高 榮，王 晨，高佳玉，沙紀(jì)蕾，尹震東，張一平，沙 峰，張 賢，楊治風(fēng)

（1.常熟理工學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院，江蘇 常熟 215500；2.張家港市畜禽有限公司，江蘇 張家港 215622；3.張家港市畜牧獸醫(yī)站，江蘇 張家港 215699）

益生菌是利用有益微生物制成的活菌劑，無毒、無殘留，是一種綠色添加劑，可調(diào)節(jié)宿主胃腸道微生態(tài)平衡，減少腸道感染，增強(qiáng)動物的非特異性免疫力，并能在腸道疾病情況下幫助機(jī)體恢復(fù)腸道菌群活性，改善菌群養(yǎng)分合成及其生物可利用性，提高畜禽對飼料的利用率以及宿主機(jī)體生長性能[1].國內(nèi)外益生菌制劑在家畜、家禽及水產(chǎn)動物中應(yīng)用較多.Koenen等人研究發(fā)現(xiàn)在日糧中添加益生菌制劑后肉雞的平均日增重可顯著增加，料肉比顯著降低，另外還可顯著提高腸道的粘膜抗體sIgA含量[2].Haghighi等在斷奶仔豬日糧中添加復(fù)合益生菌劑，仔豬的生長性能獲得了顯著提高，同時腸道菌群更為平衡穩(wěn)定，豬舍空氣中的有害氣體含量顯著減少[3].

本研究前期從249株植物源性菌株中篩選得到一株益生菌菌株22A，并證實(shí)菌株22A具有良好的益生菌活性.本研究在鹿苑雞的飼糧中添加由菌株22A、乳酸菌、釀酒酵母菌制成的復(fù)合益生菌劑，以生長性能、營養(yǎng)代謝、免疫性能、屠宰性能等為指標(biāo)，分析復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞機(jī)體性能的影響，為其在養(yǎng)殖生產(chǎn)中的合理利用提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

復(fù)合益生菌劑由本實(shí)驗(yàn)室制備，為凍干粉制劑，其中菌株22A（屬于枯草芽孢桿菌）、釀酒酵母、嗜酸乳桿菌添加量分別為 9.0×108 cfu/g，7.0×108 cfu/g，9.0×108 cfu/g，1 000 mg/kg配比為 1︰1︰1，4 ℃保存.1 日齡鹿苑雞（張家港市畜禽有限公司提供），雞飼料（購自唐人神集團(tuán)）.

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用160只1日齡健康的鹿苑雞進(jìn)行42 d的飼喂試驗(yàn)，參考我國《NY/T33—2004雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》和NRC（1994）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，配制鹿苑雞的基礎(chǔ)日糧.實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為2組，I組為空白對照組，II組的基礎(chǔ)日糧中添加基于22A菌株的復(fù)合益生菌劑，添加量為1 000 mg/kg，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)20只鹿苑雞.

1.3 飼養(yǎng)管理

在雛雞進(jìn)入雞舍前，對雞舍進(jìn)行徹底的沖洗、消毒.雛雞到達(dá)雞舍2 h內(nèi)，以水溫適中的5%葡萄糖開飲.鹿苑雞雛雞的飼養(yǎng)方式為籠養(yǎng)，并根據(jù)雛雞日齡對飼養(yǎng)密度進(jìn)行調(diào)整，1～21日齡為20只/m2，22～42日齡為10只/ m2，自由飲水和自由采食.

1.4 生長性能

試驗(yàn)期間以周為單位計(jì)算飼料用量，分別在14日齡、28日齡、42日齡的早晨8點(diǎn)，禁止雞采食，僅允許空腹自由飲水12 h后稱重.計(jì)算各日齡鹿苑雞的平均日采食量、平均日增重和料重比.

平均日采食量=采食量/試驗(yàn)天數(shù)；

平均日增重=（末重－始重）/試驗(yàn)天數(shù)；

料重比=平均日采食量/平均日增重.

1.5 屠宰性能

選用42日齡的雞檢測鹿苑雞的屠宰性能.每重復(fù)組中隨機(jī)選取3只健康鹿苑雞，在屠宰前12 h停止采食和飲水，空腹稱重和屠宰，屠宰性能各項(xiàng)指標(biāo)計(jì)算如下：

屠宰率=（屠體重/活體重）×100%；

半凈膛率=（半凈膛重/活體重）×100%；

全凈膛率=（全凈膛重/活體重）×100%；

胸肌率=（兩側(cè)胸肌重/全凈膛重）×100%；

腿肌率=（兩側(cè)腿肌重/全凈膛重）×100%.

1.6 營養(yǎng)物質(zhì)代謝率

選用35日齡的鹿苑雞進(jìn)行營養(yǎng)物質(zhì)代謝性能的檢測.隨機(jī)從2組的每個重復(fù)中挑選1只雛雞，進(jìn)行單籠飼養(yǎng).在飼喂第2天的20：00開始禁食，待雛雞排空腸道，以消除腸道內(nèi)容物的影響后，可自由飲水，其他飼養(yǎng)條件不變.在飼養(yǎng)的第4天早晨08：00開始收集雛雞72 h糞便，期間記錄采食量，定時收集排泄物，剔除毛屑雜物.糞便每100 g添加10 mL 10%的鹽酸，-20 ℃保存.收集雞糞后解凍混勻，65 ℃烘箱烘干至恒重，置于室溫回潮24 h后稱重，然后粉碎裝袋密封.飼料和糞便中水分、鈣含量、磷含量、粗蛋白含量、中性洗滌纖維含量、粗脂肪含量等養(yǎng)分按照常規(guī)方法進(jìn)行測定，并按如下公式計(jì)算：

有機(jī)物（g） =干物質(zhì)－粗灰分；

養(yǎng)分表觀消化率=（養(yǎng)分食入量－排泄物中養(yǎng)分含量）/養(yǎng)分食入量×100%.

1.7 血清生化

在21日齡和42日齡時，隨機(jī)在2組的每個重復(fù)中選取3只鹿苑雞處死并采集5 mL心臟血樣，室溫離心10 min（3 000 r/min），收集上層雞血清，-20 ℃保存.采用羅氏全自動生化分析儀測定總蛋白、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮等生化指標(biāo).

1.8 免疫性能檢測

雛雞心臟采血后，宰殺摘取和稱重法氏囊、脾臟和胸腺，并根據(jù)它們的重量計(jì)算免疫器官指數(shù).

免疫器官指數(shù)（g/kg）= 免疫器官鮮重（g）×100/宰前空腹活重（kg）.

雞血清中免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白A（IgA）含量選用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法進(jìn)行測定.

1.9 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)重復(fù)3次，數(shù)據(jù)經(jīng)Microsoft 365初步處理后利用SPSS Statistics 26.0統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著.

2 結(jié)果與討論

2.1 復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞生長性能的影響

復(fù)合益生菌制劑可以改善家畜家禽的機(jī)體性能，加快畜禽生長發(fā)育，促進(jìn)飼料的消化吸收等[4].Mombelli等利用地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌等益生菌制成復(fù)合添加劑，在飼糧中添加0.1%～0.2%可以顯著提高肉雞的平均日增重和成活率，促進(jìn)飼料的消化吸收，大幅度降低料重比[5].復(fù)合益生菌制劑對鹿苑雞生長性能的影響結(jié)果見表1.由表1可知，14日齡時II組的平均日采食量提高了1.3 g，但與I組無顯著差異（P>0.05）；28和42日齡時II組的日采食量的平均值提高了14和11.2 g，顯著高于I組（P<0.05）；14、28和42日齡時II組平均日增重提高了3.4，19.8和21.7 g，顯著優(yōu)于I組（P<0.05）；14、28和42日齡時II組的料重比降至1.71，1.47和1.68，顯著低于I組（P<0.05）.結(jié)果表明，由菌株22A、釀酒酵母和乳酸菌制成的復(fù)合益生菌可提高鹿苑雞的采食量，降低料重比，促進(jìn)雞機(jī)體的健康生長，從而提高雞的生長性能.

表1 復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞生長性能的影響

2.2 復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞屠宰性能的影響

雞的產(chǎn)肉性能主要以屠宰率、胸肌率和腿肌率等指標(biāo)進(jìn)行評價，這也是評價雞屠宰性能的關(guān)鍵[6].陸銀等人的研究表明在21～35日齡肉雞的基礎(chǔ)日糧中添加復(fù)合益生菌可大大提高屠宰率以及腿肌率和胸肌率（P>0.05），而且這些指標(biāo)隨著添加量的增加而升高[7].復(fù)合益生菌制劑對鹿苑雞屠宰性能的影響結(jié)果見表2.從表2可知，與I組相比，II組鹿苑雞的全凈膛率、胸肌率和腿肌率分別提高了0.43%，1.12%和1.17%，差異顯著（P<0.05）.另外，鹿苑雞的屠宰率（P>0.05）和半凈膛率（P>0.05）均有不同程度的提高.鹿苑雞的胸肌率和腿肌率都得到顯著提高，可能是因?yàn)閺?fù)合益生菌劑提高了鹿苑雞的飼料利用率，增強(qiáng)了機(jī)體的蛋白合成代謝，從而促進(jìn)雞的生長發(fā)育.郭元晟等研究發(fā)現(xiàn)益生菌在肉雞的胃腸道定殖發(fā)酵及其自生的代謝可產(chǎn)生不同的短鏈脂肪酸，被雞體吸收代謝，因而可促進(jìn)肉雞屠宰性能的提高[8].

表2 復(fù)合益生菌劑對肉雞屠宰性能的影響 單位：%

2.3 復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞營養(yǎng)物質(zhì)代謝率的影響

畜禽能否充分利用日糧中營養(yǎng)成分一般通過營養(yǎng)物質(zhì)代謝率進(jìn)行評價，這也是畜禽機(jī)體健康評價的最直觀指標(biāo).本試驗(yàn)通過比較對照組和復(fù)合益生菌劑組的飼料和排泄物中的粗蛋白、干物質(zhì)、粗脂肪、鈣、粗纖維和磷的表觀消化率，分析復(fù)合益生菌制劑對鹿苑雞營養(yǎng)物質(zhì)代謝率的影響，結(jié)果如表3所示.由表3可知，復(fù)合益生菌劑顯著提高了鹿苑雞的干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪和鈣的表觀消化率（P<0.05），分別提高了2%，8.5%，13.87%和15.2%.另外粗纖維和磷的表觀消化率也有一定的提高，但不顯著（P>0.05）.鹿苑雞日糧中營養(yǎng)物質(zhì)代謝率的提高可能得益于復(fù)合益生菌及其在雞的胃腸道定植和代謝過程中產(chǎn)生的各種代謝產(chǎn)物對有害微生物定值的抑制，使胃腸道微生態(tài)環(huán)境得到了改善.益生菌劑中的枯草芽孢桿菌在胃腸道的定植和調(diào)節(jié)宿主機(jī)體的氮代謝作用[9]，以及其在胃腸道中代謝可極速消耗胃腸道中的氧，從而有利于腸道內(nèi)有益菌的生長繁殖，發(fā)揮有益菌群的協(xié)同共生、優(yōu)勢互補(bǔ)作用[10].釀酒酵母作為復(fù)合益生菌劑的配方菌之一，可以合成和分泌核苷酸、必需氨基酸和消化酶，促進(jìn)宿主腸道對大分子營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收.另外，β-1,3-葡聚糖和甘露寡糖是釀酒酵母細(xì)胞壁中的主要成分[11-12]，可被乳酸菌代謝，有助于乳酸菌定植腸道，降低腸道pH值和腸道還原電位，進(jìn)而抑制有害微生物的繁殖生長.復(fù)合益生菌劑中的乳酸菌可以維持動物腸道微生物菌群平衡，其代謝產(chǎn)生的大量有機(jī)酸可促進(jìn)腸道蠕動和消化液分泌，促進(jìn)營養(yǎng)物的消化吸收，以及腸道中被結(jié)合或螯合的礦物質(zhì)元素的釋放，從而提高鈣、磷等的利用率.

表3 復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響 單位：%

2.4 復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞血清生化指標(biāo)的影響

動物血液是機(jī)體進(jìn)行物質(zhì)代謝交換的主要場所，受到生長發(fā)育狀態(tài)、營養(yǎng)以及自身分泌等因素的影響.因此良好的動物機(jī)體血清生化指標(biāo)是獲得良好生產(chǎn)性能的指征之一[13].復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞血清生化指標(biāo)的影響結(jié)果如表4所示.與I組相比，II組42日齡鹿苑雞的血清總蛋白和白蛋白含量提高了3.72和2.47 g/L，差異顯著（P<0.05）；血清中尿素氮濃度及谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性有所提高，但差異不顯著（P>0.05）.血清總蛋白和白蛋白含量是機(jī)體血液中的兩種重要蛋白，反映機(jī)體對蛋白質(zhì)的消化狀況，與機(jī)體免疫力強(qiáng)弱緊密相關(guān).另外，機(jī)體滲透壓的維持、離子運(yùn)輸、免疫活動及組織修補(bǔ)都與血清蛋白質(zhì)密切相關(guān)[14].本研究發(fā)現(xiàn)飼喂復(fù)合益生菌制劑可增強(qiáng)鹿苑雞機(jī)體蛋白質(zhì)代謝，雞血液中血清總蛋白和白蛋白含量得到顯著提高，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力.從表4可以發(fā)現(xiàn)，飼喂復(fù)合益生菌劑可降低鹿苑雞血液中血清尿素氮濃度和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性，這可能得益于復(fù)合益生菌劑對腸道菌群的平衡作用.有研究表明復(fù)合益生菌定植腸道可以降低腸道pH值，其分泌的蛋白和蛋白酶能夠改善宿主胃腸道的消化酶活性，增強(qiáng)機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝[11,15].

表4 復(fù)合益生菌制劑對鹿苑雞血清生化指標(biāo)的影響

2.5 復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞免疫指標(biāo)的影響

脾臟、胸腺和法氏囊是禽類的免疫器官，它們發(fā)育及功能的強(qiáng)弱決定了動物的免疫水平.因此，免疫器官指數(shù)是衡量機(jī)體免疫性能的重要指標(biāo)[16].復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞免疫指標(biāo)的影響見表5.由表5可知，采食了復(fù)合益生菌劑的鹿苑雞脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)均高于空白對照組（I組），但差別不顯著（P>0.05）.表明鹿苑雞的免疫器官指標(biāo)可以通過采食復(fù)合益生菌劑得到改善.王敏等人則發(fā)現(xiàn)黃羽肉雞在飼喂益生菌前后胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官組織均沒有發(fā)生顯著的變化[17].

表5 復(fù)合益生菌制劑對鹿苑雞免疫指標(biāo)的影響

血清免疫球蛋白含量是衡量動物免疫功能變化的重要指標(biāo)之一[14].IgG是禽類血清中重要的免疫球蛋白，參與禽類重要的體液免疫功能因子，具有抗細(xì)菌、病毒、外毒素等多種活性功能[18].IgA介導(dǎo)禽類的黏膜免疫，與病原微生物結(jié)合形成復(fù)合物，阻止病原微生物與機(jī)體細(xì)胞結(jié)合，從而抑制局部感染的發(fā)生[8].與對照組（I組）相比，21日齡和42日齡的復(fù)合益生菌飼喂組鹿苑雞免疫球蛋白含量得到了提高，其中21日齡時的IgA、42日齡時的IgA和IgG的含量都得到了顯著提高（P<0.05）.原因可能是鹿苑雞飼喂了復(fù)合益生菌劑后，其蛋白質(zhì)代謝、B族維生素和氨基酸等的生理活性物質(zhì)得到了提高，從而增強(qiáng)了畜禽的抗病能力，改善了鹿苑雞的免疫器官指標(biāo).

3 結(jié)論

本文以生長性能（平均采食量、平均日均重、料重比）、屠宰性能（屠宰率、腿肌率、半凈膛率、全凈膛率、胸肌率）、營養(yǎng)代謝率、血清生化和免疫性能等作為指標(biāo)，探討了基于菌株22A的復(fù)合益生菌劑對鹿苑雞機(jī)體性能的影響.結(jié)果表明：復(fù)合益生菌制劑可提高鹿苑雞平均日采食量，促進(jìn)蛋白和脂肪的合成及營養(yǎng)物質(zhì)的代謝，降低鹿苑雞養(yǎng)殖的料重比，提高鹿苑雞血液蛋白、白蛋白的含量，改善鹿苑雞的免疫器官指標(biāo)，提高血液抗體IgA和IgG的含量，增強(qiáng)機(jī)體的免疫力.說明由益生菌菌株22A、釀酒酵母、乳酸菌制備的復(fù)合益生菌劑可促進(jìn)鹿苑雞生長發(fā)育和增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高其養(yǎng)殖效率，從而降低養(yǎng)殖企業(yè)的養(yǎng)殖成本.