李敬濤 吳 超 李孝文 李軍現(xiàn) 金梅林*

1.山東新希望六和集團(tuán)有限公司健康管理部，山東青島266706；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢430070

豬流行性腹瀉病毒是造成規(guī)模養(yǎng)殖集團(tuán)經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重的三大疾病之一。豬場(chǎng)一旦受到病原感染，在區(qū)域內(nèi)通過空氣傳播容易擴(kuò)散到其他場(chǎng)線，特別是新建場(chǎng)成立之初，豬場(chǎng)員工處置疫情經(jīng)驗(yàn)不足，容易犯交叉污染的錯(cuò)誤，造成該病在豬場(chǎng)內(nèi)反復(fù)發(fā)生，影響生產(chǎn)節(jié)奏，多批生產(chǎn)母豬的35 d 受胎率及產(chǎn)仔性能下降。

1 臨床癥狀

2020年11月11日，內(nèi)蒙古某規(guī)?；肛i場(chǎng)反饋，產(chǎn)房哺乳仔豬出現(xiàn)嘔吐和水樣腹瀉癥狀，主要集中在7日齡以內(nèi)的哺乳仔豬，到筆者接診時(shí)已經(jīng)發(fā)病1 周，期間累積感染105 窩仔豬，共死淘880頭，死淘率約69%。臨床主要表現(xiàn)為新生仔豬在2～3日齡出現(xiàn)腹瀉（圖1），部分仔豬先吐奶后腹瀉，首窩發(fā)病后約24 h 整間產(chǎn)房幾乎全部發(fā)病，使用pH 試紙測(cè)定糞便pH 偏酸性，部分窩仔豬全身被稀糞污染（圖2），糞便腥臭味嚴(yán)重。發(fā)病仔豬從出現(xiàn)癥狀到死亡一般2～3 d，死亡仔豬外觀消瘦嚴(yán)重，眼球凹陷，肛門和后軀被稀糞污染，體表未見發(fā)紫和出血點(diǎn)，未見其他部位外觀異常。

圖1 仔豬水樣腹瀉

圖2 仔豬扎堆，全身油膩，被糞便污染

2 剖檢病變

臨床剖檢5 頭發(fā)病仔豬，主要表現(xiàn)小腸壁變?。▓D3），腸道內(nèi)充滿水樣內(nèi)容物，腸系膜乳糜管消失；胃內(nèi)充滿乳凝塊（圖4）；肝臟外觀赭紅色，質(zhì)地正常，未見明顯出血點(diǎn)或壞死點(diǎn)；脾臟輕度腫大，未見明顯的出血和梗死；心臟和腎臟等實(shí)質(zhì)臟器未見明顯的異常。

圖3 小腸壁變薄

圖4 胃內(nèi)充滿乳凝塊

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

采集新鮮的腸內(nèi)容，使用熒光定量PCR 檢測(cè)，大腸桿菌病原陰性。對(duì)腹瀉初期6 頭仔豬采集肛門拭子，送檢豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和輪狀病毒，結(jié)果顯示豬流行性腹瀉病毒均為陽(yáng)性（圖5），TGEV 和輪狀病毒均為陰性。將PEDV 陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物送檢測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與已知序列進(jìn)行差異性對(duì)比分析。

圖5 肛門拭子混樣均為PEDV 陽(yáng)性

4 綜合診斷

通過上述綜合分析，本次產(chǎn)房單元腹瀉診斷為流行性腹瀉病毒感染。

5 防控措施

5.1 組織返飼和滅活苗免疫

對(duì)于腹瀉剛發(fā)生6～12 h 的仔豬進(jìn)行安樂死，取小腸組織后放入自封袋密封，立即放入帶冰塊的泡沫箱中降溫并全程低溫保存，對(duì)每份小腸取少量?jī)?nèi)容物逐一用qPCR 方法測(cè)定PEDV 的毒量，篩選出強(qiáng)陽(yáng)性的病料。對(duì)PEDV 陽(yáng)性病料進(jìn)行合樣檢測(cè)，確保無CSFV、PRV、PRRSV 和PCV2 的污染。

將強(qiáng)陽(yáng)性的病料低溫下勻漿，勻漿過程中打5 s-停10 s-打5 s，讓勻漿始終處于低溫。每頭仔豬病料勻漿后生理鹽水定容至200 mL，返飼20 頭母豬，勻漿液儲(chǔ)存于4 ℃當(dāng)天使用，返飼前每1 000 mL 返飼液加入5 g 注射用阿莫西林鈉粉針劑。

每頭母豬逐頭飼喂勻漿液，1 個(gè)人在前提起料錘，1 個(gè)人在后將勻漿液打在飼料頂端，讓母豬最先采食。每天記錄不食、少食、發(fā)熱、腹瀉的母豬數(shù)量。

在返飼3 周后對(duì)于全群配懷舍母豬進(jìn)行滅活疫苗普免。

5.2 環(huán)境減毒

對(duì)提前斷奶的豬舍進(jìn)行嚴(yán)格洗欄，利用提前斷奶的時(shí)間充分延長(zhǎng)空欄期以滅活PEDV 病原，上床前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)空欄環(huán)境樣品的PEDV 病原。因豬場(chǎng)天然氣鍋爐沒能及時(shí)投入使用，白天空欄后環(huán)境溫度僅有6～7 ℃，第1 個(gè)正常斷奶批經(jīng)洗欄空欄后仍能從環(huán)境中檢測(cè)到PEDv 病原，也間接說明了環(huán)境溫度對(duì)于病原的滅活有至關(guān)重要的作用。對(duì)清空的產(chǎn)房進(jìn)行徹底的洗消，根據(jù)生產(chǎn)計(jì)劃盡可能保證空舍7 d。對(duì)于不清空的產(chǎn)房在走道撒生石灰，對(duì)于有腹瀉的產(chǎn)床第一時(shí)間用生石灰對(duì)稀糞進(jìn)行覆蓋清理。

1）配懷舍減毒。在確認(rèn)返飼成功后，對(duì)限位欄的糞道使用2%燒堿，用塑料噴壺每天2 次噴灑消毒，注意不要噴濺到母豬后軀以免造成灼傷。舍內(nèi)配種記錄表等記錄類表格封存，更換新的表格；掃把等不易消毒類物資，全部舍外焚燒；擋板、趕豬器、腳踏盆清洗干凈，2%火堿消毒；烯丙孕素、飼喂槍、藥品等，采用過硫酸氫鉀1∶200 擦拭消毒；儀器表面、配電箱表面，過硫酸氫鉀1∶200 擦拭消毒。

2）產(chǎn)房減毒。產(chǎn)房報(bào)表封存，換新的表格；文件夾清洗，2%火堿浸泡消毒。門把手/幕簾，擦拭干凈，2%火堿噴霧消毒。產(chǎn)房空舍和地溝沖洗，廠長(zhǎng)和獸醫(yī)雙方檢查合格，PEDV 檢測(cè)陰性。產(chǎn)房消毒程序：喜多凈1∶100+火堿2%，消毒2 次。烤燈過硫酸氫鉀1∶200，擦拭消毒。死豬箱、糞鏟清洗干凈，2%火堿消毒。

3）生活區(qū)減毒。床單、被罩、工作服、浴巾，過硫酸氫鉀1∶200 清洗，烘干1 h。電子類產(chǎn)品過硫酸氫鉀1∶200，擦拭消毒；地面清掃干凈，2%火堿消毒；竹制掃把和拖把，舍外焚燒；浴室拆除舊門簾，地毯，舍外焚燒；浴室內(nèi)外防滑墊，2%火堿浸泡2次，清水過1 遍；衣柜清理干凈，2%火堿浸濕消毒30 min；地面清掃干凈，鋼絲球清理污漬，尤其墻體角落和淋浴間角落；墻體表面、地面，2%火堿消毒，持續(xù)3 d。

5.3 其他措施

1）母豬延遲分娩。待產(chǎn)批母豬（14 號(hào)預(yù)產(chǎn)期）每天提前口服烯丙孕素5 mL/（頭·d），最少飼喂5 d，延長(zhǎng)孕期至117 d，保證待產(chǎn)批母豬充分建立免疫力保護(hù)待出生仔豬，本次收集的數(shù)據(jù)表明在通過烯丙孕素延長(zhǎng)妊娠日齡超過117 d 時(shí)會(huì)出現(xiàn)死淘率升高的情況，依據(jù)延長(zhǎng)妊娠日齡的不同會(huì)造成1%～4%死胎率的升高（正常死胎率平均基準(zhǔn)為4%）。

2）McRebel 管理。返飼后2 周內(nèi)上床的母豬單元實(shí)施McRebel 管理措施，實(shí)施分批哺乳管理，保證所有初生仔豬都能喝到初乳，單元內(nèi)窩間寄養(yǎng)在保證仔豬喝足初乳的前提下于初生后24 h 內(nèi)完成寄養(yǎng)，后續(xù)不再進(jìn)行調(diào)欄，除斷尾補(bǔ)鐵外所有仔豬操作移至10日齡以后，人員相對(duì)隔離，兩套水靴制，進(jìn)出豬舍更換水靴。

3）后備豬病料馴化。選擇腹瀉發(fā)生在24 h 內(nèi)、5日齡內(nèi)的仔豬，集中收集病料，每5 份采集1 份拭子樣品，標(biāo)記日期和記錄，-20 ℃冰箱冷凍保存，同時(shí)進(jìn)行病原檢測(cè)。后續(xù)再引種后備母豬時(shí)，在場(chǎng)外口服免疫，制作方法同上。

4）接產(chǎn)安排。分娩單元安排晚上單元接產(chǎn)，其余單元不要再安排巡欄人員，單棟單人負(fù)責(zé)。接產(chǎn)時(shí)，不進(jìn)欄操作，多用干燥粉，使用長(zhǎng)臂手套做分批哺乳，每欄更換長(zhǎng)臂手套，不再做處理臍帶、救假死豬等操作。

5）產(chǎn)房整體控溫控濕，環(huán)境溫度提高至24 ℃，控制濕度50%～60%。

5.4 發(fā)病原因分析

該場(chǎng)上次PED 疫情結(jié)束，發(fā)病單元沖欄減毒不干凈，沒有熟練的沖欄工，沖欄進(jìn)度緩慢，產(chǎn)房物品未全部消毒，存在殘留的病毒，導(dǎo)致病毒始終在豬舍內(nèi)循環(huán)。

產(chǎn)房3、4、5、6、7 單元母豬斷奶后未沖欄，母豬未刷洗屁股，產(chǎn)房環(huán)境差，產(chǎn)床糞便每日不清理，造成產(chǎn)床病毒量高。

產(chǎn)房管理人員離職，產(chǎn)房人員發(fā)現(xiàn)腹瀉未及時(shí)上報(bào)，采樣檢測(cè)，導(dǎo)致各棟舍人員、工具交叉感染。

5.5 早斷仔豬護(hù)理措施

1）0～3 d 飼養(yǎng)管理。充足飲水，每噸水中添加500 g 阿梅諾。待豬只休息4 h 后，當(dāng)天給予少量的飼料，粥料，每隔2 h 添加1 次飼料（盡量少食）。讓所有小豬能學(xué)會(huì)采食，60～80 g；第2 天同樣飼喂，目標(biāo)是80 g/（頭·d）；第3 天飼喂目標(biāo)是80～100 g，達(dá)到采食量標(biāo)準(zhǔn)；根據(jù)豬只個(gè)體大小添加適量的飼料。

2）4～7 d 飼養(yǎng)管理。正常巡視檢查豬舍，觀察仔豬的排便是否正常，是否拉稀。如有拉稀適當(dāng)調(diào)整飼喂量，添加粘桿菌素（細(xì)菌性）和硫酸安普霉素（病毒性）護(hù)理，注射恩諾沙星針劑。逐步添加干料10 g/頭豬只飼喂?jié)癜枇蠟橹?，給弱小豬勤換濕拌料飼喂，水料比為3∶1 逐步過渡。逐欄巡視，挑出弱小豬單獨(dú)飼養(yǎng)，對(duì)病豬進(jìn)行治療。

3）弱豬護(hù)理。對(duì)于采食過少、體重過?。?.5 kg以下）仔豬：溫開水+3%葡萄糖+1%奶粉+多維+飼料調(diào)制成糊狀的粥料（水和料比例為∶1）進(jìn)行飼喂，6～7次/d；前7 d 采取7×7 飼喂法，夜晚多增加一些飼料保證晚上采食量，逐漸過渡到自由采食，體重低的仔豬盡可能延長(zhǎng)飼喂?jié)癜枇系臅r(shí)間；對(duì)少數(shù)沒有學(xué)會(huì)吃料或一直不開口的仔豬使用奶瓶灌服奶粉，溫開水與奶粉比例為6∶1 稀釋后，灌服。

4）8～14 d 飼養(yǎng)管理。逐步過渡干料，保證足夠的飼料和干凈飲水供給。腦炎、瘸腿病弱豬增多，病弱豬及時(shí)挑出、護(hù)理：預(yù)留足夠的病弱豬欄，保持干燥，消毒處理，對(duì)腹瀉欄進(jìn)行調(diào)換或者病弱豬及時(shí)挑出護(hù)理。

6 小 結(jié)

筆者在本場(chǎng)發(fā)病1 周內(nèi)到場(chǎng)，通過臨床癥狀、剖檢病變和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確診為流行性腹瀉發(fā)病。在臨床剖檢與細(xì)菌性疾病鑒別過程中，乳糜管是否有奶線是非常重要的鑒別診斷的依據(jù)。流行性腹瀉等病毒性腹瀉會(huì)造成腸絨毛脫落，奶水無法通過腸系膜淋巴管吸收到腸系膜淋巴結(jié)，病毒性腹瀉屬于吸收障礙性腹瀉，無法被吸收的乳汁在腸道發(fā)酵，可能是導(dǎo)致糞便pH 偏酸性的原因之一。而大腸桿菌引起的腹瀉主要與大腸桿菌的毒素造成小腸上皮絨毛細(xì)胞分泌氯離子和碳酸氫根等離子有關(guān)，屬于滲出性腹瀉，而小腸絨毛吸收功能仍然存在，所以乳糜管內(nèi)會(huì)有奶線的存在。除此之外，區(qū)分哺乳仔豬腹瀉屬于細(xì)菌性還是病毒性感染可以通過糞便的pH值進(jìn)行細(xì)菌性和病毒性腹瀉類大體鑒別[1]。但隨著集團(tuán)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室的普及，使用熒光定量PCR 更快捷地進(jìn)行病原檢測(cè)，基本在4 h 內(nèi)完成檢測(cè)。

針對(duì)本次流行性腹瀉的發(fā)病，通過返飼后大約2 周的時(shí)間逐步控制發(fā)病，在返飼后3 周左右進(jìn)行滅活苗的加強(qiáng)免疫。雖然在免疫滅活苗前發(fā)病已經(jīng)逐步控制，但滅活苗的免疫對(duì)于提高經(jīng)過活毒暴露的母豬奶水中分泌型IgA 的水平非常有幫助。據(jù)報(bào)道，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)到的PEDV抗體可持續(xù)至少1年。免疫母豬的初乳和乳汁中的特異性IgG 抗體可保護(hù)仔豬直至大約2 周齡，以抵抗PEDV，但是免疫力的長(zhǎng)短取決于母豬抗體效價(jià)。由于豬黏膜免疫系統(tǒng)的特殊性，針對(duì)胃腸病原體的血清抗體的存在并不總是與保護(hù)相關(guān)。相反，對(duì)這些抗體的檢測(cè)僅能證明個(gè)體與傳染性微生物接觸。

初乳IgA 濃度比血清樣本的血清中和（SN）滴度更能反映PEDV 感染的保護(hù)作用。有規(guī)律地吮吸免疫母豬乳汁的仔豬正在不斷用乳汁中的IgA 抗體接種其腸腔，這一過程賦予被動(dòng)免疫力。仔豬通過口腔接觸到環(huán)境中的病原后，腸腔黏膜上的lgA抗體可以中和病原體，從而保護(hù)仔豬。返飼過后評(píng)估豬群初乳lgA 抗體的水平，更有利于了解豬群經(jīng)過返飼策略后是否對(duì)仔豬有保護(hù)力。