韓雨薇 王晨辰 袁冠前 梁國(guó)標(biāo) 李曉明

北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016

癲癇是大腦神經(jīng)元異常放電導(dǎo)致大腦功能障礙的一種慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，中國(guó)現(xiàn)有癲癇患者近千萬(wàn)［1］。癲癇反復(fù)發(fā)作易引起腦白質(zhì)結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致患者出現(xiàn)不同程度的認(rèn)知功能障礙［2］。認(rèn)知障礙是癲癇最常見的并發(fā)癥，約80%的癲癇患者存在認(rèn)知功能障礙，臨床主要表現(xiàn)為注意力下降、記憶力減退、語(yǔ)言障礙、視覺感知缺失等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［3-5］。找到影響癲癇患者認(rèn)知障礙的可能危險(xiǎn)因素并及時(shí)做出早期臨床干預(yù)，提高其診斷率和治療率尤為重要。癲癇發(fā)作是神經(jīng)元異常和快速放電引起的，這與發(fā)育異常、抑制性和興奮性神經(jīng)遞質(zhì)之間的平衡紊亂或細(xì)胞外K+水平的改變有關(guān)。載脂蛋白E（apolipoprotein E，APOE）參與這些過(guò)程的調(diào)控，在癲癇發(fā)作中起關(guān)鍵作用［6］。APOE基因多態(tài)性與認(rèn)知功能減退密切相關(guān)，在老年人群和帕金森病患者中APOE*ε4等位基因攜帶者認(rèn)知功能方面的表現(xiàn)比非攜帶者差［7-9］。APOE等位基因與癲癇患者認(rèn)知功能的相關(guān)性方面仍缺乏研究。

本研究通過(guò)檢測(cè)癲癇患者的APOE 基因表型和認(rèn)知功能評(píng)分，探討APOE等位基因?qū)Πd癇患者認(rèn)知功能的影響，為臨床治療提供依據(jù)，從而改善癲癇患者的生活質(zhì)量。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入2021-01—2022-07 在中國(guó)人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)外科就診并確診的癲癇患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)體格檢查、臨床評(píng)估包括腦電圖、MRI 和詳細(xì)病史確診為癲癇。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）惡性腫瘤、甲狀腺或甲狀旁腺疾病、肝或腎衰竭等嚴(yán)重身體疾病者；（2）有創(chuàng)傷性腦損傷、腦腫瘤、腦血管病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；（3）酗酒或服用影響情緒或神經(jīng)系統(tǒng)的藥物者；（4）癲癇發(fā)病前已有認(rèn)知功能障礙者；（5）認(rèn)知功能評(píng)估不完整者。共納入72例癲癇患者，男46例，女26例，年齡16～60歲。本研究通過(guò)中國(guó)人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（2021-135號(hào)），并獲得所有參與者知情同意。

1.2 APOE 基因分型收集患者外周靜脈血（含EDTA 抗凝管），充分混勻后分裝保存于—20 ℃冰箱中。使用APOE基因檢測(cè)試劑盒（上海Baio技術(shù)有限公司，中國(guó)上海），PCR 擴(kuò)增操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。將基因擴(kuò)增產(chǎn)物孵育在基因芯片上，經(jīng)Baio R-Hyb全自動(dòng)雜交儀（上海Baio技術(shù)有限公司，中國(guó)上海）進(jìn)行雜交顯色反應(yīng)，BaiO BE-2.0基因芯片讀取器（上海Baio 技術(shù)有限公司，中國(guó)上海）進(jìn)行基因分型分析。

1.3 認(rèn)知功能評(píng)估所有研究對(duì)象均應(yīng)用修訂版Addenbrooke 認(rèn)知評(píng)估量表（Addenbrooke cognitive examination，ACE-R）評(píng)估認(rèn)知功能。該量表涵蓋6個(gè)認(rèn)知領(lǐng)域的評(píng)估，包括定位和注意力（18分）、記憶力（26分）、語(yǔ)言流利度（14分）、語(yǔ)言（26分）、視覺空間和感知能力（16 分），共21 項(xiàng)認(rèn)知測(cè)試，總分100分。評(píng)分越高表示認(rèn)知功能越好。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)。APOE基因頻率和等位基因頻率等計(jì)數(shù)資料各組比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 APOE基因分布頻率共檢測(cè)72例癲癇患者外周血APOE 基因分型、APOE 等位基因和基因型分布頻率，分布6 種基因型，分別為ε2/ε2、ε2/ε3、ε2/ε4、ε 3/ε3、ε3/ε4、ε4/ε4，其中ε3/ε3 是最常見的基因型，為32 例，占51.39%，其次是ε3/ε4 基因型，為20 例，占27.78%。ε2/ε2（2 例）和ε2/ε4（1 例）基因表型較少，分別占2.78%和1.39%。APOE*ε3 是最常見的等位基因，所占頻率為70.83%，其次是APOE*ε4 等位基因，所占頻率為20.14%。見表1。

表1 APOE基因型及等位基因分布頻率 ［例（%）］Table 1 APOE genotype and allele distribution frequency［n（%）］

2.2 2組患者基本資料比較APOE*ε2、ε3、ε4各等位基因攜帶者與非攜帶者進(jìn)行臨床資料比較，結(jié)果顯示，在性別、年齡、發(fā)病年齡、病程、婚姻情況方面，APOE*ε2、ε3、ε4各等位基因攜帶者與非攜帶者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2～4。

表2 APOE*ε2等位基因與癲癇患者基本資料的分析Table 2 Analysis of APOE*ε2 allele and basic data of epilepsy patients

表3 APOE*ε3等位基因與癲癇患者基本資料分析Table 3 Analysis of APOE*ε3 allele and basic data of epilepsy patients

表4 APOE*ε4等位基因與癲癇患者基本資料分析Table 4 Analysis of APOE*ε4 allele and basic data of epilepsy patients

2.3 APOE*ε2、ε3、ε4 等位基因與認(rèn)知功能障礙的關(guān)系比較APOE 不同等位基因?qū)Πd癇患者的認(rèn)知功能的影響（表5），結(jié)果顯示，APOE*ε2或ε3等位基因攜帶者與非攜帶者ACE-R 認(rèn)知功能評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），而APOE*ε4 等位基因攜帶者的ACE-R 認(rèn)知功能評(píng)分顯著低于APOE*ε4 等位基因非攜帶者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本研究人群中攜帶ε4 等位基因的癲癇患者ACE-R 認(rèn)知功能評(píng)分最低，其次是ε3和ε2等位基因，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表6。

表5 APOE*ε2、ε3、ε4等位基因與癲癇患者認(rèn)知功能的關(guān)系Table 5 Association of APOE*ε2，ε3，ε4 alleles with cognitive function in patients with epilepsy

表6 APOE*ε2、ε3、ε4等位基因與癲癇患者認(rèn)知功能的關(guān)系 （±s）Table 6 Association of APOE*ε2，ε3，ε4 alleles with cognitive function in epilepsy patients （±s）

表6 APOE*ε2、ε3、ε4等位基因與癲癇患者認(rèn)知功能的關(guān)系 （±s）Table 6 Association of APOE*ε2，ε3，ε4 alleles with cognitive function in epilepsy patients （±s）

量表ACE-R ε2攜帶者（n=11）86.45±8.99 ε3攜帶者（n=63）83.21±12.83 ε4攜帶者（n=29）78.24±12.25 F值2.363 P值0.099

3 討論

認(rèn)知障礙在癲癇起病初期已存在，約80%的癲癇患者存在注意力、記憶力和語(yǔ)言等認(rèn)知損害［10-15］，臨床治療時(shí)應(yīng)提高對(duì)癲癇患者認(rèn)知功能的關(guān)注。APOE 是一種參與全身脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝的糖蛋白，包含3種蛋白亞型ε2、ε3和ε4［11，16-20］。存在APOE*ε4等位基因時(shí)，大腦修復(fù)損傷和形成新突觸的能力受損［12-13，21-26］，這是由于APOE*ε等位基因促進(jìn)腦組織中β淀粉樣蛋白（β-amyloid，Aβ）的沉積，而大腦中高表達(dá)的Aβ可導(dǎo)致癲癇樣活動(dòng)和認(rèn)知障礙［14-15，27-32］。GOURAS等［16］報(bào)道APOE*ε4等位基因促進(jìn)癲癇患者腦內(nèi)Aβ的累積。APOE基因型與老年人群和帕金森患者的認(rèn)知功能障礙相關(guān)，APOE*ε4 等位基因攜帶者認(rèn)知功能與非攜帶者之間存在顯著差異［7，9，33-40］。目前APOE 基因型與癲癇患者認(rèn)知功能的相關(guān)性方面還缺乏研究。

本研究利用基因芯片雜交技術(shù)對(duì)72例癲癇患者進(jìn)行基因型和等位基因分布的分析，并運(yùn)用修訂版Addenbrooke 量表評(píng)估患者認(rèn)知功能?；颊叩幕举Y料，如性別、年齡、發(fā)病年齡、病程和婚姻情況在APOE*ε2、ε3 和ε4 等位基因分布頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。APOE 3 種等位基因中唯有ε4 等位基因與癲癇患者認(rèn)知功能相關(guān)，攜帶ε4 等位基因的癲癇患者比非攜帶者的認(rèn)知功能差，APOE 3種等位基因中攜帶ε4 等位基因的癲癇患者認(rèn)知功能評(píng)分最低，表明APOE*ε4等位基因?qū)Πd癇患者認(rèn)知功能具有顯著影響［41-45］。由于研究的人群樣本量較小，具有一定的局限性，還需要更大樣本量驗(yàn)證APOE*ε4 等位基因與癲癇患者認(rèn)知功能的關(guān)系。

APOE*ε4等位基因攜帶與否與癲癇患者認(rèn)知功能有相關(guān)性［46-50］，攜帶APOE*ε4 等位基因的癲癇患者認(rèn)知功能比非攜帶患者更差。APOE*ε4等位基因可作為判斷癲癇患者認(rèn)知障礙的危險(xiǎn)因素，為臨床上盡早評(píng)估癲癇患者的認(rèn)知狀況并及早進(jìn)行臨床干預(yù)，最大程度減少認(rèn)知損害提供依據(jù)。