崔敏 郭新璞 伯鈺 邢翔

摘 要：目的：建立一種高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉和安賽蜜的分析方法。方法：樣品經(jīng)超聲提取，沉淀蛋白，高速離心后，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，上機(jī)測(cè)定。流動(dòng)相為甲醇和20 mmol/L乙酸銨溶液，等度洗脫，經(jīng)ZORBAX SB-C18色譜柱分離，于230 nm波長(zhǎng)下紫外檢測(cè)器檢測(cè)。結(jié)果：5種添加劑在15 min內(nèi)能很好的分離，濃度在1.00～150 mg/L范圍內(nèi)線性很好（R2>99.99%）;平均加標(biāo)回收率為83.0%～99.9%，精密度為0.06%～5.47%;方法的檢出限（S/N=3）和定量限（S/N=10）分別為0.221～1.15 mg/kg、0.736～3.82 mg/kg;方法間比對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果呈現(xiàn)高度一致性。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)單易操作，準(zhǔn)確可靠，能夠滿足醬腌菜中常用防腐劑和甜味劑的檢驗(yàn)需要。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;醬腌菜;防腐劑;甜味劑

醬腌菜在加工過(guò)程中，一般會(huì)添加防腐劑和甜味劑，防腐劑用來(lái)保持食品原有品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，防止由微生物引起的腐敗變質(zhì)、以延長(zhǎng)食品保質(zhì)期，甜味劑能夠增強(qiáng)產(chǎn)品口味、增加食欲[1-2]?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）對(duì)醬腌菜中允許使用的防腐劑和甜味劑的種類和限量有明確的規(guī)定，其中常用防腐劑有苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸，常用的甜味劑有糖精鈉和安賽蜜[3]。苯甲酸和山梨酸能有效抑制微生物的生長(zhǎng)，食用超標(biāo)會(huì)影響人體骨骼生長(zhǎng)，而且會(huì)對(duì)肝臟功能和腎功能產(chǎn)生不良影響。過(guò)量攝入脫氫乙酸會(huì)影響人體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)[4-7]。人工合成甜味劑糖精鈉和安賽蜜在人體內(nèi)不易被代謝吸收，過(guò)量攝入會(huì)降低腸胃消化吸收能力，存在致癌致畸的風(fēng)險(xiǎn)，危害人體健康[8-9]。目前這5種添加劑的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法有GB 5009.140-2003、GB 5009.28-2016、GB 5009.121-2016[10-12]，因其前處理過(guò)程、檢測(cè)條件各有差異，食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)在檢驗(yàn)過(guò)程中，按照國(guó)標(biāo)檢驗(yàn)，存在效率低、重復(fù)操作、浪費(fèi)資源的問(wèn)題。本研究建立了高校液相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中常用的防腐劑和甜味劑的檢測(cè)方法，縮短了檢測(cè)周期，節(jié)約了資源，提高了工作效率，滿足了試驗(yàn)室大批量樣品的檢測(cè)需求和食品安全監(jiān)督抽檢的實(shí)效性要求。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀（Agilent 1260型，配紫外檢測(cè)器）;C18色譜柱（ZORBAX SB-C18），安捷倫;電子分析天平（AR224CN，±0.000 1 g），上海天平儀器廠;高速冷凍離心機(jī)（CF16RXⅡ），日本日立;渦旋混合器（Vortex I），IKA;超純水系統(tǒng)（MOL PW500EDI），重慶摩爾水處理設(shè)備有限公司;超聲波發(fā)生器（KQ-300TDB），昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 試劑與材料

苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、安賽蜜有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（濃度均為1 000 mg/L），壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。甲醇（色譜純），歐普森;乙酸銨（優(yōu)級(jí)純），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;甲酸（色譜純）、氨水（色譜純）、亞鐵氰化鉀（色譜純）、乙酸鋅（色譜純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司;水系針式過(guò)濾器（PES，0.22 μm），天津科技發(fā)展有限公司;塑料離心管，NEST;試驗(yàn)用水符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。學(xué)生榨菜（醬腌菜），四川省味聚特食品有限公司;小米辣（醬腌菜），河北三湘妹食品有限公司;野山椒（醬腌菜），河北隆邦食品工業(yè)有限公司;香脆蘿卜（醬腌菜），臨沂市建友食品有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理 準(zhǔn)確稱取約5 g（精確到0.001 g）試樣于50 mL具塞離心管中，加水約10 mL，渦旋混勻，水浴超20 min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL，混勻，于10 000 r/min離心5 min，將水相轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加水重復(fù)提取1次，用水定容至刻度，混勻。上清液過(guò)0.22 μm水系濾膜，上機(jī)測(cè)定。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液 空白基質(zhì)：取5 g去離子水與樣品同時(shí)前處理，上清過(guò)0.22 μm濾膜，作為空白基質(zhì)。混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別準(zhǔn)確吸取濃度均為1 000 mg/L的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用空白基質(zhì)逐級(jí)稀釋質(zhì)量濃度分別為1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100、150 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

1.4 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18（StableBond Analytical 4.6×150mm 5-Micron）;柱溫為25℃;進(jìn)樣量為10 μL;流動(dòng)相為甲醇+20 mmol/L、乙酸銨溶液=5+95;流速為1.0 mL/min;等度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 波長(zhǎng)選擇

苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、安賽蜜在紫外波長(zhǎng)范圍為200～400 nm均有吸收[13]，參照GB 5009.28-2016;苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，參照GB 5009.121-2016;脫氫乙酸的檢測(cè)波長(zhǎng)為293 nm，參照GB 5009.140—2003;安賽蜜的檢測(cè)波長(zhǎng)為214 nm，參照史立學(xué)等[14]選擇在254 nm處同時(shí)對(duì)功能性飲料中 13 種食品添加劑進(jìn)行分析。本研究將50 mg/L的5種添加劑的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液分別在214、230、254、293 nm的波長(zhǎng)處檢測(cè)分析，將檢測(cè)結(jié)果疊加比對(duì)。圖1結(jié)果顯示，5種添加劑在15 min內(nèi)能夠很好地分離，相互之間不會(huì)造成定性干擾，且在230 nm的信號(hào)強(qiáng)度最優(yōu)，因此本試驗(yàn)選擇230 nm波長(zhǎng)檢測(cè)。

2.2 校準(zhǔn)曲線線性

質(zhì)量濃度均為 1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100、150 mg/L的5種添加劑的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，上機(jī)檢測(cè)，進(jìn)樣濃度由低到高，結(jié)果經(jīng)數(shù)據(jù)分析，以目標(biāo)物濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2）。苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸和安賽蜜的線性回歸方程分別為式（1）～（5），R2均大于99.99%表現(xiàn)為很好的線性關(guān)系。

Y=31.6 786 207X-1.7 089 306（1）

Y=35.5 265 701X+5.4 533 326（2）

Y=56.1 886 702×X+8.6 061 309（3）

Y=22.1 737 026×X+3.3 946 244（4）

Y=52.8 355 199×X-52.480 104（5）

2.3 回收率和精密度

選取5種添加劑均為陰性的醬腌菜（學(xué)生榨菜），進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)?？瞻讟悠分蟹謩e加入5、20、80 mg/L 3個(gè)水平的化合物，進(jìn)行6平行試驗(yàn)，計(jì)算平均回收率和精密度。表1結(jié)果顯示，5種化合物的平均回收率在83.0%～99.9%，精密度范圍為0.06%～5.47%，該方法的回收率和精密度均能滿足檢測(cè)需求。

2.4 檢出限和定量限

5 mg/L的5種添加劑的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液上機(jī)測(cè)定其信噪比（S/N），扣除基線后，以信噪比S/N=3時(shí)對(duì)應(yīng)的含量為檢出限，信噪比S/N=10時(shí)對(duì)應(yīng)的含量為定量限，表2結(jié)果顯示，安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的檢出限和定量限，均低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.140-2003、GB 5009.28-2016和GB 5009.121-2016中規(guī)定的檢出限和定量限，因此該方法檢出限和定量限都能滿足檢測(cè)需求。

2.5 檢測(cè)方法比對(duì)

選取3種不同品牌的市售醬腌菜（小米辣、野山椒、香脆蘿卜），采用該方法和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法檢驗(yàn)分析。表3結(jié)果顯示，安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)高度一致性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，而且該方法與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)相比更加便捷高效。

3 結(jié)論

該試驗(yàn)建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中常用防腐劑和甜味劑的檢測(cè)方法，優(yōu)化了標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制方法，空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，能更準(zhǔn)確地對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行定性，5種添加劑在15 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)快速分離檢測(cè)，方法便捷簡(jiǎn)單高效，回收率和精密度高，且方法比對(duì)結(jié)果呈高度一致性，可以用于同時(shí)測(cè)定醬腌菜中的安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸。

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Simultaneous Determination on Commonly Used Preservatives and Sweeteners in Pickles by HPLC

CUI Min1，3，GUO Xin-pu2，BO Yu1，XING Xiang3

（1Rongcheng Inspection and Testing Center of Shandong Province，Rongcheng 264300，China;2Food and Drug Testing Center of Shandong Province，Weihai 264210，China;3 Industrial Technology Research Institute of Shandong University，Weihai 264209，China）

Abstract：Objective To establish a kind of method for the simultaneous determination of benzoic acid，sorbic acid，dehydroacetic acid，saccharin sodium and acesil in pickles by high performance liquid chromatography （HPLC）.Method The samples were extracted by ultrasonic，protein deposition，high-speed centrifugation，and filtered through 0.22μm membrane，then samples were separated on a ZORBAX SB-C18 chromatographic column with isocratic elution using methanol and 20 mmol/L ammonium acetate solution as the mobile phase，detected by HPLC ultraviolet detector at 230 nm wavelength.Result Totally 5 kinds of additives could be separated well within 15 minutes，and showed good linearity in the range of 1～150 mg/L（R2>99.99%）.The average recovery of samples ranged from 83.0% to 99.9%，and precisions were 0.06%～5.47%，detection limits were 0.221～1.15 mg/kg and quantitative limits were 0.736～3.82 mg/kg.Results of data comparison between methods were highly consistent.Conclusion This method is simple，accurate and reliable，which is suitable for the simultaneous detection of commonly used preservatives and sweeteners in pickles.

Keywords：HPLC;pickle;preservative;sweetener

基金項(xiàng)目：山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（項(xiàng)目編號(hào)：2019GSF109007）。

作者簡(jiǎn)介：崔敏（1985— ），女，碩士，中級(jí)工程師，研究方向：食品質(zhì)量與安全。

通信作者：邢翔（1982— ），男，碩士，高級(jí)工程師，研究方向：應(yīng)用微生物技術(shù)與化學(xué)分析。