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        HPLC法同時測定楊林肥酒中4種成分

        2022-03-24 11:54:40王月德崔慶德安艷蘇畢秋左張順平
        現(xiàn)代食品 2022年3期
        關(guān)鍵詞:楊林丁香酚桂皮

        ◎ 王月德,崔慶德,安艷蘇,畢秋左,張順平,錢 洲

        (曲靖市食品藥品檢驗檢測中心,云南 曲靖 655000)

        楊林肥酒,中國唯一現(xiàn)存的綠酒,也是云南首屈一指的有著悠久歷史文化和豐富歷史內(nèi)涵的名酒,由楊林“裕寶號”釀酒商人陳鼎于清光緒六年(公元1880年)始創(chuàng),至今已有140余年歷史。楊林肥酒是一款綠色養(yǎng)生的保健酒,源自明代藥物學(xué)家蘭茂《滇南本草》中的“水酒十八方”,以楊林當(dāng)?shù)刈葬劦男∏拙茷榫苹?,甄選大棗、拐棗、陳皮、菊花、小茴香、丁香、肉桂和梔子等十余味名貴中藥材,加之從豌豆尖、青竹葉等綠色植物中所提取出的綠色精華,再配之蜂蜜及白砂糖,經(jīng)過黃金比例調(diào)配,得以呈現(xiàn)其“翠綠如玉,酒香醇厚,入口綿甜,酒體圓潤,生津雋永”的特有風(fēng)味。故楊林肥酒一經(jīng)問世,便廣受歡迎,而其具有的健胃、滋脾、潤肺、生津、補中益氣、增強心肌功能、促進新陳代謝、提高免疫力及降低血脂等功效[1-2]更是導(dǎo)致了人們對其推崇備至,清代詩人王迥為其寫下了“白玉瓶裝綠液漿,好酒應(yīng)留與人嘗。幾藏楊林終自飲,尤對空瓶嗅酒香”的贊美詩篇;世人也賦予其“楊林肥酒,天下獨有”的美譽。

        楊林肥酒的“肥”,“肥”在其所添加的十余種中藥材,“肥”在酒中所含有的葡萄糖、蛋白質(zhì)酵素、維生素、果糖和棗酸等營養(yǎng)成分,“肥”在其藥酒共融、養(yǎng)生健體。現(xiàn)代研究表明,釀酒所用原料中,大棗可安中、養(yǎng)脾、平胃氣、通九竅,主要含生物堿類、皂苷類、黃酮類、有機酸類及糖苷類等成分,具有調(diào)節(jié)免疫功能、抗腫瘤、抗氧化、修復(fù)肝損傷、抗疲勞等作用[2-3];拐棗能解酒毒,止渴除煩,主要含黃酮類、生物堿類、皂苷類以及有機酸、脂肪酸等成分,具有解酒、保肝、抗腫瘤、抗氧化、降血糖及免疫調(diào)節(jié)等功效[4];陳皮理氣健脾、燥濕化痰,主要含揮發(fā)油、黃酮類、香豆素類、生物堿類、檸檬苦素及微量元素等成分,具有理氣、保肝、鎮(zhèn)咳、抗氧化、抗腫瘤、抗炎及抗菌等生物活性[5];菊花散風(fēng)清熱、平肝明目、清熱解毒,主要含有黃酮類、揮發(fā)油、苯丙素類、萜類及氨基酸等成分,具有保肝、調(diào)節(jié)機體免疫力、抑菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤及降血糖等功效[6];小茴香理氣和胃、散寒止痛,主要含有揮發(fā)油、黃酮類、酚類、脂肪酸、氨基酸、生物堿類、糖苷類以及無機元素等成分,具有調(diào)節(jié)腸胃功能、降血糖和血脂、抗氧化、抗肝腎毒性、抗炎、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等積極作用[7];丁香溫中降逆、補腎助陽,主要成分為揮發(fā)油和三萜酸,具有抗菌、消炎、解熱鎮(zhèn)痛、抗氧化、健脾胃及麻醉等作用[8];肉桂補火助陽、引火歸元、散寒止痛、溫通經(jīng)脈,主要包括揮發(fā)油、黃酮類、黃烷醇及其苷類和多聚體類、萜類、木脂素類、酚酸類、香豆素類、脂肪酸類、多糖類以及皂苷類等成分,具有抗?jié)?、抗腹瀉、抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤及改善糖脂代謝等藥理作用[9];梔子瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒,主要含萜類、有機酸酯類、黃酮類、揮發(fā)油、多糖類及微量元素等化學(xué)成分,具有保肝利膽、降壓、降糖、調(diào)脂、保護胃功能、保護神經(jīng)、抗炎、抗氧化、抗疲勞及抗血栓等作用[10]。

        筆者查閱了有關(guān)文獻發(fā)現(xiàn),關(guān)于楊林肥酒的研究報道較少,僅有對其保健功能機理的研究探討以及對其生產(chǎn)工藝的優(yōu)化分析。焦少良等[11]利用中西醫(yī)機理對楊林肥酒能改善脾胃功能、提高免疫力功能以及降血脂功能進行了探討;孫龐等[12]通過小鼠高脂血癥模型發(fā)現(xiàn)楊林肥酒對脂質(zhì)代謝可能存在一定的調(diào)節(jié)作用,尤其是降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的作用;邵正等[13]比較分析了不同膜過濾技術(shù)在楊林肥酒除濁中的影響,發(fā)現(xiàn)精濾膜過濾技術(shù)能明顯改善酒液的澄清度,較好保留酒中總黃酮、總多糖活性成分含量,并能改善酒的色澤、風(fēng)味和保健功能,有利于提高楊林肥酒的質(zhì)量和穩(wěn)定性。然而,關(guān)于楊林肥酒中活性成分的分析卻未見報道。為此,本研究參照相關(guān)文獻,建立HPLC法對楊林肥酒中梔子苷、橙皮苷、桂皮醛和丁香酚含量進行同時測定,以期能為楊林肥酒的理論研究和質(zhì)量控制提供理論依據(jù)[14-15]。

        1 材料與方法

        1.1 儀器

        Agilent 1260型高效液相色譜儀-DAD紫外檢測器(美國安捷倫公司);METTLER TOLEDO MS205DU電子天平(梅特勒-托利多國際股份有限公司);BRAND移液器[普蘭德(上海)貿(mào)易有限公司];微孔濾膜(天津市津騰實驗設(shè)備有限公司,0.45 μm)。

        1.2 試劑

        供含量測定用梔子苷(批號:110749-201919,含量:97.1%)、橙皮苷(批號:110721-202019,含量:95.3%)、桂皮醛(批號:110710-201821,含量:99.6%)、丁香酚(批號:110725-201615,含量:99.3%)均由中國食品藥品檢定研究院提供;甲醇(色譜純,德國默克公司);乙醇(分析純,西隴科學(xué)股份有限公司);水為二次蒸餾水;供試品為市售楊林肥酒-隨心露酒(酒精度:48%vol,規(guī)格:400 mL/瓶,批號:191004、210203、20210601.ZY,生產(chǎn)日期:2019-10-31、2021-02-04、2021-06-22)。

        1.3 色譜條件

        色譜柱:依利特Hypersil ODS2 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:甲醇(A)-水(B),梯度洗脫(0~7 min,7%A→35%A;7~9 min,35%A→46%A;9~11 min,46%A;11~26 min,46%A→58%A;26~31 min,58%A→7%A);流速:1.0 mL·min-1;柱溫:30 ℃;檢測波長:230 nm;進樣量:15 μL。

        1.4 溶液的制備

        1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液

        精密稱取梔子苷、橙皮苷、桂皮醛、丁香酚對照品適量,分別加甲醇制成含梔子苷971.971 μg·mL-1、橙皮苷 114.360 μg·mL-1、桂皮醛 1 268.904 μg·mL-1、丁香酚1 391.193 μg·mL-1的對照品儲備液,再分別吸取上述儲備液適量,加50%乙醇制成分別含梔子苷97.179 1 μg·mL-1、橙皮苷 57.180 0 μg·mL-1、 桂 皮 醛40.604 9 μg·mL-1、丁香酚 139.119 3 μg·mL-1的混合對照品溶液。

        1.4.2 供試品溶液

        取供試品溶液搖勻,用0.45 μm微孔濾膜過濾。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 色譜條件的確認(rèn)

        2.1.1 流動相的選擇

        研究比較了乙腈-水作為流動相和甲醇-水作為流動相對各目標(biāo)成分分離效果的影響。結(jié)果表明,在使用乙腈-水作為流動相時,梔子苷峰與相鄰色譜峰的分離度始終難以達(dá)到分離要求,使用甲醇-水作為流動相時,各目標(biāo)成分峰與其相鄰色譜峰均能達(dá)到基線分離,故選擇甲醇-水作為流動相。相關(guān)色譜圖見圖1。

        圖1 各成分HPLC色譜圖

        2.1.2 檢測波長的選擇

        分別取梔子苷、橙皮苷、桂皮醛和丁香酚對照品溶液在200~500 nm范圍內(nèi)進行紫外掃描,發(fā)現(xiàn)梔子苷在238 nm波長處有最大吸收,橙皮苷在225 nm和283 nm波長處有最大吸收,桂皮醛在224 nm和290 nm波長處有最大吸收,丁香酚在230 nm和280 nm波長處有最大吸收。為兼顧對上述4種成分的同時測定,結(jié)合紫外掃描圖譜結(jié)果,經(jīng)過對不同波長的測定結(jié)果進行比較,最終選擇230 nm作為檢測波長。

        2.2 方法線性關(guān)系考察

        精密吸取“1.4.1”項下的混合對照品溶液0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL和1.5 mL,分別置于10 mL容量瓶中,用50%乙醇稀釋至刻度,搖勻,過濾,即得。濾液按“1.3”項下色譜條件分別進樣15 μL測定,記錄色譜圖,以對照品質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo),峰面積(y)為縱坐標(biāo)進行線性回歸,結(jié)果見表1。由表1可知,上述4種成分在各自濃度范圍內(nèi)均與自身峰面積呈良好的線性關(guān)系。

        表1 4種成分線性關(guān)系表

        2.3 方法精密度考察

        精密吸取“1.4.1”項下用0.45 μm微孔濾膜濾過的混合對照品溶液15 μL,按“1.3”項下色譜條件連續(xù)進樣6次,記錄峰面積,計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示,梔子苷、橙皮苷、桂皮醛和丁香酚峰面積的RSD分別為0.10%、0.26%、0.63%、0.25%(n=6),表明本方法精密度良好。

        2.4 方法穩(wěn)定性考察

        取“1.4.2”項下供試品溶液,分別在0 h、2 h、4 h、8 h、16 h、24 h、36 h和48 h時進樣15 μL,記錄峰面積并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示,梔子苷、橙皮苷、桂皮醛和丁香酚峰面積的RSD分別為0.28%、0.10%、0.64%、0.33%(n=6),表明樣品在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        2.5 方法重復(fù)性考察

        取樣品(批號210203)6份,分別按“1.4.2”項下方法制備供試品溶液,照“1.3”項下色譜條件進樣測定,記錄峰面積,計算出樣品中梔子苷、橙皮苷、桂皮醛、丁香酚的平均含量,RSD分別為0.45%、0.36%、0.43%、0.42%。結(jié)果表明,該方法重復(fù)性良好。

        2.6 方法準(zhǔn)確度考察

        精密量取已知含量的樣品(批號210203)6份,每份5.00 mL,置于10 mL容量瓶中,分別精密加入“1.4.1”下的混合對照品溶液各0.25 mL,用50%乙醇稀釋至刻度,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜過濾制成供試品溶液,在“1.3”項下色譜條件測定,計算回收率,結(jié)果見表2。

        表2 各成分回收率試驗結(jié)果表(n=6)

        2.7 樣品含量測定

        取3批樣品,按“1.4.2”項下方法制備供試品溶液,并按“1.3”項下色譜條件進樣測定,記錄峰面積,以峰面積計算樣品中各待測物質(zhì)的含量,結(jié)果見表3。

        表3 各成分含量測定結(jié)果表(n=3)

        3 結(jié)論與討論

        梔子苷作為梔子的有效成分之一,藥理作用廣泛,具有保肝利膽、保護胰腺組織、抗炎鎮(zhèn)痛、抗肺損傷、抗哮喘、降尿酸、降血糖、降血脂、抗老年癡呆、抗肝纖維化、腦缺血保護及抑制甲型H1N1流感病毒作用[16];陳皮中的橙皮苷則具有抗炎、抗氧化、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、減少腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)代謝以及預(yù)防心血管疾病等多種生物活性[17];桂皮醛作為肉桂揮發(fā)油中的主要成分,也具有廣泛的藥理作用,對神經(jīng)系統(tǒng)疾病、生殖系統(tǒng)疾病、心血管疾病、腫瘤疾病、糖尿病及肥胖等多種疾病均有一定的防治作用[18];丁香酚是丁香中的主要成分,有抗菌、麻醉、抗氧化、保護心臟、保護神經(jīng)細(xì)胞和抗病毒等多種生物活性[19]。本研究從楊林肥酒中檢測出上述4種活性成分的存在也間接為楊林肥酒的“肥”提供了一定的數(shù)據(jù)支撐。

        對含量測定結(jié)果進行分析發(fā)現(xiàn),不同生產(chǎn)日期的楊林肥酒中桂皮醛的含量差異不大,而與生產(chǎn)日期較晚一些的楊林肥酒相比,早期生產(chǎn)的楊林肥酒中梔子苷與丁香酚含量略低,橙皮苷的含量卻高出許多。筆者認(rèn)為,不同批次的楊林肥酒在生產(chǎn)時所使用原料質(zhì)量的參差不齊也許是造成該情況的原因之一。

        經(jīng)方法學(xué)考察驗證,本研究建立了同時測定楊林肥酒中梔子苷、橙皮苷、桂皮醛和丁香酚含量的高效液相色譜分析方法。該方法快速、高效、準(zhǔn)確,且流動相簡單,測試結(jié)果重復(fù)性好,可為楊林肥酒的質(zhì)量控制和研究提供理論依據(jù)。

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