張洪坤，路麗，黃玉瑤，郭長(zhǎng)達(dá)，高貫彪，吳韶輝，楊美華

作者單位：1亳州市滬譙藥業(yè)有限公司，安徽 亳州236800；2四川豪運(yùn)藥業(yè)股份有限公司，四川 廣元628017；3韶關(guān)市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 韶關(guān)512026；4中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193

半枝蓮（Scutellaria barbataD.Don）為唇形科黃芩屬植物的干燥全草［1］。夏、秋二季莖葉茂盛時(shí)采挖，味辛、苦，寒，歸肺、肝、腎經(jīng)，功可清熱解毒，化瘀利尿，近代藥理學(xué)研究表明半枝蓮具有抗腫瘤、抗病原、抑菌、解熱、保肝等活性，臨床用于治療各種癌癥、肝炎、疔瘡腫毒、咽喉腫痛、跌撲傷痛、水腫、黃疸、毒蛇咬傷等病，療效確切［2-5］。2015 年版《中國(guó)藥典》收載的半枝蓮的規(guī)定為全草入藥，而目前市場(chǎng)上由于半枝蓮的生長(zhǎng)特點(diǎn)及考慮經(jīng)濟(jì)效益，多收割地上部位入藥，由此對(duì)半枝蓮的質(zhì)量及藥效是否造成影響研究還未見報(bào)道。對(duì)于全草類中藥的不同部位的占比對(duì)其質(zhì)量影響很大，因此，本研究以半枝蓮地上部分不同部位中野黃芩苷等多成分含量為指標(biāo)探明不同部位質(zhì)量情況，以期了解不同藥用部位中各有效成分的含量是否有差異，首次采用灰色關(guān)聯(lián)度法綜合評(píng)價(jià)半枝蓮不同藥用部位的質(zhì)量。本研究首次在半枝蓮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中確定了不同部位的占比，為半枝蓮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加控制葉的比例提供依據(jù)，并為評(píng)價(jià)半枝蓮不同藥用部位的質(zhì)量及資源合理開發(fā)利用、藥源管理提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1儀器 RHP-100 型高速多功能粉碎機(jī)（浙江永康市榮浩工貿(mào)有限公司）；XS204 型電子天平（d=0.1 mg，Mettler Toledo）；電熱套（500 mL，海寧市新華醫(yī)療器械廠）；HWS-26 型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；DHG-9245A 電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；TU-1901 雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；Agilent-1200型高效液相色譜儀；YMC Hydro?sphere C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）。

1.1.2 試藥 甲醇（色譜純，Merck）；甲醇（AR，170212-1，西隴科學(xué)股份有限公司）；無水乙醇（AR，161004-1，西隴科學(xué)股份有限公司）；石油醚（60～90 ℃）（AR，20160801-2，廣州化學(xué)試劑廠）；磷酸（色譜純，阿拉?。淮姿幔ˋR，20150601-2，廣州化學(xué)試劑廠）；野黃芩苷（110842-201508，中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量以91.3%計(jì)）；野黃芩素（MUST-1602204，成都曼斯特生物科技有限公司）；木犀草素（111520-201605，中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量以99.6%計(jì)）；芹菜素（MUST-1606130，成都曼斯特生物科技有限公司）。

1.1.3 樣品 于2017 年7 月半枝蓮開花期間采自亳州市滬譙藥業(yè)有限公司安徽省壽縣半枝蓮基地，均經(jīng)該公司郭長(zhǎng)達(dá)副主任中藥師鑒定為唇形科黃芩屬半枝蓮（Scutellaria barbataD.Don）的干燥地上部分。采樣時(shí)要求所有樣品均從同一種植區(qū)域采集，保證樣品均勻，并對(duì)樣品進(jìn)行統(tǒng)一方法加工后進(jìn)行人工挑選，分別篩選出莖、葉、果進(jìn)行質(zhì)量比較。

同時(shí)，本次研究收集不同產(chǎn)地半枝蓮樣品，16批次半枝蓮藥材均是選擇夏季采收的半枝蓮樣品，將不同產(chǎn)地每批半枝蓮分別按不同藥用部位進(jìn)行人工挑選，分別篩選出莖、葉、果，記錄各部位質(zhì)量所占比例，進(jìn)行質(zhì)量比較。

1.2 方法

1.2.1 浸出物 分別對(duì)半枝蓮不同藥用部位進(jìn)行測(cè)定其水溶性浸出物和醇溶性浸出物，測(cè)定方法參照本研究團(tuán)隊(duì)的研究成果［6-7］所述的浸出物測(cè)定方法。

1.2.2 總黃酮 按2015年版《中國(guó)藥典》半枝蓮【含量測(cè)定】項(xiàng)下總黃酮的測(cè)定法測(cè)定半枝蓮不同藥用部位的總黃酮含量。

1.2.3 多成分含量測(cè)定 該項(xiàng)多成分含量測(cè)定方法參照本研究團(tuán)隊(duì)的研究成果［6-8］所述的含量測(cè)定方法，方法學(xué)考察內(nèi)容不再贅述。

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。色譜柱：YMC Hydrosphere C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)器：UV 檢測(cè)器（335 nm）；以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按表1 中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；柱溫為30 ℃；流速1 mL/min。

表1 梯度洗脫程序表

（2）對(duì)照品溶液的制備。精密稱取野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素、芹菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 毫升含野黃芩苷60 μg、含野黃芩素4 μg、含木犀草素5μg、含芹菜素8μg的混合對(duì)照品溶液。

（3）供試品溶液的制備。精密稱取本品粉末（3號(hào)篩）0.2 g，置100 mL 錐形瓶中，加70%乙醇25 mL，立即加熱回流15 min，冷卻至室溫。過濾，取濾液轉(zhuǎn)移于50 mL 容量瓶中，重復(fù)提取1 次，合并濾液，加70%乙醇至刻度，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，即得。色譜圖見圖1。

圖1 半枝蓮多成分測(cè)定高效液相色譜圖：A為對(duì)照品；B為供試品；C為空白對(duì)照

2 結(jié)果

2.1 半枝蓮不同藥用部位的各指標(biāo)測(cè)定結(jié)果半枝蓮不同藥用部位的浸出物、總黃酮、野黃芩苷等多成分指標(biāo)的含量結(jié)果見表2。其中，分析對(duì)比總黃酮的含量，發(fā)現(xiàn)葉的總黃酮含量顯著高于莖、果、全草，莖、果、全草含量無明顯差異，總體表現(xiàn)為：葉>全草>莖、果；多成分含量測(cè)定中，葉的野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素、芹菜素含量均高于莖、果、全草，這與總黃酮含量的趨勢(shì)一致，不同的是，果中野黃芩苷、野黃芩素含量高于莖。浸出物含量比較中，無論是水溶性浸出物還是醇溶性浸出物，葉含量均顯著高于莖、果、全草，總體表現(xiàn)為：葉>全草>莖、果，莖與果含量差別不明顯。

表2 半枝蓮不同藥用部位檢測(cè)結(jié)果/%

2.2 灰色關(guān)聯(lián)度分析本研究以半枝蓮的7 種測(cè)定指標(biāo)，包括總黃酮、水溶性浸出物、醇溶性浸出物，及野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素和芹菜素，建立半枝蓮不同藥用部位質(zhì)量灰色模式識(shí)別數(shù)據(jù)集。采用灰色關(guān)聯(lián)度分析法，先對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行規(guī)格化處理后再進(jìn)行關(guān)聯(lián)度計(jì)算，具體計(jì)算方法參考本研究團(tuán)隊(duì)的研究成果［9-10］所述的灰色關(guān)聯(lián)分析方法計(jì)算半枝蓮不同藥用部位的相對(duì)關(guān)聯(lián)度，具體結(jié)果見表3。

相對(duì)關(guān)聯(lián)度越大，表明其綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)越高，相對(duì)關(guān)聯(lián)度綜合排序結(jié)果可作為藥材質(zhì)量高低評(píng)價(jià)的依據(jù)。由表3 結(jié)果可知，半枝蓮不同藥用部位樣品中，以相對(duì)關(guān)聯(lián)度的大小排序，從大到小排序?yàn)椋喝~>全草>果≈莖。結(jié)果表明，不同部位中葉的綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)最高，其次是全草，葉的比例對(duì)半枝蓮藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的總黃酮和野黃芩苷指標(biāo)影響比較大，進(jìn)而直接影響該品種的藥材質(zhì)量。

表3 半枝蓮不同藥用部位的相對(duì)關(guān)聯(lián)度及綜合排序

2.3 不同產(chǎn)地半枝蓮樣品的不同部位比例結(jié)果不同產(chǎn)地半枝蓮樣品的莖、葉、果的比例結(jié)果見表4。由結(jié)果可知，不同產(chǎn)地共16批半枝蓮樣品中，葉的平均占比為16.1%，在此基礎(chǔ)上下浮20%，得到12.88%，其中，安徽壽縣、山東平邑、河南泌陽(yáng)、河南信陽(yáng)、河南瓦崗和竹溝鎮(zhèn)6 個(gè)產(chǎn)地的葉的比例低于12.88%。

表4 不同產(chǎn)地半枝蓮莖葉比數(shù)據(jù)/%

2.4 不同產(chǎn)地半枝蓮的各指標(biāo)測(cè)定結(jié)果不同產(chǎn)地16批半枝蓮樣品的總黃酮、野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素和芹菜素的含量測(cè)定結(jié)果見表5。其中，河南泌陽(yáng)和河南竹溝鎮(zhèn)的總黃酮含量不合格，山東平邑和河南瓦崗鎮(zhèn)的野黃芩苷含量不合格，河南泌陽(yáng)的總黃酮和野黃芩苷指標(biāo)均不合格，分析其原因，關(guān)聯(lián)該樣品中葉的比例可知，山東平邑、河南泌陽(yáng)、河南竹溝三個(gè)產(chǎn)地的葉的比例分別為3.8%、2.9%、9.0%，相對(duì)于其他產(chǎn)地的葉的比例較低，葉子的比例較低從而導(dǎo)致了半枝蓮藥材質(zhì)量不合格。

表5 不同產(chǎn)地半枝蓮含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

半枝蓮經(jīng)人工挑選，將其按莖、葉、花、果、種子進(jìn)行區(qū)分，由于干品半枝蓮花、種子量較少，且花與葉子較難區(qū)分，因此本次研究?jī)H對(duì)半枝蓮地上部分全草、莖、葉、果進(jìn)行質(zhì)量比較。

通過分析比較發(fā)現(xiàn)，半枝蓮不同藥用部位中葉子的主要指標(biāo)成分含量明顯高于其他藥用部位，其次是全草用藥，該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［11-12］。因此建議半枝蓮在開花期葉子茂盛時(shí)采收為最佳，該時(shí)期半枝蓮綜合質(zhì)量最高［13-15］，同時(shí)切制加工、運(yùn)輸及貯藏保管過程中應(yīng)防止葉的損失。

本研究以多成分含量和浸出物含量為指標(biāo)，首次采用灰色關(guān)聯(lián)度法［16-19］綜合評(píng)價(jià)半枝蓮不同藥用部位的質(zhì)量，多角度客觀評(píng)價(jià)了不同藥用部位的半枝蓮樣品內(nèi)在質(zhì)量，綜合評(píng)價(jià)半枝蓮葉的質(zhì)量最高，為半枝蓮的綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)提供新的分析方法。

4 結(jié)論

本研究根據(jù)不同產(chǎn)地半枝蓮含量測(cè)定結(jié)果結(jié)合其對(duì)應(yīng)的莖葉比數(shù)據(jù)，葉比例低者對(duì)應(yīng)的總黃酮和野黃芩苷等指標(biāo)成分含量相對(duì)較低，甚至出現(xiàn)不合格。因此，在半枝蓮的生產(chǎn)、運(yùn)輸及儲(chǔ)存各環(huán)節(jié)均應(yīng)控制好葉的比例，防止葉子損失影響產(chǎn)品質(zhì)量。根據(jù)研究結(jié)果，建議對(duì)半枝蓮藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中葉的比例進(jìn)行限度規(guī)定，即不得少于12.0%，從而可以更好地控制其質(zhì)量。本研究首次在半枝蓮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中確定了不同部位的占比，為半枝蓮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加控制葉的比例提供依據(jù)，從而較好地控制該品種的質(zhì)量。