亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        天蠶素抗菌肽在飼料應(yīng)用中的安全性研究

        2022-03-19 03:00:56孫明杰盛永杰郝木強(qiáng)柳亞茹謝全喜曹銀生
        中國(guó)飼料 2022年3期
        關(guān)鍵詞:天蠶抗菌肽臟器

        孫明杰 , 盛永杰, 郝木強(qiáng), 趙 倩, 柳亞茹, 謝全喜, 曹銀生

        (山東寶來利來生物工程股份有限公司,山東省動(dòng)物微生態(tài)制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東泰安 271000)

        為避免抗生素濫用給人類健康帶來的多種危害, 尋找代替?zhèn)鹘y(tǒng)抗生素的藥物已成為現(xiàn)今研究熱點(diǎn)。近幾年隨著抗菌肽研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)其作為抗菌的替代藥物發(fā)展?jié)摿薮蟆?由于抗菌肽獨(dú)特的抑菌機(jī)理, 病原微生物不易對(duì)其產(chǎn)生耐藥性,使其成為一種新型的抗微生物介質(zhì)。 另外,由于抗菌肽具有廣譜抗菌性、 耐酸堿、 熱穩(wěn)定等特征,使其在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)、食品工業(yè)等領(lǐng)域展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景和研究?jī)r(jià)值。 目前關(guān)于抗菌肽的應(yīng)用已經(jīng)有很多報(bào)道(孫得發(fā)等,2020;黃小建等,2020;王正楠,2020),但作為飼料添加劑與其相關(guān)的毒性試驗(yàn)報(bào)道較少。 本文研究了天蠶素抗菌肽作為飼料添加劑對(duì)小鼠的急性毒性和亞慢性毒性, 為抗菌肽作為飼料添加劑在畜牧領(lǐng)域中的應(yīng)用提供支撐數(shù)據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 18 ~22 g 昆明小鼠,雌性,購(gòu)于濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司。

        1.2 主要試劑 抗菌肽菌粉CEC-38,27 萬單位/g,由寶來利來生產(chǎn)車間提供。 含有不同劑量抗菌肽鼠糧由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司代加工。

        1.3 小鼠急性毒性試驗(yàn)

        1.3.1 動(dòng)物分組及給藥方法 18 ~22 g 昆明小鼠共50 只,試驗(yàn)共分5 組,每組小鼠10 只。 1 ~5組采用一次最大灌胃量法 (1 mL/只), 空腹8 h后, 灌胃不同劑量抗菌肽(800、1600、3200、6400、12800 單位/g)。

        1.3.2 觀察及檢測(cè)指標(biāo) 動(dòng)物死亡情況: 每天定期觀察小鼠3 次, 包括動(dòng)物死亡數(shù)及各自的死亡時(shí)間。 中毒反應(yīng)癥狀:臨床觀察每天至少一次,觀察皮膚、被毛、眼睛和黏膜改變,呼吸、循環(huán)、自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及四肢活動(dòng)和行為方式的變化等,特別要注意有無震顫、驚厥、腹瀉、嗜睡等現(xiàn)象。 神經(jīng)毒性:驚厥、共濟(jì)失調(diào)和死亡。 植物神經(jīng)興奮:腹瀉或豎毛。病理學(xué)檢查:解剖進(jìn)行尸檢,觀察各器官有無改變, 對(duì)肉眼觀察有變化的臟器需進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

        1.4 小鼠亞慢性毒性試驗(yàn)

        1.4.1 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)共分5 組, 每組小鼠10 只,雌性。 CK 為對(duì)照組,飼喂基礎(chǔ)飼料。 1 ~4組為試驗(yàn)組, 飼喂含有不同劑量抗菌肽(40、400、4000、2 萬單位/g)鼠糧。 所有小鼠自由采食。 嚙齒類亞慢性毒性試驗(yàn)時(shí)間至少3 個(gè)月(2 ~6 個(gè)月),本試驗(yàn)亞慢性試驗(yàn)進(jìn)行4 個(gè)月飼喂觀察。

        1.4.2 檢測(cè)指標(biāo) 在飼喂試驗(yàn)開始后每日觀察小鼠的表現(xiàn),每周稱量小鼠體重、飼料,計(jì)算日增重、日采食量、 食物利用率。 在第4 個(gè)月剖殺部分小鼠,采集主要臟器,計(jì)算臟器指數(shù),采集小鼠血液,測(cè)定小鼠血液常規(guī)和生化指標(biāo)。

        2 結(jié)果

        2.1 抗菌肽急性攻毒試驗(yàn)結(jié)果 臨床觀察:各組小鼠皮膚、被毛、眼睛和黏膜無改變,呼吸、四肢活動(dòng)和行為方式無變化,無震顫、驚厥、腹瀉、嗜睡等現(xiàn)象,無腹瀉或豎毛。剖檢:各組小鼠主要臟器,胸腺、肺、肝、脾、胃、小腸、大腸、腎等部位未發(fā)現(xiàn)明顯病理變化。

        急性攻毒試驗(yàn)小鼠在最大劑量為1.28 萬單位/g,灌胃1 mL 時(shí)并未致死,臨床觀察和剖檢結(jié)果說明,天蠶素抗菌肽在最大劑量時(shí)無毒性。

        2.2 抗菌肽亞慢性毒性試驗(yàn)

        2.2.1 抗菌肽對(duì)小鼠臨床表現(xiàn)的影響 臨床觀察:各組小鼠皮膚、被毛、眼睛和黏膜無改變,呼吸、四肢活動(dòng)和行為方式無變化,無震顫、驚厥、腹瀉、嗜睡等現(xiàn)象,無腹瀉或豎毛。

        2.2.2 抗菌肽對(duì)小鼠日增重的影響 飼喂試驗(yàn)開始前2 個(gè)月,每周稱量小鼠體重,計(jì)算小鼠的日增重,后期延長(zhǎng)稱重時(shí)間。 結(jié)果如圖1 顯示,前4 周小鼠生長(zhǎng)較快,后期小鼠日增重變化不大,小鼠基本停止生長(zhǎng)。 CK 組和試驗(yàn)1、2、3、4 組間日增重?zé)o顯著差異(P>0.05)。 表明飼喂抗菌肽并未影響小鼠的正常生長(zhǎng)。

        圖1 天蠶素抗菌肽對(duì)小鼠日增重的影響

        2.2.3 抗菌肽對(duì)小鼠日采食量的影響 飼喂試驗(yàn)開始前2 個(gè)月,每周稱量小鼠采食量,計(jì)算小鼠的日采食量。試驗(yàn)后期延長(zhǎng)稱量時(shí)間。由圖2 可知,試驗(yàn)組1 ~4 組小鼠飼喂抗菌肽后前5 周日采食量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。 從第6 周開始,除4 組外,各組日采食量與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05),1 ~3 組日采食量逐漸與對(duì)照組相當(dāng),4 組采食量一直保持最低。

        圖2 天蠶素抗菌肽對(duì)小鼠日采食量的影響

        2.2.4 抗菌肽對(duì)小鼠食物利用率的影響 通過小鼠日增重與日采食量之比,計(jì)算小鼠食物利用率。由圖3 可知,小鼠食物利用率隨飼喂時(shí)間延長(zhǎng),各組呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。第1 周,各試驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。 飼喂抗菌肽提高了食物利用率。 除第8 周和第16 周,4 組小鼠食物利用率一直顯著高于其他各組(P<0.05)。 1 ~3 組小鼠食物利用率也高于對(duì)照組。

        圖3 天蠶素抗菌肽對(duì)小鼠食物利用率的影響

        2.2.5 抗菌肽對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響 飼喂4 個(gè)月后,各組剖殺10 只小鼠。采集小鼠主要器官,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 臟器指數(shù)是指某個(gè)臟器的濕重與單位體重的比值,通常以100 g 體重計(jì)。 如肝/體比,即(全肝濕重/體重)×100。 由表1 可知,飼喂不同濃度抗菌肽4 個(gè)月對(duì)小鼠主要臟器指數(shù)無顯著性影響(P>0.05)。 并且剖檢并未觀察到器官病變。

        表1 抗菌肽對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響(n=10)g

        2.2.6 抗菌肽對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)的影響 飼喂4 個(gè)月后, 剖殺, 毛細(xì)管采集小鼠血液20 μL 于1.5 mL 抗凝離心管中, 送于骨科醫(yī)院進(jìn)行測(cè)定,數(shù)據(jù)分析結(jié)果如表2。 飼喂不同濃度抗菌肽4 個(gè)月對(duì)小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮無顯著性影響(P>0.05)。 說明抗菌肽對(duì)小鼠肝、腎功能無影響。

        表2 抗菌肽對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)的影響(n=10)

        2.2.7 抗菌肽對(duì)小鼠血常規(guī)的影響 眼球采血于離心管中,5000 r/min 離心10 min , 取上清送于骨科醫(yī)院進(jìn)行測(cè)定,數(shù)據(jù)分析結(jié)果如表3。 數(shù)據(jù)顯示各試驗(yàn)組血常規(guī)各指標(biāo)與CK 組相比無顯著差異性(P>0.05)。

        表3 抗菌肽對(duì)小鼠血常規(guī)的影響(n=10)

        3 討論

        毒理研究中動(dòng)物的體重變化是機(jī)體各器官、系統(tǒng)發(fā)育狀況的總和, 是反映受試毒物對(duì)機(jī)體毒性作用的一項(xiàng)綜合指標(biāo), 對(duì)于判斷受試物毒性作用強(qiáng)度有一定的參考價(jià)值(沈建忠,2002)。因大多數(shù)雌性動(dòng)物耐受性強(qiáng)于雄性,且個(gè)體之間差異小,故選用雌性小鼠進(jìn)行試驗(yàn)。

        為了減少用藥應(yīng)激,亞慢性毒性試驗(yàn)周期持續(xù)4 個(gè)月,試驗(yàn)周期較長(zhǎng),因此采用混飼給藥方式, 將抗菌肽按照比例添加到飼料中, 重新制粒,最大程度減少應(yīng)激反應(yīng),可更好地檢驗(yàn)相關(guān)指標(biāo)。 飼喂試驗(yàn)開始前,粉碎各組代加工飼料,測(cè)定代加工飼料抗菌肽活性是否受損, 確保試驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性。

        小鼠2 ~6 個(gè)月飼喂試驗(yàn)可以作為評(píng)價(jià)藥物或毒物亞慢性危害的主要參考依據(jù)。 本試驗(yàn)通過混飼給藥觀察小鼠的臨床表現(xiàn)、 組織病理學(xué)變化,以及測(cè)定血液學(xué)、血清生化指標(biāo)、臟器系數(shù)等幾個(gè)方面來考察抗菌肽毒性(姜玲玲等,2016;蘇亞楠等,2015;張玲等,2004)。 臟器系數(shù)又稱臟體比, 是試驗(yàn)動(dòng)物某臟器的重量與體重之比值。 臟器系數(shù)常能反映試驗(yàn)動(dòng)物總的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和內(nèi)臟的病變情況,臟器系數(shù)增大,表示臟器充血、水腫或增生肥大等;臟器系數(shù)減小,表示臟器萎縮及其他退行性改變。 正常狀態(tài)下,臟器系數(shù)比較恒定, 當(dāng)接觸外來物質(zhì)致使臟器受到損害,臟器重量發(fā)生改變,臟器系數(shù)將發(fā)生變化(孫全文等,2010)。 本試驗(yàn)結(jié)果表明,長(zhǎng)期飼喂含天蠶素抗菌肽飼料,小鼠體重、血液常規(guī)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)、臟器系數(shù)與對(duì)照組相比均無顯著差異,剖檢觀察顯示小鼠內(nèi)臟器官無損害,未見與藥物作用相關(guān)病理變化, 故可認(rèn)定天蠶素抗菌肽作為飼料添加劑可長(zhǎng)期使用。

        另外由于試驗(yàn)用天蠶素抗菌肽為規(guī)模化生產(chǎn)獲得,因此在檢驗(yàn)急性毒性試驗(yàn)時(shí)未用純品,而是直接灌胃水溶菌粉, 灌胃1.28 萬單位/g 1 mL 為最大給藥量, 但作為支持天蠶素抗菌肽在畜牧行業(yè)中應(yīng)用試驗(yàn)也足以說明其安全性。

        與傳統(tǒng)抗生素殺菌方式不同, 抗菌肽具有獨(dú)特的殺菌作用方式, 其能夠特異性地選擇結(jié)合位點(diǎn), 通過降解細(xì)菌膜的某些必要成分或通過特定膜受體而進(jìn)入病原體起到殺菌作用 (Schmitta ,2016),這種獨(dú)特的殺菌方式,使抗菌肽在飼料應(yīng)用中具有安全、綠色、高效等優(yōu)勢(shì)。

        4 結(jié)論

        本試驗(yàn)結(jié)果表明, 飼喂不同濃度抗菌肽小鼠的前期采食量顯著下降,后期逐漸趨于對(duì)照組,整個(gè)飼喂周期日增重與對(duì)照組差異不顯著, 食物利用率顯著升高;小鼠的臨床表現(xiàn)、臟器指數(shù)、血液常規(guī)指標(biāo)和血液生化指標(biāo)均與對(duì)照組差異不顯著。 天蠶素抗菌肽對(duì)小鼠生長(zhǎng)有積極的生物學(xué)影響,未見毒性。

        猜你喜歡
        天蠶抗菌肽臟器
        一例由大網(wǎng)膜破裂致多臟器粘連導(dǎo)致牛死亡的病例淺析
        抗菌肽的生物學(xué)特性及在畜禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用
        昆蟲抗菌肽天蠶素的研究進(jìn)展
        尖嘴鼠追來了
        在達(dá)古雪山巔
        紅巖(2017年6期)2017-11-28 19:16:31
        黑龍江省野生天蠶種群數(shù)量的影響因素及保護(hù)對(duì)策
        天蠶品種馴化與應(yīng)用研究
        新型抗菌肽菌絲霉素純化工藝研究
        廣東飼料(2016年5期)2016-12-01 03:43:21
        抗菌肽修飾方法與抗菌機(jī)制的研究進(jìn)展
        手術(shù)治療盆腔臟器脫垂137例臨床分析
        青青青免费在线视频亚洲视频| 一本无码人妻在中文字幕| 又色又爽又黄的视频网站| 成人水蜜桃视频在线观看| 久久久久人妻一区二区三区| 98久9在线 | 免费| 女同中的p是什么意思| 国产久久久自拍视频在线观看| 人妻熟妇乱又伦精品hd| 日本熟妇人妻xxxxx视频| 久久99精品久久久66| 亚洲天堂男人的av天堂| 天天爽夜夜爽夜夜爽精品视频| 国产成人综合在线视频| 97精品国产高清自在线看超| 亚洲av天堂一区二区| 欧美激情综合色综合啪啪五月| 亚洲熟妇无码av另类vr影视| 国产亚洲欧美另类第一页| 一区二区高清免费日本| 免费无码av片在线观看播放| 中文在线√天堂| 亚洲av永久久无久之码精| 男女交射视频免费观看网站| 亚洲精品国产av天美传媒| 国产无套视频在线观看香蕉| 精品人妻一区二区视频| √天堂资源中文www| 亚洲爆乳少妇无码激情| aⅴ色综合久久天堂av色综合| 蜜桃视频在线免费视频| 激情综合色综合久久综合| 亚洲AV永久无码精品导航| 色噜噜色哟哟一区二区三区| 欧洲女人与公拘交酡视频| 国产精品美女久久久浪潮av| 久久免费网站91色网站| 在线免费观看黄色国产强暴av| 思思久久96热在精品国产 | 国产精品毛片99久久久久| 国产精品白浆一区二区免费看|