已經(jīng)成為現(xiàn)代人的標(biāo)簽，睡眠問題也成為全球最為關(guān)注的熱點(diǎn)之一?，F(xiàn)階段，市場上出現(xiàn)了越來越多的促睡眠產(chǎn)品，包括苯二氮卓、巴比妥酸鹽和唑吡坦類藥物，然而，長期使用這些合成物質(zhì)會導(dǎo)致一些副作用，包括失憶、共濟(jì)失調(diào)等[2-3]。為了克服這些藥物帶來的副作用，一類新的具有改善睡眠效果的天然產(chǎn)物受到了人們的廣泛關(guān)注。

牛乳源生物活性肽是指牛乳中游離的活性肽和經(jīng)過酶解后乳蛋白釋放出來的活性肽，具有多種活性（如免疫調(diào)節(jié)[4]、抗菌[5]、抗氧化、降血壓、促睡眠等[6]），目前已被廣泛應(yīng)用于各種功能性食品的研究中。有研究發(fā)現(xiàn)，牛乳源促睡眠肽具有促進(jìn)睡眠的特性，具有促進(jìn)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠效果[7]。同時，對睡眠障礙人群具有減緩相關(guān)癥狀的作用[8]，其對正常睡眠人群無副作用，且還具有鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫等功能，長期服用牛乳源促睡眠肽的受試者其睡眠質(zhì)量指數(shù)得分顯著提高，睡眠質(zhì)量得到提升[9]。

睡眠被認(rèn)為有兩種調(diào)控機(jī)制：一種為晝夜節(jié)律系統(tǒng)；一種為睡眠穩(wěn)態(tài)機(jī)制[10-11]。有研究人員通過減少野生型果蠅的氧化應(yīng)激，發(fā)現(xiàn)野生型果蠅的睡眠質(zhì)量也有所降低，表明氧化應(yīng)激可能會通過睡眠穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)調(diào)節(jié)睡眠，并且驗證了睡眠和氧化應(yīng)激之間可能存在雙向關(guān)系，即氧化應(yīng)激會誘導(dǎo)睡眠，而睡眠對身體和大腦起著抗氧化劑的作用[12]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)牛乳經(jīng)過胰蛋白酶水解后再進(jìn)行等電點(diǎn)沉淀的牛乳源促睡眠肽，其活性成分主要為4 條含14～19 個氨基酸的活性肽段，相對含量為13.28%，采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)其具有較好的促睡眠效果[13]。但牛乳源促睡眠肽的促睡眠效果是否與氧化應(yīng)激有關(guān)需要進(jìn)一步研究。

鑒于此，本實驗采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基、2,2’-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS）陽離子自由基、超氧陰離子自由基和羥自由基清除能力測定4 種體外抗氧化方法評價牛乳源促睡眠肽的抗氧化性，以及運(yùn)用體內(nèi)線蟲模型測定牛乳源促睡眠肽的抗氧化應(yīng)激效果。以期為牛乳源促睡眠肽的抗氧化應(yīng)激功效提供有效的理論數(shù)據(jù)，也為今后研發(fā)具有高效、無毒、天然的功能食品提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

野生型秀麗隱桿線蟲（the Bristol strain N2），雌雄同體，北京市生命科學(xué)研究院惠贈。

牛乳源促睡眠肽 廣東省綠萃生物科技有限公司；抗壞血酸、ABTS 上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司公司；DPPH 西安萊恩生物科技有限公司；生化分析試劑盒均購于南京建成生物工程研究所；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

EnSpire酶標(biāo)儀 美國PerkinElmer公司；LRH系列生化培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司；體視顯微鏡重慶奧特光學(xué)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 體外抗氧化活性的測定

1.3.1.1 DPPH自由基清除活性

參考陳樹俊等[14]的方法并略作改動，用蒸餾水配制DPPH反應(yīng)溶液（0.5 mmol/L，超聲30 min，現(xiàn)配現(xiàn)用），避光保存（0～4 ℃），現(xiàn)配現(xiàn)用。取96 孔板，每孔中加入50 μL 0.1 mg/mL牛乳源促睡眠肽樣品和150 μL DPPH反應(yīng)液，混勻后室溫下避光反應(yīng)30 min，用酶標(biāo)儀在517 nm波長處測定吸光度（A2），其中蒸餾水與DPPH反應(yīng)液混勻的吸光度為樣品對照（A0）；蒸餾水代替DPPH反應(yīng)液的吸光度為空白（A1）。以0.1 mg/mL抗壞血酸作為陽性對照組。每個樣品3 組平行，取平均值。DPPH自由基清除率按公式（1）計算。

1.3.1.2 ABTS陽離子自由基清除活性

參考馬思彤等[15]的方法并略作改動。利用蒸餾水配制7 mmol/L的ABTS溶液和2.45 mmol/L過硫酸鉀溶液。將ABTS溶液和過硫酸鉀溶液以體積比1∶1混勻，在避光23 ℃條件下放置12～16 h，形成ABTS陽離子自由基儲備液后置于4 ℃條件下儲存。使用前用蒸餾水對ABTS陽離子自由基溶液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專s20～25 倍），使稀釋后的溶液在734 nm波長處的吸光度為0.70±0.02，得到ABTS陽離子自由基工作液。在96 孔板每孔中加入100 μL 0.1 mg/mL的牛乳源促睡眠肽樣品以及100 μL ABTS陽離子自由基工作液混勻，在30 ℃條件下反應(yīng)10 min，用酶標(biāo)儀在734 nm波長處測定吸光度（A2），其中蒸餾水與ABTS陽離子自由基工作液混勻的吸光度為樣品對照（A0）；蒸餾水代替ABTS陽離子自由基工作液與樣品混勻的吸光度為空白（A1）。以0.1 mg/mL抗壞血酸作為陽性對照組。每個樣品3 組平行組，結(jié)果取平均值。ABTS陽離子自由基清除率按公式（2）計算。

1.3.1.3 超氧陰離子自由基清除活性

參考李軍等[16]的方法并略作改動。取96 孔板，每孔中加入120 μL Tris-HCI溶液（50 mmol/L、pH 8.2），25 ℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱25 min后加入40 μL 0.1 mg/mL牛乳源促睡眠肽樣品和20 μL鄰苯三酚溶液（25 mmol/L），在25 ℃下反應(yīng)5 min后加入20 μL鹽酸溶液（8 mol/L）以終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀測定420 nm波長處的吸光度（A2），其中蒸餾水代替樣品的吸光度為空白（A0）；蒸餾水代替鄰苯三酚溶液的吸光度為樣品對照（A1）。以0.1 mg/mL抗壞血酸作為陽性對照組。每個樣品3 組平行組，結(jié)果取平均值。超氧自由基清除率按公式（3）計算。

1.3.1.4 羥自由基清除活性

參考丁麗麗等[17]方法并略作改動。取96 孔板，每孔中加入20 μL 0.1 mg/mL牛乳源促睡眠肽樣品、60 μL硫酸亞鐵溶液（3 mmol/L）、60 μL過氧化氫溶液（9 mmol/L），在37 ℃下恒溫預(yù)熱10 min后加入60 μL水楊酸乙醇溶液（6 mmol/L），繼續(xù)37 ℃恒溫預(yù)熱30 min，用酶標(biāo)儀在510 nm波長處測定吸光度（A2），其中蒸餾水代替樣品的吸光度為空白（A0）；蒸餾水代替過氧化氫溶液與硫酸亞鐵溶液混合液的吸光度為樣品對照（A1）。以0.1 mg/mL抗壞血酸作為陽性對照組。每個樣品3 組平行組，結(jié)果取平均值。羥自由基清除率按公式（4）計算。

1.3.2 秀麗隱桿線蟲體內(nèi)抗氧化實驗

1.3.2.1 秀麗隱桿線蟲培養(yǎng)和同期化處理

秀麗隱桿線蟲的培養(yǎng)使用線蟲生長培養(yǎng)基（nematode growth medium，NGM），在表面涂布有OP50大腸桿菌作為線蟲的食物，于20 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

本文實驗所用線蟲均為經(jīng)過同期化處理生長至L4期的線蟲，體內(nèi)活性實驗牛乳源促睡眠肽的應(yīng)用質(zhì)量濃度為1 mg/mL。根據(jù)Lin Chunxiu等[18]的方法，采用高氯酸鈉裂解法對線蟲進(jìn)行同期化處理。

1.3.2.2 秀麗隱桿線蟲給藥

實驗操作參考王晉等[19]的方法并略作改動，配制1 mg/mL牛乳源促睡眠肽溶液，過濾除菌后，與大腸桿菌OP50菌液以質(zhì)量比1∶9混合均勻，樣品組吸取100 μL牛乳源促睡眠肽溶液與大腸桿菌OP50菌液混合溶液于NGM平板上喂養(yǎng)秀麗隱桿線蟲，空白組吸取100 μL大腸桿菌OP50菌液于NGM平板上喂養(yǎng)秀麗隱桿線蟲。此條件下，藥物通過秀麗隱桿線蟲攝食而進(jìn)入到秀麗隱桿線蟲體內(nèi)，并根據(jù)不同實驗要求喂養(yǎng)至不同時期再進(jìn)行實驗測定。

1.3.2.3 正常壽命測定

壽命的測定是為了判斷牛乳源促睡眠肽在抗氧化的同時，是否會對秀麗隱桿線蟲壽命產(chǎn)生影響。實驗操作參考王晉等[19]的方法并略作改動，將產(chǎn)卵期的秀麗隱桿線蟲挑至涂有樣品（或者空白組）的培養(yǎng)基上進(jìn)行產(chǎn)卵同期化，待秀麗隱桿線蟲孵化生長至L4期后，將秀麗隱桿線蟲轉(zhuǎn)移到新的NGM板中，此后每隔1 d轉(zhuǎn)移一次，以排除它們后代的影響。秀麗隱桿線蟲死亡的數(shù)量根據(jù)它們是否對刺激有反應(yīng)來確定。在統(tǒng)計分析中，不計算培養(yǎng)基內(nèi)孵化或逃離培養(yǎng)基的秀麗隱桿線蟲。秀麗隱桿線蟲平均壽命計算見公式（5）。中位壽命是指存活率等于50%的培養(yǎng)時間；最長壽命是指存活率等于0的培養(yǎng)時間。

式中：j是秀麗隱桿線蟲壽命/d；dj是死于年齡區(qū)間（xj，xj＋1）秀麗隱桿線蟲的數(shù)量；n是秀麗隱桿線蟲的總數(shù)。

1.3.2.4 H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激壽命測定

H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激實驗操作參考Lin Chunxiu等[20]的方法并略作改動，挑取60 只已給藥3 d的秀麗隱桿線蟲暴露于稀釋了1 000 倍的體積分?jǐn)?shù)30%過氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激壓力下。每隔30 min觀察并記錄各組秀麗隱桿線蟲的死亡情況，直至所有秀麗隱桿線蟲死亡，秀麗隱桿線蟲死亡判定標(biāo)準(zhǔn)同1.3.2.3節(jié)。

1.3.2.5 熱應(yīng)激下的壽命測定

熱應(yīng)激實驗操作參考Li Wei等[21]的方法并略作改動，將L4期的秀麗隱桿線蟲從20 ℃的培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)移到37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每1 h觀察并記錄各組秀麗隱桿線蟲的死亡情況，直至所有秀麗隱桿線蟲死亡，秀麗隱桿線蟲死亡判定標(biāo)準(zhǔn)同1.3.2.3節(jié)。

1.3.2.6 生殖能力測定

實驗操作參考王鳳等[22]的方法并略作改動，將同期化后L4期的秀麗隱桿線蟲每組挑取2 條秀麗隱桿線蟲單獨(dú)飼養(yǎng)，此時記為第1天。然后，每24 h將秀麗隱桿線蟲轉(zhuǎn)至新NGM培養(yǎng)基，直至生殖能力喪失（培養(yǎng)基上不產(chǎn)生新的蟲卵）。20 ℃下孵育產(chǎn)卵板（帶有線蟲卵的NGM培養(yǎng)基），48 h后計數(shù)子代數(shù)目，即產(chǎn)卵量，以此評價秀麗隱桿線蟲的生殖能力。

1.3.2.7 頭部擺動次數(shù)測定

實驗操作參考王晉等[19]的方法并略作改動，將L4期的秀麗隱桿線蟲轉(zhuǎn)移到樣品組和空白對照組秀麗隱桿線蟲生長培養(yǎng)基中，在第4、8天和第12天時觀察秀麗隱桿線蟲在30 s內(nèi)的頭部擺動次數(shù)，以此評價秀麗隱桿線蟲的運(yùn)動能力。

1.3.2.8 移動能力測定

實驗操作參考王晉等[19]的方法并略作改動，在壽命實驗期間進(jìn)行移動能力測定，在第3、7、11天觀察并記錄秀麗隱桿線蟲的移動能力。記錄標(biāo)準(zhǔn)：1）秀麗隱桿線蟲自發(fā)運(yùn)動，不需要觸碰刺激，記為A；2）秀麗隱桿線蟲必須受到觸碰刺激才運(yùn)動，記為B；3）秀麗隱桿線蟲受到觸碰刺激后只擺動頭或尾，記為C。記錄各移動能力秀麗隱桿線蟲所占的比例。

1.3.2.9 體內(nèi)抗氧化效果指標(biāo)測定

根據(jù)Lin Chunxiu等[23]的方法，將同期化并升溫處理后的秀麗隱桿線蟲沖洗并收集至EP管中，用裂解液重懸冰上勻漿，然后。按照試劑盒的說明書對秀麗隱桿線蟲勻漿液中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，結(jié)果以蛋白質(zhì)量計。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

所有實驗均至少重復(fù)3 次，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并通過SPSS 19.0軟件對兩組間的比較采用t檢驗進(jìn)行顯著性分析，P＜0.05為顯著差異，P＜0.01為極顯著差異。其中，生存曲線使用GraphPad（Windows 5.00版）軟件進(jìn)行l(wèi)og-rank檢驗分析顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛乳源促睡眠肽對4 種體外抗氧化活性指標(biāo)的影響

由表1可知，牛乳源促睡眠肽具有較強(qiáng)的DPPH自由基（44.27%）和ABTS陽離子自由基（24.83%）清除能力，相同質(zhì)量濃度下，效果均與陽性對照抗壞血酸無顯著差異（P＞0.05）。牛乳源促睡眠肽也具有一定的羥自由基（18.37%）和超氧陰離子自由基（37.22%）清除能力，相同質(zhì)量濃度下，效果分別為陽性對照抗壞血酸的70.46%和78.11%。因此，牛乳源促睡眠肽具有較好的體外抗氧化能力，下面進(jìn)一步探究其是否具有體內(nèi)抗氧化以及延緩衰老的能力。

表1 牛乳源促睡眠肽的抗氧化活性Table 1 Antioxidant activity of milk-derived sleep-promoting peptide

2.2 牛乳源促睡眠肽對秀麗隱桿線蟲氧化衰老的影響

2.2.1 對體內(nèi)抗氧化酶活力及MDA含量的影響

抗氧化防御系統(tǒng)為機(jī)體發(fā)揮抗氧化性重要的組成部分[24]。由圖1A～C可知，與空白組相比，樣品組的SOD、CAT、GSH-Px活力分別提高了52.3%、32.7%、60.7%（P＜0.05、P＜0.01）。MDA是生物體內(nèi)脂質(zhì)氧化產(chǎn)生的一種天然產(chǎn)物，其含量被廣泛應(yīng)用于反映脂質(zhì)氧化程度[22]。由圖1D可知，樣品組具有更低的MDA含量，樣品組比空白組極顯著降低了46.9%（P＜0.01）。以上數(shù)據(jù)表明，牛乳源促睡眠肽可能在一定程度上提高秀麗隱桿線蟲體內(nèi)抗氧化能力，延緩秀麗隱桿線蟲的氧化損傷和衰老，具有激活秀麗隱桿線蟲抗氧化防御系統(tǒng)的潛力。

圖1 牛乳源促睡眠肽對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)SOD（A）、CAT（B）、GSH-Px（C）活力和MDA含量（D）的影響Fig. 1 Effect of milk-derived sleep-promoting peptide on activities of SOD (A), CAT (B), GSH-Px (C) and MDA content (D) in C. elegans

2.2.2 對正常壽命的影響

由圖2可知，與空白組相比，樣品組秀麗隱桿線蟲生存曲線明顯右移。由表2可知，與空白組相比，樣品組秀麗隱桿線蟲的平均壽命、中位壽命和最長壽命都得到極顯著延長（P＜0.01）。說明牛乳源促睡眠肽能明顯延長秀麗隱桿線蟲的壽命。

圖2 正常條件下秀麗隱桿線蟲的生存曲線Fig. 2 Survival curves of C. elegans under normal conditions

表2 秀麗隱桿線蟲存活時間統(tǒng)計分析Table 2 Statistical analysis of survival time of C. elegans

2.2.3 對秀麗隱桿線蟲抗氧化應(yīng)激性的影響

如圖3所示，在H2O2急性氧化脅迫下，牛乳源促睡眠肽促使線蟲生存曲線向右移。由表2可知，與空白組相比，樣品組秀麗隱桿線蟲的平均壽命得到極顯著延長（P＜0.01），最長壽命得到顯著延長（P＜0.05）。說明牛乳源促睡眠肽具有提高線蟲的抗氧化應(yīng)激的潛力。

圖3 H2O2誘導(dǎo)的氧化脅迫下秀麗隱桿線蟲的生存曲線Fig. 3 Survival curve of C. elegans under H2O2-induced oxidative stress

2.2.4 對秀麗隱桿線蟲抗熱應(yīng)激的影響

如圖4所示，在37 ℃急性熱應(yīng)激環(huán)境下，牛乳源促睡眠肽促使秀麗隱桿線蟲生存曲線明顯右移。由表2可知，與空白組相比，樣品組秀麗隱桿線蟲的平均壽命和中位壽命都得到極顯著延長（P＜0.01），最長壽命延長了5.62%。說明牛乳源促睡眠肽具有提高秀麗隱桿線蟲抗熱應(yīng)激的潛力。

圖4 熱應(yīng)激脅迫下秀麗隱桿線蟲的生存曲線Fig. 4 Survival curve of C. elegans under heat shock stress

2.2.5 對生殖能力的影響

有研究表明，秀麗隱桿線蟲的壽命與生殖能力之間存在“利弊權(quán)衡（trade off）”，即延長壽命將以降低或喪失生殖能力為代價[25]。如圖5所示，與空白組相比，樣品組的產(chǎn)卵量雖然在第2天時有所降低，但秀麗隱桿線蟲的總產(chǎn)卵量并無顯著差異，因此認(rèn)為牛乳源促睡眠肽不會損害秀麗隱桿線蟲的生殖能力。

圖5 牛乳源促睡眠肽對秀麗隱桿線蟲生殖能力的影響Fig. 5 Effect of milk-derived sleep-promoting peptide on the fertility of C. elegans

2.2.6 對運(yùn)動能力的影響

如圖6所示，隨著培養(yǎng)時間延長，秀麗隱桿線蟲的頭部擺動次數(shù)逐漸減少，說明在秀麗隱桿線蟲的衰老過程中，其運(yùn)動行為能力逐漸下降。與空白組相比，樣品組秀麗隱桿線蟲在第4天和第8天的頭部擺動次數(shù)沒有顯著差異（P＞0.05），但樣品組秀麗隱桿線蟲在第12天的頭部擺動次數(shù)顯著提高（P＜0.05）。對比空白組，樣品組秀麗隱桿線蟲的頭部擺動次數(shù)在培養(yǎng)前8 d沒有顯著降低，在第12天時顯著增加，說明牛乳源促睡眠肽在延長秀麗隱桿線蟲壽命和對生殖能力沒有顯著影響的前提下，沒有對秀麗隱桿線蟲的運(yùn)動行為能力造成不利影響，反而在生命后期對運(yùn)動能力有促進(jìn)作用。

圖6 牛乳源促睡眠肽對秀麗隱桿線蟲的頭部擺動次數(shù)的影響Fig. 6 Effect of milk-derived sleep-promoting peptide on head swinging frequency of C. elegans

2.2.7 對移動能力的影響

有研究表明，秀麗隱桿線蟲的衰老伴隨著移動能力及對外界機(jī)械刺激反應(yīng)的退化[26]。如圖7所示，牛乳源促睡眠肽能明顯提高秀麗隱桿線蟲移動能力，在生命后期（第11天）尤其顯著。說明促睡眠肽具有提高秀麗隱桿線蟲抗衰老的潛力。

圖7 牛乳源促睡眠肽對秀麗隱桿線蟲移動能力的影響Fig. 7 Effect of milk-derived sleep-promoting peptide on the locomotivity of C. elegans

3 討 論

本實驗采用了DPPH自由基、羥自由基、超氧陰離子自由基和ABTS陽離子自由基清除能力測定4 種體外自由基清除方法評價牛乳源促睡眠肽的抗氧化活力，結(jié)果表明，牛乳源促睡眠肽在體外能有效清除自由基，具有良好的抗氧化活性，其中DPPH自由基和ABTS陽離子自由基清除能力與陽性對照組無顯著差異，清除率分別為49.77%和29.37%，說明牛乳源促睡眠肽的體外抗氧化性可能與其DPPH自由基和ABTS陽離子自由基的清除能力密切相關(guān)；對羥自由基和超氧陰離子自由基也有較好的清除效果，清除率分別為26.07%和47.65%。

氧化應(yīng)激被認(rèn)為是導(dǎo)致秀麗隱桿線蟲衰老的關(guān)鍵因素，秀麗隱桿線蟲的抗氧化應(yīng)激能力和壽命有較好的相關(guān)性[27]，壽命會隨著抗氧化應(yīng)激能力的提高而提高[28]。本次實驗中牛乳源促睡眠肽處理后的秀麗隱桿線蟲體內(nèi)SOD、CAT和GSH-Px 3 種抗氧化酶活力顯著提高，MDA含量顯著降低，并且其在正常、H2O2和熱應(yīng)激氧化應(yīng)激條件下秀麗隱桿線蟲的存活率顯著增加，移動能力和頭部擺動次數(shù)與空白組相比沒有顯著降低。說明牛乳源促睡眠肽在對秀麗隱桿線蟲移動能力沒有負(fù)面影響的同時能有效延長秀麗隱桿線蟲的壽命，增強(qiáng)其對外界壓力的抗逆性。

此前有研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激與睡眠存在著雙向關(guān)系[12]。近期也有研究報道，長期不睡覺可能會因為腸道中活性氧（reactive oxygen species，ROS）的大量積累導(dǎo)致猝死[29]。過量ROS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激會導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和生物分子功能損傷[30]。中和ROS可以使果蠅在很少或沒有睡眠的情況下正常存活，說明促睡眠物質(zhì)的促睡眠作用可能與抗氧化活性密切相關(guān)。本實驗綜合體內(nèi)和體外的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)牛乳源促睡眠肽能有效清除自由基和提高機(jī)體抗氧化應(yīng)激能力。

本研究初步表明牛乳促睡眠肽可作為天然的食品抗氧化劑加以開發(fā)利用，為以后牛乳源促睡眠肽在功能食品方面的進(jìn)一步研究提供理論和實驗參考，但是其產(chǎn)生抗氧化作用的具體作用機(jī)制還需要后續(xù)進(jìn)一步的研究。