趙 霞 李玉春 葛付存 杜潤(rùn)孜 張小靜

（1.山東百味堂中藥飲片有限公司 山東濟(jì)南 250101；2.濟(jì)南護(hù)理職業(yè)學(xué)院 山東濟(jì)南 250101）

柴胡為多年生草本植物,以干燥根入藥,為大宗常用中藥材。近年來(lái)，隨著柴胡種植面積的不斷增加，重茬種植導(dǎo)致連作障礙現(xiàn)象逐年加重，根腐病、根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)病等土傳病害發(fā)生嚴(yán)重。相關(guān)統(tǒng)計(jì)表明，重茬種植柴胡一般地塊發(fā)病率在10%～20%，重茬種植3年以上地塊，根腐病的發(fā)生率在50%以上，導(dǎo)致植株生長(zhǎng)發(fā)育受阻，造成減產(chǎn)甚至絕收。加上生產(chǎn)中不合理使用化肥和化學(xué)農(nóng)藥，使得土壤及藥材中的農(nóng)藥殘留及有害元素含量超標(biāo)，不僅危害環(huán)境和人類(lèi)健康，而且大幅度降低藥材的產(chǎn)量和產(chǎn)品質(zhì)量，由此引發(fā)的藥材產(chǎn)品安全問(wèn)題已成為全社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)。為有效解決柴胡栽培生產(chǎn)過(guò)程中出現(xiàn)的連作障礙難題，篩選培育優(yōu)良抗病品種是最經(jīng)濟(jì)有效的方法。本研究對(duì)濟(jì)南地區(qū)道地柴胡及國(guó)內(nèi)引進(jìn)的柴胡品種進(jìn)行抗病性鑒定，篩選優(yōu)良抗病品種，開(kāi)展柴胡規(guī)范化高產(chǎn)種植技術(shù)研究，以期為柴胡無(wú)公害生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌樣：采用濟(jì)南市章丘區(qū)曹范鄉(xiāng)感病的柴胡病株。鑒定材料：中柴1號(hào)、中柴2號(hào)、中柴3號(hào)（均為北柴胡）、川北柴1號(hào)、中紅柴1號(hào)（狹葉柴胡）、川紅柴1號(hào)（狹葉柴胡）、濟(jì)柴 1號(hào)、濟(jì)柴2號(hào)（仿野生）。其中，川北柴1號(hào)為感病對(duì)照（CK）。

1.2 試驗(yàn)處理

試驗(yàn)安排在濟(jì)南市章丘區(qū)曹范山東百味堂中藥飲片有限公司試驗(yàn)基地進(jìn)行，選擇種植2年以上地塊，于2019年4月播種，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，每個(gè)品種分別設(shè)置3次重復(fù)，采集自然生長(zhǎng)的柴胡植株，于子葉展平期進(jìn)行苗期人工接種抗病性鑒定。2019年8～9月在每個(gè)區(qū)組處，分別選取植株30株，測(cè)定植株高度，調(diào)查發(fā)病情況。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 苗期抗病性接種鑒定

（1）接種液的制備。從章丘曹范柴胡種植區(qū)田間，采集自然發(fā)病的早期病葉，置于陶瓷盤(pán)內(nèi)，24℃左右室溫保濕16 h。將培養(yǎng)的新鮮孢子在燒杯中制成孢子懸浮液，濃度為3 000～5 000個(gè)孢子/mL。接種前測(cè)定孢子活力，孢子萌芽率在70%以上為有效。

（2）接種方法。利用鑒別寄主，采用菌土置入法接種，每個(gè)供試柴胡品種接種30株，接種60 d后調(diào)查各品種發(fā)病情況。采用噴霧接種法，于3片真葉期接種。用手持小型噴霧器將接種液均勻地噴于柴胡的葉片上，移入室內(nèi)溫度22～25℃的溫室內(nèi)保濕12～16 h，后轉(zhuǎn)入白天25～28℃、夜晚 18℃左右的溫室內(nèi)正常管理。

（3）苗期抗病性評(píng)價(jià)。接種10～15 d后待大部分品種發(fā)病進(jìn)行第1次調(diào)查，以后隔天調(diào)查發(fā)病情況，以感病對(duì)照（川北柴1號(hào)）發(fā)病率50%以上為準(zhǔn)，對(duì)供試柴胡品種進(jìn)行苗期抗病性評(píng)價(jià)，每品種30株，調(diào)查發(fā)病情況，記錄病葉數(shù)及病級(jí)。發(fā)病級(jí)別：0級(jí)，無(wú)病癥；1級(jí)，接種點(diǎn)出現(xiàn)輕微壞死斑，直徑小于0.5 cm； 2級(jí)，壞死斑明顯，直徑 0.5～1.0 cm；3級(jí)，壞死斑面積占葉面積的2/3以下；4級(jí)，壞死斑面積占葉面積的2/3以上以致變黃干枯。病情指數(shù)=∑（株數(shù)×病級(jí)數(shù)）/（總株數(shù)×最高級(jí)數(shù)）×100。

1.3.2 田間發(fā)病率調(diào)查 2019年8～9月在種植試驗(yàn)每個(gè)區(qū)組處，分別選取30株植株，測(cè)定植株高度，調(diào)查發(fā)病情況，測(cè)定發(fā)病率，篩選出抗病品種。發(fā)病率（%）=發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100。

1.3.3 產(chǎn)量和品質(zhì)比較 2020－2021年在濟(jì)南歷城區(qū)柳埠鎮(zhèn)、章丘區(qū)曹范鄉(xiāng)試驗(yàn)基地進(jìn)行品種比較和生產(chǎn)試驗(yàn)，于當(dāng)年4月中下旬分別播種濟(jì)柴1號(hào)和中柴2號(hào)（CK），按照相同方法進(jìn)行田間管理，第2年9～10月采收。每品種設(shè)置3次重復(fù)，隨機(jī)選取30株，分別計(jì)算產(chǎn)量，測(cè)定藥材品質(zhì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 苗期人工接種抗病性

2020年4月自章丘曹范試驗(yàn)基地采集菌源，接種發(fā)病后進(jìn)行調(diào)查，以后隔天調(diào)查，記錄病葉數(shù)及病級(jí)。由表1可知，濟(jì)柴1號(hào)葉斑病病情指數(shù)為10.2；根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)病病情指數(shù)為10.7，表現(xiàn)為抗病；其他品種感病指數(shù)在20%以上。試驗(yàn)結(jié)果表明，濟(jì)柴1號(hào)柴胡苗期抗病性強(qiáng)，具有高抗病能力。

表1 柴胡不同品種苗期葉斑病、根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)病抗性鑒定結(jié)果

2.2 田間發(fā)病率

由表2可知，濟(jì)柴1號(hào)枯萎病發(fā)病率為6.67%，根腐病發(fā)病率為10%，其他品種發(fā)病率均在20%以上。試驗(yàn)結(jié)果表明，濟(jì)柴1號(hào)生長(zhǎng)期植株具有較強(qiáng)的抗病能力。

表2 柴胡品種田間病發(fā)率試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果

2.3 產(chǎn)量品質(zhì)比較

2020-2021年在濟(jì)南章丘市曹范鄉(xiāng)山東百味堂中藥飲片公司試驗(yàn)基地進(jìn)行春、秋季品種比較試驗(yàn)，2020年3月下旬播種濟(jì)柴1號(hào)和川紅柴1號(hào)(CK），2021年9月收獲。試驗(yàn)隨機(jī)區(qū)組排列，3次重復(fù)，每小區(qū)面積10 m2，每個(gè)品種分別種植30株，分別計(jì)算產(chǎn)量，測(cè)定藥材品質(zhì)（柴胡皂苷含量）。

由產(chǎn)量測(cè)定結(jié)果（表3）可知，2020年濟(jì)柴1號(hào)平均畝產(chǎn)量273.7 kg，中柴2號(hào)平均畝產(chǎn)量223.9 kg，濟(jì)柴1號(hào)比對(duì)照增產(chǎn)22.2%；2021年濟(jì)柴1號(hào)平均畝產(chǎn)量292.4 kg，中柴2號(hào)平均畝產(chǎn)量215.3 kg，濟(jì)柴1號(hào)比對(duì)照增產(chǎn)35.8%，增產(chǎn)效果顯著。在山東省多點(diǎn)進(jìn)行了區(qū)域試驗(yàn)和生產(chǎn)試驗(yàn)，濟(jì)柴1號(hào)平均畝產(chǎn)量達(dá)到283.2 kg，產(chǎn)量和抗病性均高于當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)種植柴胡品種。2021年經(jīng)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部食品藥品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（濟(jì)南）檢驗(yàn)，濟(jì)柴1號(hào)柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量分別達(dá)到0.57%和0.61%，高于對(duì)照中柴2號(hào)皂苷含量（0.32%），超過(guò)2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定的柴胡皂苷含量0.3%的標(biāo)準(zhǔn)。

表3 柴胡品種產(chǎn)量品質(zhì)試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)引進(jìn)的柴胡品種對(duì)柴胡主要病害均有一定的抗性，但不同品種的抗病性存在差異，經(jīng)過(guò)苗期人工接種抗病性鑒定和田間病情發(fā)生率調(diào)查，結(jié)果表明，濟(jì)柴1號(hào)苗期葉斑病病情指數(shù)為10.2%；枯萎病田間發(fā)病率為6.67%，其他品種發(fā)病率均在20%以上。品種比較和生產(chǎn)試驗(yàn)結(jié)果表明，濟(jì)柴1號(hào)植株長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，平均畝產(chǎn)量達(dá)到283.2 kg。因此，濟(jì)柴1號(hào)植株生長(zhǎng)旺盛，抗枯萎病、根腐病、根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)病能力強(qiáng)，產(chǎn)量及有效成分柴胡皂苷含量均高于國(guó)內(nèi)其他柴胡品種，可作為山東省及濟(jì)南地區(qū)柴胡抗病品種及綠色無(wú)公害優(yōu)良品種生產(chǎn)推廣種植。由于試驗(yàn)采集的樣本較少，今后仍需繼續(xù)收集引進(jìn)國(guó)內(nèi)優(yōu)良柴胡品種資源進(jìn)行鑒定篩選，為柴胡優(yōu)良抗病品種的培育及綠色無(wú)公害中藥材生產(chǎn)提供理論依據(jù)。