王 梁，左楊瑾，林 麗 ，陳秋莉，陳碧艷，陳發(fā)欽 ，何 升△

(1.廣西出生缺陷防治基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西生殖健康與出生缺陷防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西百色 533000)

地中海貧血是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白合成抑制形成的慢性溶血性貧血[1]，也是全球分布最廣，累計(jì)人數(shù)最多的一種遺傳病，在中國(guó)好發(fā)于廣東、廣西、海南等沿海地區(qū)[2-5]，其中廣西地區(qū)攜帶率高達(dá)25%，是最高的一個(gè)地區(qū)[6]，因此，研究廣西地區(qū)地中海貧血基因的構(gòu)成比及分布情況，對(duì)其防控和治療有著重要的意義。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院2018年8月至2020年8月26 803例樣本，年齡0～81歲，其中男13 039例，女13 764例，均來(lái)自廣西各市縣。

1.2 方法

1.2.1常規(guī)篩查

所有樣本采用BC-6900血細(xì)胞分析儀和法國(guó)SEBIA公司Sebia Capillarys 2Flex Piercing血紅蛋白電泳進(jìn)行分析，血常規(guī)MCV<82 fL或MCH<27 pg，血紅蛋白電泳Hb A2<2.5或Hb A2>3.5或Hb F>4，或者出現(xiàn)異常條帶的患者為疑似地中海貧血患者，共26 803例進(jìn)一步進(jìn)行基因檢測(cè)。

1.2.2DNA提取

采用廈門至善DNA提取試劑盒，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

1.2.3基因檢測(cè)

采用深圳亞能生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的地中海貧血診斷試劑盒，用Gap-PCR方法檢測(cè)α珠蛋白基因常見(jiàn)的4種缺失：--SEA(東南亞缺失型)、-α3.7(右缺失型)、-α4.2(左缺失型)、--THAI(泰國(guó)缺失型)。PCR-KDB檢測(cè)β珠蛋白基因常見(jiàn)17種突變位點(diǎn)和α珠蛋白基因3種位點(diǎn)突變：-αCS點(diǎn)突變、-αQS點(diǎn)突變和-αWS點(diǎn)突變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)資料采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。對(duì)各類地中海貧血基因異常檢出率等計(jì)數(shù)資料，采用百分比(%)表示。

2 結(jié) 果

在 26 803例疑似地中海貧血的樣本中，共檢測(cè)出12 682例地中海貧血基因攜帶者12 682例，陽(yáng)性率為47.32%。其中α地中海貧血基因8 636例，檢出率為32.22%。β地中海貧血基因 3 306例，檢出率為12.33%。αβ復(fù)合地中海貧血基因740例，檢出率為2.76%。在檢出的8 636例α地中海貧血基因中，包括24種基因型，其中檢出率最高為--SEA(46.86%)，其次為-α3.7/αα(18.56%)、αCSα/αα(9.25%)和-α4.2/αα(8.28%)，見(jiàn)表1。在檢出的3 306例β地中海貧血基因中，包括28種基因型，檢出率較高的基因型為β41/42/βN(44.92%)、β17/βN(26.32%)和βIVS- Ⅱ-654/βN(7.77%)，見(jiàn)表2。在檢出的740例αβ復(fù)合型地中海貧血中，包含81種基因型，其中以--SEA復(fù)合β41-42/βN(17.30%)、--SEA復(fù)合β17/βN(10.41%)及-α3.7/αα復(fù)合β41-42/βN(10.00%)最為常見(jiàn)，見(jiàn)表3。

表1 α地中海貧血基因描述、例數(shù)及構(gòu)成比(n=8 636)

表2 β地中海貧血基因描述、例數(shù)及構(gòu)成比(n=3 306)

續(xù)表2 β地中海貧血基因描述、例數(shù)及構(gòu)成比(n=3 306)

表3 α復(fù)合β地中海貧血基因描述、例數(shù)及構(gòu)成比(n=740)

續(xù)表3 α復(fù)合β地中海貧血基因描述、例數(shù)及構(gòu)成比(n=740)

3 討 論

地中海貧血可分為α、β、γ、 δ、β地中海貧血等類型。臨床表現(xiàn)可分為靜止型、輕型、中間型、重型[7]。其中靜止型和輕型為攜帶者，對(duì)患者的生活無(wú)影響。中間型則需要輸血治療或不需要輸血治療。重型地中海貧血，如α地中海貧血胎兒出生后嚴(yán)重缺氧而死亡，甚至胎兒死于腹中，β 地中海貧血出生時(shí)無(wú)臨床癥狀，通常3～6個(gè)月開(kāi)始發(fā)病且需要長(zhǎng)期輸血，如不輸血，患兒通常在5歲前死亡[8]，對(duì)家庭的精神和經(jīng)濟(jì)產(chǎn)生巨大的負(fù)擔(dān)。因此降低重型地中海貧血的出生率是防控的重點(diǎn)。本研究通過(guò)對(duì)廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院樣本采用血細(xì)胞五分類和血紅蛋白電泳分析指標(biāo)篩查出地中海貧血可疑人群26 803例，然后進(jìn)一步采用Gap-PCR和 PCR-RDB技術(shù)診斷α、β地中海貧血基因，從而了解本地區(qū)地中海貧血基因構(gòu)成比。

據(jù)既往研究顯示，廣西α和β地中海貧血基因攜帶率分別為14.95%、6.78%[9]。在本研究的26 803例樣本中，地中海貧血基因攜帶率為47.32%，其中α地中海貧血基因?yàn)?2.22%，β地中海貧血為12.33%，αβ復(fù)合為2.76%。本研究針對(duì)已篩查可疑陽(yáng)性的患者作為研究對(duì)象，所以檢出率高于以往報(bào)道的廣西地中海貧血的基因攜帶率。在已確診的8 636例α地中海貧血基因攜帶者，按基因構(gòu)成比排序，--SEA(46.86%)，-α3.7/αα(18.56%),αCSα/αα(9.25%)和-α4.2/αα(8.28%)最為常見(jiàn)，與已報(bào)道的廣西其他地區(qū)結(jié)果一致[10-12]，與湖南、福建、廣東地區(qū)報(bào)道略有區(qū)別[4,13-14]。在已確診的3 306例β地中海貧血基因攜帶者中以β41/42/βN(44.92%)最為常見(jiàn)，其后依次為β17/βN(26.32%)和βIVS-Ⅱ-654/βN(7.77%)。這與桂林和南寧地區(qū)[12，15]一致。與湖南、廣東、云南地區(qū)略有不同[4，14，16]。此外，本研究還檢出740例α復(fù)合β地中海貧血攜帶者，其中以--SEA復(fù)合β41-42/βN(17.30%)最為常見(jiàn)，與廣西以往報(bào)道相同[12，15]，與湖南、云南不同[13，16]。所以廣西地中海貧血分布與地域有關(guān)系。

值得注意的是，本研究依然檢出了386例HbH病及21例β的純合子及雙重雜合子，臨床表現(xiàn)可有輕度到重度的貧血。αβ復(fù)合檢出率也處于較高水平，αβ復(fù)合地中海貧血不同于單純的α和β地中海貧血，其與正常人婚配有高概率遺傳給下一代。在臨床工作中，由于αβ復(fù)合地中海貧血的機(jī)制較為復(fù)雜，且β地中海貧血的臨床表型會(huì)覆蓋α地中海貧血，因此在血液學(xué)分析中篩查出β地中海貧血的同時(shí)也要考慮是否進(jìn)行α地中海貧血檢測(cè)，這樣可以有效防止復(fù)合型的地中海貧血漏診。

目前針對(duì)地中海貧血的治療方法非常有限，高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)針對(duì)育齡夫婦進(jìn)行地中海貧血知識(shí)的宣傳及產(chǎn)前篩查和診斷，或者建立地中海貧血管理平臺(tái)對(duì)高危人群進(jìn)行跟蹤隨訪對(duì)地中海貧血的防控有著重要的意義。相較于以往廣西地中海貧血的研究，本研究通過(guò)大量的數(shù)據(jù)分析其基因型構(gòu)成比，更能反映出廣西地區(qū)人群地中海貧血的遺傳背景，為本地區(qū)的遺傳咨詢、產(chǎn)前診斷及早期的觀察和治療提供有力的科學(xué)依據(jù)。