汪貫習(xí) 周縝 王悅 梁鳳 李洪波 徐穎婕

[摘要] 目的 探討低分子量褐藻多糖硫酸酯（LMWF）對(duì)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化（AS）作用。方法 選擇ApoE（-/-）雄性小鼠40只，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和治療組，每組10只。模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和治療組應(yīng)用高脂飼料喂養(yǎng)，對(duì)照組應(yīng)用普通飼料喂養(yǎng)。陽(yáng)性對(duì)照組和治療組小鼠分別給予普羅布考和LMWF 0.5 mL灌胃干預(yù)治療，對(duì)照組和模型組小鼠同步給予體積分?jǐn)?shù)0.02橄欖油0.5 mL灌胃。采用生物化學(xué)方法檢測(cè)小鼠血清三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）水平，油紅O染色和蘇木精-伊紅染色方法檢測(cè)動(dòng)脈內(nèi)膜粥樣硬化斑塊的面積和結(jié)構(gòu)，TUNEL法檢測(cè)動(dòng)脈內(nèi)膜細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果 與對(duì)照組比較，模型組小鼠血清TG、TC、LDL-C和ox-LDL水平顯著升高，而HDL-C顯著降低（F=21.98～114.31，P<0.05）;與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和治療組小鼠血清TG、TC、LDL和ox-LDL水平顯著降低，HDL水平顯著升高（P<0.05）;治療組小鼠TG、TC、LDL-C和ox-LDL水平明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組，而HDL-C水平明顯高于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.05）。治療組小鼠動(dòng)脈粥樣斑塊的面積較模型組顯著縮?。‵=595.39，P<0.01），動(dòng)脈內(nèi)膜結(jié)構(gòu)顯著改善（F=122.16，P<0.05），動(dòng)脈內(nèi)膜的細(xì)胞凋亡程度顯著降低（F=8 128.51，P<0.01）。結(jié)論 LMWF能調(diào)控ApoE（-/-）小鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂，抑制粥樣硬化斑塊的形成，減緩AS的發(fā)展。

[關(guān)鍵詞] 動(dòng)脈粥樣硬化;褐藻多糖硫酸酯;膽固醇，LDL;細(xì)胞凋亡;小鼠

[中圖分類號(hào)] R282.72

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A

[文章編號(hào)] 2096-5532（2022）01-0068-05

doi：10.11712/jms.2096-5532.2022.58.028

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是心腦血管疾病的病理學(xué)基礎(chǔ)[1]，AS發(fā)生發(fā)展涉及大量炎性細(xì)胞和細(xì)胞因子[2]，炎性細(xì)胞和細(xì)胞因子促進(jìn)了斑塊的形成[3]。低密度脂蛋白（LDL）滯留在血管內(nèi)膜下是AS的主要病理機(jī)制，富含膽固醇的載脂蛋白聚糖上的糖胺聚糖能夠通過(guò)LDL激活免疫應(yīng)答啟動(dòng)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)[4]。脂質(zhì)氧化作用可以導(dǎo)致具有生物活性的脂類釋放，其中的LDL顆粒可以被修飾成為氧化LDL（ox-LDL）[5]，引起內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂、炎性因子的釋放，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）遷移和泡沫細(xì)胞的形成，最終形成AS斑塊[6]。研究證實(shí)，心血管疾病病人血漿ox-LDL水平明顯升高，活性氧（ROS）的產(chǎn)生能夠?qū)е翷DL的氧化，而ox-LDL又能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞、VSMC和巨噬細(xì)胞中ROS的形成[7-8]。褐藻中提取的天然產(chǎn)物褐藻多糖硫酸酯，尤其是低分子量褐藻多糖硫酸酯（LMWF）具有眾多高效的生物活性[9]，其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞有一定的調(diào)控作用[10]。本文研究LMWF對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的ApoE（-/-）小鼠[11]血脂代謝和AS斑塊形成的影響，探討LMWF是否有抗AS的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

海藻提取物L(fēng)MWF樣品由中國(guó)科學(xué)院海洋研究所張全斌研究員提供，主要成分為高度硫酸化的α-L-巖藻糖和D-半乳糖及少量D-甘露糖、D-木糖、D-鼠李糖、D-葡萄糖、D-阿拉伯糖和糖醛酸[9]。SPF級(jí)7周齡ApoE（-/-）雄性小鼠40只，體質(zhì)量為20～24 g，北京華阜康生物科技有限公司提供，飼養(yǎng)于青島大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，室溫（22±2）℃、濕度（60±5）%，12 h /12 h明暗周期，自由飲食。標(biāo)準(zhǔn)高脂塊狀飼料，每100.00 g含脂肪21.00 g、膽固醇0.15 g。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

ApoE（-/-）小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為對(duì)照組（A組）、模型組（B組）、陽(yáng)性對(duì)照組（C組）和治療組（D組），每組10只。對(duì)照組：小鼠普通飼料喂養(yǎng)，0.5 mL橄欖油（體積分?jǐn)?shù)0.02）灌胃給藥;治療組：高脂飼料喂養(yǎng)，200 mg/kg LMWF（用體積分?jǐn)?shù)0.02橄欖油溶解至0.5 mL）溶液灌胃;陽(yáng)性對(duì)照組：高脂飼料喂養(yǎng)，200 mg/kg普羅布考（Probucol，用體積分?jǐn)?shù)0.02橄欖油溶解至0.5 mL）溶液灌胃給藥;模型組：高脂飼料喂養(yǎng)，體積分?jǐn)?shù)0.02橄欖油0.5 mL灌胃。各組給藥均隔日1次，連續(xù)16周。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.1 血脂檢測(cè) 給藥結(jié)束后第2天，100 g/L水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠，經(jīng)心臟取血1 mL，生化采血管收集，靜置3 h，以4 000 r/min離心10 min，分離血清。全自動(dòng)生化分析儀（AU 5800，貝克曼庫(kù)爾特有限公司）檢測(cè)血清三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平。

1.3.2 血清ox-LDL檢測(cè) 應(yīng)用ox-LDL ELISA試劑盒（Bio-Maide公司）檢測(cè)，按說(shuō)明書操作。每個(gè)樣品孔先加40 μL樣品稀釋液，后加10 μL樣品。每孔加50 μL顯色劑A和50 μL顯色劑B，于37 ℃避光靜置15 min。終止顯色反應(yīng)。以空白孔調(diào)零，Spectramax M5多功能酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處各孔吸光度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算ox-LDL濃度。

1.3.3 AS粥樣斑塊面積檢測(cè) 用油紅O染色方法。經(jīng)心臟取血后，每組隨機(jī)取小鼠5只，分別切取主動(dòng)脈1 cm，縱行剖開展平，置于40 g/L多聚甲醛固定2 h，流水沖洗，油紅O染色5 min，體積分?jǐn)?shù)0.60異丙醇分化5 s，蘇木精復(fù)染2 min。甘油明膠封固。光鏡下觀察AS斑塊位置，計(jì)算斑塊面積。

1.3.4 AS粥樣斑塊病理結(jié)構(gòu)觀察 采用蘇木精-伊紅（HE）染色方法。經(jīng)心臟取血后，每組取剩余小鼠5只，分別切取主動(dòng)脈1 cm，置40 g/L多聚甲醛固定2 h，流水沖洗后用OCT包埋，液氮速凍。冷凍切片機(jī)（HM 505E，德國(guó)美康有限公司）連續(xù)切片，厚度10 μm，貼于多聚賴氨酸處理的載玻片上。蘇木精染色5 min，鹽酸乙醇分化5 s，伊紅染色90 s。常規(guī)脫水、透明、封片。光鏡下觀察，粥樣斑塊呈紅褐色，觀察AS斑塊位置并計(jì)算斑塊面積。

1.3.5 細(xì)胞凋亡檢測(cè) 采用In Situ細(xì)胞凋亡試劑盒（羅氏有限公司）檢測(cè)，按說(shuō)明書方法操作。熒光顯微鏡（Olympus BX53，Japan）下450～500 nm波長(zhǎng)處觀察，凋亡細(xì)胞呈綠色熒光。隨機(jī)觀察5個(gè)視野，測(cè)定吸光度值，取均值，以其表示細(xì)胞凋亡情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料結(jié)果以[AKx-D]±s表示，多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK（Students-Newman-Keuls）法。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠血脂水平比較

各組小鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C水平比較，差異有顯著性（F=21.98～114.31，P<0.05），其中模型組TG、TC、LDL-C水平較對(duì)照組顯著升高，而HDL-C顯著降低（P<0.05）;陽(yáng)性對(duì)照組和治療組TG、TC和LDL-C水平較模型組均明顯降低，而HDL-C水平升高（P<0.05）;治療組小鼠TG、TC、LDL-C水平明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組，而HDL-C水平明顯高于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.05）。各組小鼠血清ox-LDL水平比較差異有顯著性（F=111.79，P<0.05），其中模型組ox-LDL水平較對(duì)照組顯著升高（P<0.05），而治療組與陽(yáng)性對(duì)照組血清ox-LDL水平較模型組均顯著降低，且治療組下降更為顯著（P<0.05）。見表1。

2.2 各組主動(dòng)脈AS斑塊面積比較

油紅O染色顯示，對(duì)照組小鼠主動(dòng)脈可見散在的橘紅色AS斑點(diǎn)，面積為（53±5）mm2;模型組出現(xiàn)明顯的大片狀A(yù)S斑塊，面積為（230±16）mm2;陽(yáng)性對(duì)照組的AS斑塊呈現(xiàn)條紋狀，面積為（116±10）mm2;治療組小鼠的AS斑塊呈散點(diǎn)狀，面積為（75±6）mm2。各組AS斑塊面積比較，差異有顯著性（F=595.39，P<0.01），其中治療組與陽(yáng)性對(duì)照組小鼠斑塊面積均較模型組減小（P<0.05），且治療組減小更為顯著（P<0.05）。見圖1。

2.3 各組主動(dòng)脈病理結(jié)構(gòu)比較

HE染色顯示，對(duì)照組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，未見明顯的病理改變;模型組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚、粗糙，出現(xiàn)明顯的紅褐色AS斑塊，斑塊面積為（165±25）μm2;治療組主動(dòng)脈內(nèi)膜變薄，斑塊面積為（68±5）μm2;陽(yáng)性對(duì)照組主動(dòng)脈內(nèi)膜斑塊面積為（93±11）μm2。治療組、陽(yáng)性對(duì)照組主動(dòng)脈內(nèi)膜粥樣斑塊面積與模型組比較均顯著性減?。‵=122.16，P<0.05），尤其是治療組動(dòng)脈內(nèi)膜相對(duì)光滑，粥樣硬化斑塊面積顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.01）。見圖2。

2.4 各組主動(dòng)脈內(nèi)膜細(xì)胞凋亡比較

熒光顯微鏡下觀察，對(duì)照組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑;模型組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜凹凸不平，出現(xiàn)凋亡細(xì)胞，血管壁內(nèi)膜處細(xì)胞凋亡尤為明顯;治療組與陽(yáng)性對(duì)照組小鼠動(dòng)脈壁的細(xì)胞凋亡熒光強(qiáng)度顯著減弱。對(duì)照組吸光度值為105±7，模型組為760±85，治療組為150±12，陽(yáng)性對(duì)照組為170±16，4組吸光度值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8 128.51，P<0.01），其中任意兩組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖3。

3 討 論

目前研究普遍認(rèn)為，AS是由遺傳和環(huán)境等多種危險(xiǎn)因素共同作用引起的疾病，高脂血癥、高血壓、肥胖、吸煙、年齡和糖尿病等是AS的傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素[12]。起初人們對(duì)AS的認(rèn)識(shí)只限于AS是脂質(zhì)堆積造成的動(dòng)脈管壁堵塞而已，但近年實(shí)驗(yàn)研究和臨床試驗(yàn)證明，炎癥反應(yīng)在AS及其并發(fā)癥中發(fā)揮重要作用。目前有多種學(xué)說(shuō)從不同角度探討了AS的發(fā)生機(jī)制和病理過(guò)程，例如炎癥學(xué)說(shuō)、氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)、脂質(zhì)滲入學(xué)說(shuō)、平滑肌突變學(xué)說(shuō)和內(nèi)皮損傷學(xué)說(shuō)等[13-15]。AS發(fā)生的起始階段，主動(dòng)脈、冠狀動(dòng)脈和腦動(dòng)脈等大動(dòng)脈部位脂質(zhì)堆積并持續(xù)增加，其分支點(diǎn)和彎曲區(qū)極易形成AS斑塊，循環(huán)的脂蛋白顆粒浸潤(rùn)至這些區(qū)域的動(dòng)脈管壁，干擾局部?jī)?nèi)皮細(xì)胞正常功能，導(dǎo)致脂質(zhì)及炎癥因子在動(dòng)脈內(nèi)膜堆積，促進(jìn)了AS斑塊的產(chǎn)生[16]。AS斑塊一旦破裂，會(huì)引起一系列急性臨床疾病的發(fā)生，如腦卒中和急性心肌梗死等，導(dǎo)致病人癱瘓或者死亡。

AS是心腦血管疾病的病理學(xué)基礎(chǔ)，其發(fā)生發(fā)展涉及大量炎性細(xì)胞和細(xì)胞因子。在AS早期，內(nèi)皮功能障礙和脂質(zhì)代謝紊亂會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞活化和細(xì)胞通透性的改變[4]。TG、TC、LDL-C和HDL-C是AS主要的臨床生化評(píng)價(jià)指標(biāo)，在AS的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有關(guān)鍵作用[7]。ApoE（-/-）純合子小鼠是被公認(rèn)的一種AS血管損傷模型，具有形成AS的基礎(chǔ)，經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)一定時(shí)間后，就會(huì)出現(xiàn)典型的AS癥狀體征、血生化及血管病理改變[17]。本研究應(yīng)用高脂飼料喂養(yǎng)ApoE（-/-）小鼠，結(jié)果顯示，模型組小鼠血清TG、TC和LDL-C水平較對(duì)照組均顯著升高，而HDL-C水平則顯著降低，說(shuō)明AS動(dòng)物模型構(gòu)建是成功的;治療組TG、TC和LDL-C水平較模型組均明顯降低，而HDL-C水平升高;治療組小鼠TG、TC、LDL-C水平明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組，而HDL-C水平明顯高于陽(yáng)性對(duì)照組，說(shuō)明LMWF具有與普羅布考同樣的降脂作用，且LMWF的降脂作用更為明顯。

在AS的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，內(nèi)皮細(xì)胞通透性改變，ox-LDL積累在內(nèi)皮細(xì)胞下，刺激單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致平滑肌細(xì)胞增生和遷移、血小板聚集、白細(xì)胞黏附和炎癥細(xì)胞因子的釋放等變化，促進(jìn)了AS發(fā)生發(fā)展過(guò)程[18]。其中，巨噬細(xì)胞吞噬過(guò)量產(chǎn)生的ox-LDL形成泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞以壞死核為中心沉積在壞死核周圍形成脂紋，最終發(fā)展為AS斑塊[19]。LMWF具有多種生物學(xué)活性如抗氧化、抗炎性、抗血栓以及保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能等[20]。本研究油紅O染色和HE染色結(jié)果均表明，模型組小鼠形成了明顯的AS斑塊;與模型組比較，治療組AS斑塊面積減少，說(shuō)明LMWF對(duì)AS小鼠主動(dòng)脈的損傷有明顯的抑制和改善作用，以此減緩AS的發(fā)生發(fā)展。提示LMWF可能通過(guò)抗氧化作用抑制AS的發(fā)生和發(fā)展。

游離的TG、TC、LDL-C和ox-LDL是強(qiáng)促炎性刺激因子，可引起更多巨噬細(xì)胞的聚集，脂質(zhì)（TG和TC）、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、鈣和壞死碎片構(gòu)成了AS斑塊的主要成分[21]。LMWF能夠調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝過(guò)程，抑制血管平滑肌細(xì)胞的遷移和內(nèi)膜增生，減弱內(nèi)皮細(xì)胞介導(dǎo)的血管生成過(guò)程而防治AS斑塊的形成[22]。本文的研究結(jié)果顯示，LMWF與傳統(tǒng)降脂藥物普羅布考的作用相似，能夠降低血清TG、TC、LDL-C和ox-LDL水平，提高HDL-C的水平，而且治療組小鼠TG、TC、LDL-C水平顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組，HDL-C水平顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組，提示LMWF可作為潛在的降脂藥物。細(xì)胞凋亡可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞死亡和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，凋亡的巨噬細(xì)胞會(huì)促進(jìn)脂紋的產(chǎn)生，最后形成AS斑塊[23-24]。本研究結(jié)果顯示，LMWF還能明顯抑制ApoE（-/-）小鼠動(dòng)脈壁內(nèi)膜的細(xì)胞凋亡，減少巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，減緩AS的發(fā)展。

綜上所述，LMWF能調(diào)控ApoE（-/-）小鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂，通過(guò)抗氧化機(jī)制，抑制細(xì)胞凋亡和粥樣硬化斑塊的形成，減緩AS的發(fā)展。

[參考文獻(xiàn)]

[1]AFROZ R， CAO Y N， ROSTAM M A， et al. Signalling pathways regulating galactosaminoglycan synthesis and structure in vascular smooth muscle： implications for lipoprotein binding and atherosclerosis[J]. Pharmacology & Therapeutics， 2018，187：88-97.

[2]TOUSOULIS D， OIKONOMOU E， ECONOMOU E K， et al. Inflammatory cytokines in atherosclerosis： current therapeutic approaches[J]. European Heart Journal， 2016，37（22）：1723-1732.

[3]LIANG W J， WANG Q， MA H， et al. Knockout of low molecular weight FGF2 attenuates atherosclerosis by reducing macrophage infiltration and oxidative stress in mice[J]. Cellular Physiology and Biochemistry， 2018，45（4）：1434-1443.

[4]BORN J， WILLIAMS K J. The central role of arterial retention of cholesterol-rich apolipoprotein-B-containing lipoproteins in the pathogenesis of atherosclerosis： a triumph of simplicity[J]. Current Opinion in Lipidology， 2016，27（5）：473-483.

[5]MOLLACE V， GLIOZZI M， MUSOLINO V， et al. Oxidized LDL attenuates protective autophagy and induces apoptotic cell death of endothelial cells： role of oxidative stress and LOX-1 receptor expression[J]. International Journal of Cardiology，2015，184：152-158.

[6]SUCIU C F， PRETE M， RUSCITTI P， et al. Oxidized low density lipoproteins： the bridge between atherosclerosis and autoimmunity. Possible implications in accelerated atherosclerosis and for immune intervention in autoimmune rheumatic disorders[J]. Autoimmunity Reviews， 2018，17（4）：366-375.

[7]KATTOOR A J， POTHINENI N V K， PALAGIRI D， et al. Oxidative stress in atherosclerosis[J]. Current Atherosclerosis Reports， 2017，19（11）：1-11.

[8]FRSTERMANN U， SESSA W C. Nitric oxide synthases： regulation and function[J]. European Heart Journal， 2012，33（7）：829-837.

[9]WANG J， ZHANG Q B， ZHANG Z S， et al. Antioxidant activity of sulfated polysaccharide fractions extracted from Laminaria japonica[J]. International Journal of Biological Macromolecules， 2008，42（2）：127-132.

[10]ZHAO X， DONG S Z， WANG J F， et al. A comparative stu-dy of antithrombotic and antiplatelet activities of different fucoidans from Laminaria japonica[J]. Thrombosis Research， 2012，129（6）：771-778.

[11]OHTA H， WADA H， NIWA T， et al. Disruption of tumor necrosis factor-alpha gene diminishes the development ofatherosclerosis in ApoE-deficient mice[J]. Atherosclerosis， 2005，180（1）：11-17.

[12]李靚，謝巍，姜志勝，等. 我國(guó)動(dòng)脈粥樣硬化基礎(chǔ)研究近三年進(jìn)展[J]. 中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志， 2015，23（11）：1182-1188.

[13]張運(yùn). 關(guān)于動(dòng)脈粥樣硬化（AS）的新治療靶點(diǎn)[J]. 醫(yī)學(xué)研究雜志， 2011，40（6）：1-3.

[14]WONG B W， MEREDITH A， LIN D， et al. The biological role of inflammation in atherosclerosis[J]. Canadian Journal of Cardiology， 2012，28（6）：631-641.

[15]HANSSON G K， HERMANSSON A. The immune system in atherosclerosis[J]. Nature Immunology， 2011，12（3）：204-212.

[16]PANT S， DESHMUKH A， GURUMURTHY G S， et al. Inflammation and atherosclerosis—revisited[J]. Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics， 2014，19（2）：170-178.

[17]魯曉麗，楊文，徐璐，等. ApoE-/-小鼠的繁殖與鑒定[J]. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)， 2016，33（1）：29-32，37.

[18]FENG Z B， YANG X F， ZHANG L， et al. Ginkgolide B ameliorates oxidized low-density lipoprotein-induced endothelial dysfunction via modulating Lectin-like ox-LDL-receptor-1 and NADPH oxidase 4 expression and inflammatory cascades[J]. Phytotherapy Research： PTR， 2018，32（12）：2417-2427.

[19]WANG M Y， MONTICONE R E， MCGRAW K R. Proinflammatory arterial stiffness syndrome： a signature of large arterial aging[J]. Journal of Vascular Research， 2018，55（4）：210-223.

[20]YANG W Z， YU X F， ZHANG Q B， et al. Attenuation of streptozotocin-induced diabetic retinopathy with low molecular weight fucoidan via inhibition of vascular endothelial growth factor[J]. Experimental Eye Research， 2013，115：96-105.

[21]XU Y J， XU J， GE K L， et al. Anti-inflammatory effect of low molecular weight fucoidan from Saccharina japonica on atherosclerosis in apoE-knockout mice[J]. International Journal of Biological Macromolecules， 2018，118（Pt A）：365-374.

[22]MATOU S， HELLEY D， CHABUT D， et al. Effect of fucoidan on fibroblast growth factor-2-induced angiogenesis in vitro[J]. Thrombosis Research， 2002，106（4-5）：213-221.

[23]OSONOI Y， MITA T， AZUMA K， et al. Defective auto-phagy in vascular smooth muscle cells enhances cell death and atherosclerosis[J]. Autophagy， 2018，14（11）：1991-2006.

[24]XU Y J， ZHU W L， WANG T T， et al. Low molecule weight fucoidan mitigates atherosclerosis in ApoE（-/-） mouse model through activating multiple signal pathway[J]. Carbohydrate Polymers， 2019，206：110-120.

（本文編輯 黃建鄉(xiāng)）

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