黃艷峰，林晴，謝新宇，付長龍，葉錦霞，李西海

【摘 要】 骨關(guān)節(jié)炎病位在體為筋骨，在臟為肝腎，兩者相輔相成;肝腎相濟則骨堅筋強，肝腎不足則骨痿筋弱。研究表明臨床運用補肝腎、強筋骨類中藥，可促進軟骨細胞增殖，延緩軟骨退變，但其具體作用機制尚不明確。故以補肝腎、強筋骨類中藥及相關(guān)活性成分促進軟骨細胞增殖為切入點，查閱文獻并綜述認為，其作用機制可能與促進細胞外基質(zhì)合成、調(diào)控細胞周期相關(guān)蛋白、促進轉(zhuǎn)化生長因子-β相關(guān)受體表達、調(diào)控細胞外調(diào)節(jié)激酶、Wnt信號通路及miRNA有關(guān)，可為進一步研究中藥靶向治療骨關(guān)節(jié)炎提供思路。

【關(guān)鍵詞】 骨關(guān)節(jié)炎;軟骨細胞;增殖;補肝腎;強筋骨;活性成分;作用機制

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是好發(fā)于中老年女性群體，以軟骨進行性磨損、退變?yōu)榛A(chǔ)，伴發(fā)骨贅增生為病理特點的常見關(guān)節(jié)疾病[1]。隨著人口老齡化的增長，60歲以上的人群中約有20%受到OA影響，給家庭及社會帶來沉重精神及醫(yī)療負擔[2-3]。軟骨細胞作為軟骨組織的核心架構(gòu)，局部因缺乏神經(jīng)、血管營養(yǎng)，受損軟骨難以實現(xiàn)再生修復[4]。大量研究證實，中醫(yī)藥防治OA具有顯著療效[5-7]。中醫(yī)學認為，腎主骨生髓，髓充骨生血;肝主筋藏血，血能養(yǎng)筋，筋能束骨，兩者相輔相成;肝腎虧虛則筋骨失養(yǎng)，肝腎相濟則筋骨互用。肝腎虧虛、筋骨失養(yǎng)是OA軟骨退變的基礎(chǔ)，肝腎虧虛是軟骨退變的核心病機，筋骨失養(yǎng)是軟骨退變的必經(jīng)階段[8-10]。因此，針對肝腎不足的患者，治療上應(yīng)遵循補肝腎、強筋骨原則。補肝腎、強筋骨類中藥富含黃酮、多糖、皂苷類活性成分，具有抗炎、抗氧化、清除自由基等作用，可促進軟骨細胞增殖，為實現(xiàn)延緩軟骨退變提供可能[11-14]。其作用機制主要與促進細胞外基質(zhì)合成、調(diào)控細胞周期相關(guān)蛋白、促進轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）相關(guān)受體表達、調(diào)控細胞外調(diào)節(jié)激酶（ERK）、Wnt信號通路，及miRNA有關(guān)[15-18]。

1 調(diào)控軟骨細胞基質(zhì)合成促進軟骨細胞增殖

軟骨細胞外基質(zhì)主要由Ⅱ型膠原和蛋白聚糖組成，是軟骨細胞表達的特異性物質(zhì)，為軟骨細胞提供抗張力和抗擠壓條件，同時也是間接反映細胞增殖、修復能力的重要指標[19-20]。而補肝腎、強筋骨類中藥活性成分可以有效上調(diào)Ⅱ型膠原與蛋白聚糖表達，實現(xiàn)促進軟骨細胞增殖修復[21]。杜仲入肝、腎經(jīng)，具有補肝腎、強筋骨等功效;杜仲苷是其主要活性成分之一，具有抗炎、抗病毒、抗骨質(zhì)疏松等作用[22]。謝國平等[23]通過杜仲苷干預(yù)IL-1β誘導體外炎癥軟骨細胞后發(fā)現(xiàn)，杜仲苷可以提高體外大鼠軟骨細胞炎性環(huán)境下的增殖活力，其機制主要是通過促進Ⅱ型膠原蛋白的分泌保護軟骨細胞。桑寄生入肝、腎經(jīng)，具有補肝腎、強筋骨、祛風濕等功效;槲皮素是其主要活性成分之一，具有抗炎、抗腫瘤等藥理作用[24]。在一定條件下，槲皮素可有效上調(diào)Ⅱ型膠原與蛋白聚糖的表達，促進軟骨細胞增殖及軟骨表型的維持[25]。

2 調(diào)控TGF-β相關(guān)受體促進軟骨細胞增殖

TGF-β是經(jīng)典調(diào)節(jié)細胞生長、分化、增殖和成熟的TGF-β超家族的多功能細胞因子，與OA的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[26]。研究表明，補肝腎、強筋骨類中藥相關(guān)活性成分可通過上調(diào)TGF-β相關(guān)受體，促進軟骨細胞增殖，保護軟骨組織[27]。鹿茸為傳統(tǒng)名貴藥材，入肝、腎經(jīng)，具有壯腎陽、強筋骨等功效?，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，鹿茸具有多種生物活性成分，能促進組織再生和修復[28]。牛維等[29]通過鹿茸干預(yù)Hulth造模后的SD大鼠發(fā)現(xiàn)，其可通過上調(diào)TGF-β1基因和蛋白表達水平，促進軟骨細胞增殖。牛膝歸肝、腎經(jīng)，具有補肝腎、強筋骨、引血下行等功效;牛膝總皂苷是牛膝主要活性成分之一，有良好的抗炎消腫作用;采用牛膝總皂苷干預(yù)兔關(guān)節(jié)炎模型后，可下調(diào)炎癥因子IL-1β，上調(diào)TGF-β1表達，促進軟骨細胞增殖，抑制軟骨細胞退變[30]。

3 調(diào)控ERK信號通路促進軟骨細胞增殖

ERK是參與軟骨細胞增殖與分化的重要絲氨酸/蘇氨酸激酶，其中ERK1、ERK2與ERK的同源性高達90%，可通過激活Ras/Raf/MEK/ERK參與細胞增殖等信號傳導[31]。研究表明，補肝腎、強筋骨類中藥相關(guān)活性成分可通過激活Ras/Raf/MEK/ERK信號通路，促進軟骨細胞增殖，從而延緩軟骨退變[32]。龜板膠與鹿角膠均入肝、腎經(jīng)，具有補益肝腎功效。龍美兵[33]通過qPCR、Western Blot等實驗方法檢驗龜板膠與鹿角膠對體外豚鼠軟骨細胞Raf/MEK/ERK信號通路的影響，表明Raf/MEK/ERK信號通路及其磷酸化參與豚鼠軟骨細胞增殖，且龜板膠與鹿角膠均能促進軟骨細胞增殖。狗脊歸肝、腎經(jīng)，具有補益肝腎、強壯腰膝等功效。狗脊活性成分中的狗脊多糖可通過下調(diào)退變軟骨中Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2基因和蛋白表達，上調(diào)超氧化物歧化酶水平，促進軟骨細胞增殖[32]。

4 調(diào)控Wnt信號通路促進軟骨細胞增殖

Wnt信號通路是參與軟骨細胞增殖的經(jīng)典通路，主要涉及Wnt/β連環(huán)蛋白（β-catenin）信號通路，對軟骨細胞具有雙向調(diào)節(jié)作用，與軟骨基質(zhì)分解代謝、分化等密切相關(guān)[34]。補肝腎、強筋骨類中藥活性成分可以通過激活Wnt/β-catenin信號通路，促進軟骨細胞增殖[35]。淫羊藿歸肝、腎經(jīng)，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕等功效。張帥等[36]針對淫羊藿活性成分中的淫羊藿苷對軟骨細胞采用MTT、流式細胞術(shù)等方法檢測軟骨細胞凋亡率，實時熒光定量檢測Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)基因表達水平，結(jié)果表明，淫羊藿苷能激活Wnt/β-catenin信號通路而促進軟骨細胞增殖，抑制細胞凋亡。牛膝多糖是牛膝主要活性成分之一，可上調(diào)Wnt-4、Frizzled2、β-catenin和cyclinD1的表達，下調(diào)糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）的表達，提示牛膝多糖可通過激活Wnt/β-catenin信號通路促進軟骨細胞增殖[37]。黃芪歸肝、腎、肺、脾經(jīng)，利水消腫功效顯著。黃芪皂苷是黃芪中主要活性成分之一，通過黃芪皂苷可調(diào)控DKK1、WISP1、β-catenin和LRP5基因和蛋白表達水平，促進軟骨細胞增殖，具有延緩軟骨退變功效[38]。gzslib202204011816

5 調(diào)控細胞周期相關(guān)蛋白及蛋白激酶促進軟骨細胞增殖

細胞的增殖涉及細胞周期，軟骨細胞周期是從上一次分裂結(jié)束到下一次分裂完成的反復圓周循環(huán)過程。這一過程是軟骨細胞遺傳物質(zhì)的基礎(chǔ)，軟骨細胞的增殖需要經(jīng)歷細胞周期的4個關(guān)鍵階段（G1期、S期、G2期、M期），而細胞周期蛋白D1（CyclinD1）和細胞周期蛋白依賴性激酶（CDK4和CDK6）在G1期進入S期發(fā)揮了重要作用[39]。補肝腎、強筋骨類中藥相關(guān)活性成分可通過調(diào)控軟骨細胞周期蛋白和蛋白激酶的途徑促進軟骨細胞增殖[40]。沙苑子入肝、腎二經(jīng)，具有補腎助陽功效。沙苑子多糖是其主要活性成分之一。沈驊睿等[41]觀察沙苑子多糖干預(yù)兔半月板軟骨細胞，表明沙苑子多糖可通過降低G1/G0期細胞百分比，促進細胞向S期轉(zhuǎn)化，實現(xiàn)促進軟骨細胞增殖功效。巴戟天與牛膝均具有補肝腎、強筋骨、祛風濕功效，吳子健等[42]通過此補腎藥對醇提物對體外SD大鼠軟骨細胞進行干預(yù)，表明巴戟天-牛膝醇提物在一定條件下可上調(diào)CDK4、CyclinD1 mRNA及蛋白表達，對軟骨細胞增殖具有正性調(diào)控作用。龍須藤又名梅花入骨丹，龍須藤多糖是其主要活性成分之一，不同濃度的龍須藤多糖干預(yù)軟骨細胞后，發(fā)現(xiàn)其可通過上調(diào)軟骨細胞周期正向調(diào)節(jié)因子CDK4、CDK6、CyclinD1的表達，促進軟骨細胞增殖[43]。

6 調(diào)控miRNA促進軟骨細胞增殖

微小RNA（miRNA）是一類具有17～24個堿基核苷酸小的內(nèi)源性非編碼RNA，通過介導mRNA降解或阻斷mRNA調(diào)節(jié)基因表達，參與軟骨形成和軟骨重塑過程[44]。其中，補肝腎、強筋骨類中藥活性成分可通過miR-375、miR-19a等途徑調(diào)控軟骨細胞增殖[45-46]。桑寄生水提物具有良好的抗炎和促進軟骨細胞增殖活性，具體作用機制可能與抑制miR-375對IL-1β作用的RPOC活力、上調(diào)CyclinD1蛋白表達水平有關(guān)[45]。續(xù)斷入肝、腎經(jīng)，具有補肝腎、強筋骨等功效;續(xù)斷總皂苷是其主要活性成分之一，對關(guān)節(jié)軟骨和軟骨細胞有保護作用。陳偉達等[46]研究表明，續(xù)斷總皂苷可上調(diào)miR-19a表達，進而下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子-κB mRNA和蛋白表達，實現(xiàn)保護軟骨細胞作用。

7 結(jié) 語

OA屬中醫(yī)學“骨痹”范疇，其病在筋骨，病位在肝腎，核心病機為“本痿標痹”，肝腎不足之本虛貫穿疾病始終。因此，臨床治療選用補肝腎、強筋骨類中藥是遵循“治病求本”基本原則。綜上可見，補肝腎、強筋骨類中藥相關(guān)活性成分對于防治OA具有良效，可能與其相關(guān)活性成分可以促進軟骨細胞增殖、保護軟骨組織、緩解退變有關(guān)。臨床常用的補肝腎、強筋骨類中藥有杜仲、桑寄生、鹿茸、牛膝、龜板、鹿角膠、狗脊、淫羊藿、沙苑子、巴戟天、龍須藤、續(xù)斷等，此類藥物大多含有黃酮、多糖、皂苷類活性成分，除了具有抗炎、抗氧化、提高免疫應(yīng)答、保護神經(jīng)等藥理共性外，還可提高軟骨細胞活性，促進軟骨細胞增殖。其作用機制主要與細胞外基質(zhì)合成、細胞周期相關(guān)蛋白、TGF-β相關(guān)受體、ERK、Wnt信號通路及miRNA有關(guān)，可為OA的臨床靶向藥物治療選擇提供參考。

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