旦慧文,王婷婷,張煥敏,朱 萍*

(1.中國(guó)人民解放軍海軍第九七一醫(yī)院 婦產(chǎn)科,山東 青島266000；2.青島市第八人民醫(yī)院 婦科,山東 青島276400)

宮頸癌目前臨床上采用手術(shù)、放化療治療，但治療后仍然存在如局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等[1]。本研究探討了干擾素基因刺激因子(STING)、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(KGFR)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在宮頸癌組織中的表達(dá)情況及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2015年10月至2018年6月期間中國(guó)人民解放軍海軍第九七一醫(yī)院保存的100例宮頸癌組織標(biāo)本為研究組，另外選擇50例子宮良性腫瘤切除的正常宮頸組織作為對(duì)照組。入選標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)診斷；②術(shù)前未接受放化療治療；③病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①并發(fā)嚴(yán)重的肝腎等臟器損傷者；②宮頸癌以外的其他惡性腫瘤患者；③嚴(yán)重的免疫系統(tǒng)疾病。2組患者基礎(chǔ)資料比較均無顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，見表1。

表1 2組基礎(chǔ)資料比較

1.2 方法

1.2.1STING檢測(cè) 應(yīng)用組織研磨法，對(duì)組織細(xì)胞中的RNA進(jìn)行提取，在無酶情況下向其中加入焦炭酸二乙酯，測(cè)定RNA水平，然后進(jìn)行基因擴(kuò)增，在Primer 5軟件中設(shè)計(jì)基因引物，正義引物：5’- CAAGGACCAACTACAACC- 3’，反義引物：5’-TGCCTCTTCTTTAATTG-3’。實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)擴(kuò)增，參數(shù)設(shè)置：48℃條件下45 min，94℃條件下2 min；94℃條件下0.5 min，58℃條件下1 min，68℃條件下2 min。共實(shí)施上述操作40個(gè)循環(huán)。待循環(huán)結(jié)束之后，于68℃條件下延伸7 min。

1.2.2KGFR及VEGF檢測(cè)方法 應(yīng)用免疫組化鏈酶卵白素-生物素復(fù)合體法(SABC法)，采用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)進(jìn)行顯色。采用陽性片與PBS代替一抗分別作為陽性與陰性對(duì)照，高倍鏡下對(duì)KGFR及VEGF蛋白表達(dá)情況進(jìn)行觀察，具體按照試劑盒上的說明書實(shí)施相應(yīng)操作。結(jié)果判定：隨機(jī)選擇5個(gè)觀察視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，當(dāng)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色時(shí)，則表示KGFR與VEGF表達(dá)陽性，當(dāng)陽性細(xì)胞占視野總數(shù)的30%以上，則可判定為陽性。

2 結(jié)果

2.1 2組STING、KGFR及VEGF陽性表達(dá)水平對(duì)比見表2。結(jié)果顯示：研究組STING、KGFR及VEGF陽性表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P均<0.01)。

表2 2組STING、KGFR及VEGF陽性表達(dá)水平比較

2.2 宮頸癌組織中STING、KGFR及VEGF表達(dá)與患者臨床病理特征之間的關(guān)系分析見表3。TNM分期越高、組織分化程度越低，宮頸癌組織中STING、KGFR及VEGF表達(dá)水平越高(P均<0.05)，但是與其他病理學(xué)特征(年齡、組織類型、肌層浸潤(rùn)程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)無顯著相關(guān)關(guān)系(P均>0.05)。

2.3 宮頸癌組織STING、KGFR及VEGF表達(dá)相關(guān)性分析見表4。經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，宮頸癌組織中STING、KGFR及VEGF表達(dá)，兩兩之間均存在顯著的正相關(guān)性(P均<0.05)。

2.4 宮頸癌組織STING、KGFR及VEGF與宮頸癌患者預(yù)后之間的關(guān)系分析見表5。宮頸癌組織STING、KGFR及VEGF陰性表達(dá)患者中位生存時(shí)間顯著高于陽性表達(dá)者(P均<0.05)。

表3 宮頸癌組織中STING、KGFR及VEGF表達(dá)與患者臨床病理特征之間的關(guān)系

表4 宮頸癌組織STING、KGFR及VEGF表達(dá)相關(guān)性

3 討論

STING是一種常見的跨膜蛋白，對(duì)下游信號(hào)傳導(dǎo)具有激活作用，能調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能[2]。本研究結(jié)果表明研究組STING表達(dá)量顯著高于對(duì)照組，分析其原因可能為cGAS能夠鑒別宮頸癌自身DNA分子，從而催化三磷酸腺苷(ATP)轉(zhuǎn)化成為環(huán)二核苷酸(cGAMP)，與STING相結(jié)合，通過對(duì)下游信號(hào)傳導(dǎo)起促進(jìn)作用，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞免疫耐受程度，進(jìn)而加快惡性腫瘤細(xì)胞增殖[3]。宮頸癌組織STING表達(dá)與TNM分期、組織分化程度具有相關(guān)性，而與其他病理性特征(年齡、組織類型、肌層浸潤(rùn)程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)無相關(guān)關(guān)系。上述結(jié)果提示宮頸癌臨床分期越高以及組織分化程度越低，宮頸癌組織中STING相對(duì)表達(dá)量越高。究其原因，可能為STING被激活之后，其分子學(xué)構(gòu)象出現(xiàn)變化，由原來分布于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體，招募TANK結(jié)合酶1，然后與轉(zhuǎn)錄因子干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF-3)之間相結(jié)合，使得IRF-3易位到細(xì)胞核之中，加速干擾素(IFN)等相關(guān)下游基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄，提高上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)基因的表達(dá)水平，并對(duì)局部免疫微環(huán)境予以抑制，導(dǎo)致更多的惡性腫瘤細(xì)胞發(fā)生“免疫性逃逸”，進(jìn)而使其大量增殖，促進(jìn)惡性腫瘤快速進(jìn)展[4]。由此，可推斷STING高表達(dá)，同宮頸癌病情進(jìn)展存在緊密關(guān)系。

表5 宮頸癌組織STING、KGFR及VEGF陽性與陰性表達(dá)患者生存情況比較

本研究通過免疫組化法研究KGFR在宮頸癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示：其在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率顯著升高，經(jīng)分析，KGFR在宮頸癌組織中的高表達(dá)，可能為KGFR陽性表達(dá)率升高可以誘使癌細(xì)胞發(fā)生生物學(xué)變化，提升癌細(xì)胞增殖以及浸潤(rùn)水平[5-6]。在免疫組化染色分析過程中，還發(fā)現(xiàn)KGFR在宮頸癌上皮細(xì)胞異性區(qū)域(癌細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核周圍)的染色較深，由此可推測(cè)KGFR可能會(huì)影響異型宮頸癌細(xì)胞。另外，與STING相同，KGFR陽性表達(dá)也只與宮頸癌患者臨床分期及組織分化程度相關(guān)，宮頸癌臨床分期越高，組織分化程度越低，KGFR陽性表達(dá)率越高。此結(jié)果提示：KGFR可對(duì)宮頸柱狀上皮細(xì)胞分化成熟水平產(chǎn)生明顯的影響，另外KGFR陽性表達(dá)率升高，還可加深宮頸癌細(xì)胞對(duì)周邊正常組織的浸潤(rùn)程度，從而促進(jìn)患者病情進(jìn)展。

VEGF是一種反映機(jī)體組織血管形成以及組織增生的因子。與STING及KGFR相同，宮頸癌組織VEGF陽性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組，且表達(dá)率越高，宮頸癌的惡性程度也越高，出現(xiàn)盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較大。此外，本研究結(jié)果還顯示：宮頸癌組織中STING、KGFR與VEGF陰性表達(dá)患者3年生存率均顯著高于陽性表達(dá)患者，提示上述3種因子可能為預(yù)判宮頸癌患者預(yù)后狀況的重要分子標(biāo)志物。

綜上所述，STING、KGFR及VEGF在宮頸癌組織中表達(dá)水平較高，與患者臨床分期、組織分化程度呈顯著相關(guān)性，對(duì)患者預(yù)后狀況可能具有一定的預(yù)判功能，在宮頸癌早期診斷中具有一定的參考價(jià)值。