張潔菡，楊凰伶，王澤雨津，謝 琳，吳 凡，彭英云，周建華，許陳東，楊治風(fēng)，陳義勇

（1.常熟理工學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院，江蘇 常熟 215500；2.張家港天源生態(tài)養(yǎng)殖有限公司，江蘇 張家港 215622；3.張家港市畜牧獸醫(yī)站，江蘇 張家港 215699）

0 引言

近年來，人們越來越關(guān)注養(yǎng)雞業(yè)存在的抗生素藥物濫用引起的產(chǎn)品安全和質(zhì)量問題，因此推動(dòng)安全、高效、無毒、無污染的綠色添加劑在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用，以逐步替代抗生素和化學(xué)藥物已成為畜牧業(yè)的發(fā)展趨勢[1].

多糖作為生物有機(jī)體內(nèi)的一類生物大分子，具有降血脂、抗病毒、提高免疫力、抗菌等作用.近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合多糖如龍須菜多糖、壇紫菜多糖和毛頭鬼傘多糖復(fù)合后的功能作用優(yōu)于單一多糖，在抑制HeLa細(xì)胞增殖方面具有協(xié)同增效作用[2].蘆薈多糖、牛膝多糖和黃芪多糖具有提高肉仔雞免疫功能的作用[3].董雯雯等人[4]研究探討了北五味子多糖SCP-III對雞外周血淋巴細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)SCP-III能顯著增強(qiáng)細(xì)胞因子IL-2、IL-6和IFN-γ的分泌.劉素貞等人[5]研究發(fā)現(xiàn)蟬花多糖具有提高三黃雞雛雞免疫力，促進(jìn)生長，改善肉質(zhì)的作用.陽剛等人[6]研究發(fā)現(xiàn)麥冬多糖可以調(diào)節(jié)烏骨雞公雛環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的免疫抑制轉(zhuǎn)至正常水平.鄯來平等人[7]研究發(fā)現(xiàn)酵母多糖可以促進(jìn)免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能和抗病毒能力，有效提高肉仔雞的生產(chǎn)性能.

目前，關(guān)于單一多糖對雞免疫功能的影響研究較多，但是對復(fù)合多糖的研究報(bào)道較少.因此本文在土雞的日糧中使用復(fù)方多糖添加劑，探討復(fù)合多糖添加劑對土雞免疫功能的影響，為其在土雞安全生產(chǎn)中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

復(fù)合多糖飼料添加劑（本實(shí)驗(yàn)室制備，主要包括海藻多糖、杏鮑菇多糖、米糠多糖，其質(zhì)量比例為1︰2︰1）；免疫球蛋白 IgM、IgG、IgA、檢測試劑盒（南京建成科技生物有限公司）；細(xì)胞因子 IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ ELISA試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）；1日齡土雞（張家港市天源生態(tài)養(yǎng)殖有限公司提供）.

1.2 主要儀器

TG16-WS高速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）；ReadMax 1900酶標(biāo)儀（上海閃譜生物科技有限公司）.

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取240只健康且體重接近的1日齡土雞，隨機(jī)分成4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只土雞（公母各半）.對照組（CT）飼喂基礎(chǔ)日糧，其他處理組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%（試驗(yàn)1組，ET1）、0.2%（試驗(yàn)2組，ET2）、0.4%（試驗(yàn)3組，ET3）的復(fù)合多糖飼料添加劑顆粒劑.試驗(yàn)分為1～21日齡和22～42日齡兩個(gè)階段，試驗(yàn)周期為42 d，基礎(chǔ)日糧配制參考NRC（2012）雞的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和《雞飼料標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33—2004）.

1.3.2 飼養(yǎng)管理

采用3層籠養(yǎng)飼養(yǎng)方式，每天定時(shí)將復(fù)合多糖飼料添加劑加入基礎(chǔ)日糧中飼喂2次，期間自然光照、通風(fēng)，常規(guī)消毒，自由采食飲水.保持雞舍環(huán)境衛(wèi)生，并按正常免疫程序進(jìn)行免疫接種.第1周飼養(yǎng)環(huán)境溫度保持在33～34 ℃，以后每周平均降低2 ℃，直至室溫降至22 ℃ 左右.給予充足的自然光，并將最終室溫維持在22 ℃左右.

1.3.3 免疫功能指標(biāo)的測定

1.3.3.1 免疫器官指數(shù)

在試驗(yàn)21 d（第一階段）和42 d（第二階段）時(shí)，每組隨機(jī)抽取5只土雞，心臟采血后頸部脫臼處死，取胸腺、脾臟和法氏囊，清洗稱重，免疫器官指數(shù)計(jì)算公式為

免疫器官指數(shù)（g/kg）= 免疫器官重量（g）/土雞體重（kg）

1.3.3.2 血清免疫指標(biāo)

每組分別隨機(jī)選取2只21日齡和42日齡土雞，禁食3 h，然后通過翅靜脈采血，離心（5 000 r/min，5 min）制備血清，然后嚴(yán)格按檢測試劑盒說明書對血清中的IgA、IgG、IgM、IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量進(jìn)行檢測.

1.4 數(shù)據(jù)分析

每組數(shù)據(jù)進(jìn)行3次平行試驗(yàn)取平均值，以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，利用SPSS20軟件處理數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和顯著性分析，P<0.05表示存在顯著性差異.

2 結(jié)果與討論

2.1 復(fù)合多糖添加劑對土雞免疫器官指數(shù)的影響

復(fù)合多糖添加劑對土雞免疫器官指數(shù)的影響見表1.從表1可以看出，在試驗(yàn)第一階段（1～21 d），與CT組相比，ET1、ET2、ET3復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組的胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)均有提高，脾臟指數(shù)有所降低，但無顯著性差異（P>0.05）.在試驗(yàn)第二階段（22～42 d），與CT組相比，ET1、ET2、ET3 3個(gè)復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組的胸腺指數(shù)有顯著或極顯著提高（P<0.05或P<0.01），分別提高了20.7%，30.25%和35.99%；脾臟指數(shù)有了明顯的提高（P<0.05），分別提高了22.55%，24.51%和28.43%.法氏囊指數(shù)與第一階段相比呈上升趨勢，試驗(yàn)ET1組與CT組相比差異不明顯（P>0.05），試驗(yàn)ET2組、ET3組比CT組有了明顯的提高（P<0.05），分別提高了13.53%和23.77%.與第一階段相比，第二階段土雞免疫器官指數(shù)有一定程度上升.免疫抑制導(dǎo)致免疫器官指數(shù)降低，免疫增強(qiáng)主要表現(xiàn)為免疫器官指數(shù)的增加[8].說明復(fù)合多糖添加劑能夠通過提高免疫器官質(zhì)量，提升免疫指數(shù)進(jìn)而增強(qiáng)土雞的免疫功能.李洪武等人[9]發(fā)現(xiàn)在肉仔雞基礎(chǔ)飼糧中加入不同添加量的人參葉多糖，肉仔雞免疫指數(shù)如胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)有不同程度的提高.在日糧中添加香菇多糖，可以顯著提高肉仔雞的免疫器官指數(shù)（P<0.05）[10].研究證實(shí)淫羊藿多糖對肉雞的免疫器官指數(shù)具有明顯的增強(qiáng)作用[11].

表1 復(fù)合多糖添加劑對土雞免疫器官指數(shù)的影響

2.2 復(fù)合多糖添加劑對土雞血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）的影響

復(fù)合多糖添加劑對土雞血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）的影響見表2.從表2可以看出，在試驗(yàn)第一階段（1～21 d），與CT組相比，ET1、ET2、ET3復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組IgA含量差異不明顯（P>0.05），ET2、ET3復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組IgG、IgM 的含量均明顯高于CT組（P<0.05）.在試驗(yàn)第二階段（22～42 d），與CT組相比，ET1、ET2、ET3復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組IgA、IgG含量差異明顯（P<0.05），IgM 含量有一定程度的提高，但是差異不顯著（P>0.05）.王瑩等人[12]研究發(fā)現(xiàn)黃芪多糖飼料添加劑可提高艾拔益加肉雞（即AA肉雞）血清IgM、IgG和IgA免疫球蛋白水平.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)合多糖添加劑能夠提高土雞免疫球蛋白含量，進(jìn)而增強(qiáng)土雞的免疫功能.

表2 復(fù)合多糖添加劑對土雞血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）的影響

2.3 復(fù)合多糖添加劑對土雞血清中IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量的影響

復(fù)合多糖添加劑對土雞血清中IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量的影響見表3.從表3可以看出，在試驗(yàn)第一階段（1～21 d），與 CT 組相比，ET1、ET2、ET3復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組的土雞血清中IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量有了顯著性提高（P<0.05）；在試驗(yàn)第二階段（22～42 d），與CT組相比，ET2、ET3復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組土雞血清中IL-2含量顯著提高（P<0.05），分 別 提 高 了52.22%，64.53%.ET1、ET2、ET3復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組的土雞血清中IL-12、TNF-α含量顯著提高（P<0.05），ET3復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組的土雞血清中IFN-γ含量顯著提高（P<0.05），ET1、ET2復(fù)合多糖添加劑試驗(yàn)組的土雞血清中IFN-γ含量差異不顯著（P>0.05）.余強(qiáng)等人[13]發(fā)現(xiàn)，黑靈芝多糖能夠促進(jìn)細(xì)胞因子 IL-2、TNF-α、IFN-γ、IL-12 的分泌.本研究結(jié)果表明，復(fù)合多糖添加劑能夠促進(jìn)細(xì)胞因子IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ的分泌，從而提高土雞的免疫功能.

表3 復(fù)合多糖添加劑對土雞血清中IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ含量的影響

3 結(jié)論

本文以土雞為對象，以免疫器官指數(shù)和血清免疫指標(biāo)為指標(biāo)，探討了復(fù)合多糖添加劑對土雞免疫功能的影響.結(jié)果表明：土雞基礎(chǔ)日糧中加入一定的復(fù)合多糖添加劑可有效提高土雞免疫器官指數(shù)，提高土雞免疫球蛋白含量，促進(jìn)細(xì)胞因子IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ的分泌從而提高土雞的免疫功能.綜合成本及對土雞的免疫作用效果來看，日糧中復(fù)合多糖添加劑的添加量為0.2%時(shí)可以有效提升土雞的免疫功能.復(fù)合多糖添加劑在土雞養(yǎng)殖領(lǐng)域可以作為一種免疫增強(qiáng)劑，具有廣闊的應(yīng)用前景.