周文蘭

（江蘇省蘇州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心，江蘇 蘇州 215104）

流動分析儀測定土壤全磷含量主要是利用蠕動泵將待測樣和試劑定量輸送到檢測儀器中，并按照順序加入相應管路中，由氣泡分隔為不同的獨立小片段。試劑經(jīng)過比色檢測后，計算機會自動處理信號，并通過計算機軟件對數(shù)據(jù)構(gòu)建標準曲線，整理、歸納、分析數(shù)據(jù)，并得出數(shù)據(jù)報告。流動分析儀具有較強的自動化功能，加入待測樣和試劑的時間較為準確，并且對溫度、顯色時間、顯色反應等控制程度較高，極大地減少了人工失誤的問題，保證測定數(shù)據(jù)的準確性。

1.常用流動分析法

1.1 連續(xù)流動分析法

連續(xù)流動分析方法反應過程如下：首先，利用取樣器吸取適量試樣，并將試樣放入分析儀中，每個試劑均以手工方法在適當時間和點位加入。其次，將每個樣品分割為若干樣品片段，將試劑與試樣放入管路進行晃動使其充分混合。最后，將試劑放入檢測模塊中，在比色皿中對實際進行比色處理，并使用儀器記錄信號變化信息，通過計算機自動計算實際濃度值。

利用連續(xù)流動分析法測定土壤全磷含量需要進行加熱、曲線配置、混合、預稀釋等步驟，試劑分離過程的溶劑萃取、透析膜透析等步驟可以在流動分析儀器上進行。連續(xù)流動分析儀會自動抽取樣品，然后將樣本自動加入反應模塊中，并通過螺旋管將試劑與樣品片段進行充分混合。

1.2 流動注射分析法

流動注射分析法反應過程如下：首先，將試劑放入儀器中，并以的流速進行連續(xù)流動。在分析過程中工作人員需要在分析系統(tǒng)中加入適量的實際片段流，在試劑經(jīng)過反應管道時，試劑與試樣會相互混合，并產(chǎn)生化學反應。其次，將溶劑放入檢測器中，通過分光光譜測定溶劑吸光度，并使用儀器記錄不同時間段的信息號變化。

利用流動注射分析法檢測土壤全磷含量具有分析時間短、效率高，結(jié)果準確的優(yōu)勢。由于流動分析系統(tǒng)管路一般較細，因此樣本中的細小顆粒會堵塞系統(tǒng)管路，在測定前需要對樣本進行過濾處理。

1.3 順序注射分析法

順序注射分析技術(shù)是基于流動注射分析技術(shù)研發(fā)的一種新型技術(shù)。順序注射分析技術(shù)反應過程如下：首先，將選擇閥與試劑端、試樣端相連接，將試劑加入儀器中以一定流速連續(xù)流動。其次，在選擇閥中加入適量試樣，利用儲存罐將選擇閥與旋轉(zhuǎn)蠕動泵相連接，一般蠕動泵可以反向旋轉(zhuǎn)或者正向旋轉(zhuǎn)，當試樣經(jīng)過反應管道時會與試劑相互融合，并產(chǎn)生化學反應。最后，將溶液放入檢測儀中，通過分光光度測定溶液吸光度，并使用儀器記錄不同時間信號變化。

流動注射分析法與連續(xù)流動分析法相比較，后者靈敏度較高，且峰高穩(wěn)定，使用連續(xù)流動分析化可以進行復雜化學反應。此外，連續(xù)流動分析儀較為穩(wěn)定，使用試劑量較少，適合對單數(shù)較多的樣品進行測量，系統(tǒng)管路較寬發(fā)生堵塞概率較低，使用該儀器進行土壤全磷含量進行測定具有反應快、效果高的優(yōu)勢。因此，連續(xù)流動分析儀在元素含量檢測實驗中應用較多。

2.流動分析儀快速測定土壤全磷含量

流動分析儀快速測定土壤全磷含量的主要原理是基于磷鉬藍反應。磷鉬藍反應是在一聽條件的銻離子和酸堿度環(huán)境下，鉬酸銨與磷酸根形成銻磷鉬混合雜多酸，被還原劑抗壞血酸還原為磷鉬藍，然后通過比色測定土壤全磷含量。流動分析儀在設(shè)置完成之后，即可全自動測定土壤全磷含量，通過相應管道注入試劑以及消解液，使全磷顯色液酸堿度滿足反應條件。

2.1 實驗儀器

電子分析天平、流動分析儀、紫外分光光度計、馬弗爐、烘箱、高溫電爐。

2.2 實驗法方法

2.2.1 土壤樣品消解。稱取適量標準土樣和土壤樣品放入鎳坩堝中，加入2滴無水乙醇將土樣潤濕，然后在土樣中加入2g氫氧化鈉。將坩堝置于高溫電爐上進行加熱，待土樣中的氫氧化鈉固體融化后，將坩堝置于馬弗爐上進行加熱并加蓋，將溫度保持在400℃加熱20分鐘，然后繼續(xù)加熱將溫度保持在720℃持續(xù)45分鐘。加熱完畢后將坩堝取下溫度降至室溫，將溶液放入容量瓶。在坩堝中加入10毫升蒸餾水，并將其置于高溫電爐上進行低溫加熱，待坩堝中熔塊溶解完后使用8毫升濃度為4.5的硫酸溶液清洗坩堝內(nèi)部及蓋子，并用熱水沖刷，清洗物均加入容量瓶中。在容量瓶中加入1:1濃鹽酸5滴，溶液冷卻后，水溶液進行定容?？瞻讓φ战M不加入土壤，重復上述操作。

2.2.2 方法回收率實驗。將土壤樣本分為兩組，在兩組土樣中各稱取0.2g土壤，共稱取8組。在4組土樣中加入0.5毫升磷酸二氫鉀溶液，另外4組土樣中加入0.25毫升磷酸二氫鉀，將8組土樣放入烘箱中烘干，并加入2地無水乙醇將土樣潤濕，然后加入2g氫氧化鈉，重復加熱消解步驟?；厥章使綖椋喝谆厥章?（加標土壤磷含量-樣品土壤磷含量）/加標土壤磷含量×100%。

2.2.3 流動分析儀

2.2.3.1 試劑。進樣清洗液（氯化鈉58.5克、5.3毫升硫酸，定容至1000毫升）、氫氧化鈉（1000毫升水中加入12可氫氧化鈉）、系統(tǒng)清洗液（250毫升去離子水中加入0.5克硫酸鈉）、鉬酸銨溶液（鉬酸銨1克、酒石酸銻鉀0.05克、硫酸6.5毫升，定容至100毫升），抗壞血酸溶液（100毫升水中加入1.5克抗壞血酸）。

2.2.3.2 儀器條件。流動分析儀流速每小時60個，清洗液比例為3:1，樣品進樣時間為48秒，儀器清洗時間為24s，流動分析儀自動設(shè)計漂移校正和基線，基線自動參比為5%，濾光片波長660納米。若土樣中全磷含量地域每升5毫克，則選擇低濃度管吸取樣品。

2.2.3.3 流動分析儀模塊管理。圖1為流動分析儀10個管路為空氣、氫氧化鈉、水、鉬酸銨溶液、清洗液、抗壞血酸溶液、消解液進樣。

圖1 流動分析儀模塊管路

2.2.3.4 標準曲線建立。分別抽取0、0.25、1.00、0.1、0.75、1.25、1.50、1.75毫升磷標準溶液，并將消解空白對照組溶液定容至25毫升，磷溶液配制濃度為0、1.00、3.00、5.00、2.00、4.00、6.00、7.00毫升標準溶液，經(jīng)過檢測，構(gòu)建土壤全磷標準曲線：y=1.001x-0.007（R2=0.9998）

2.2.4 鉬銻抗比色法

2.2.4.1 試劑。鉬銻抗顯色劑（水中加入硫酸溶液，攪拌混合冷卻至室溫，倒入鉬酸銨水溶液中，并加入酒石酸銻鉀溶液，定容至1升后即為鉬銻抗溶液。在實驗開始前在鉬銻抗溶液中加入抗壞血酸，混合均勻即為顯色劑）、氫氧化鈉、硫酸、2，4一二硝基酚。

在構(gòu)建學習共同體時，應該遵循“組內(nèi)異質(zhì)，組間同質(zhì)”的原則，以學習者特征分析數(shù)據(jù)為依據(jù)，以促進溝通交流為目的，從而為課堂活動的順利展開打下基礎(chǔ)。

2.2.4.2 標準曲線建立。分別提取0、0.50、2.00、0.25、1.00、3.00、4.00、5.00毫升磷標準溶液，加入空白對照組溶液配置磷溶液濃度為0、0.20、0.80、0.10、0.40、1.20、1.60、2.00毫升標準溶液。加入2，4一二硝基酚，攪拌均勻后加速滴加入氫氧化鈉，溶液逐漸變?yōu)榈S色后，加入硫酸直至溶液呈透明無色狀態(tài)，再加入少量氫氧化鈉溶液，這時溶液會逐漸變?yōu)榈S色。加入顯色劑，將溶液定容至25毫升，搖晃均勻，將溶液靜置40分鐘，然后利用紫外分光光度計測量波長，并構(gòu)建土壤全磷曲線：y=1.801x-0.0032（R2=0.9998）

2.2.4.3 抽取。去一定量的土壤消解液，調(diào)整溶液酸堿度，并加入顯色劑，進行溶液和檢測。

2.3 數(shù)據(jù)分析

土壤全磷測定實驗采用計算機對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和繪制圖表，分析雙樣本-t檢驗均值，通過直線方式對參數(shù)進行回歸發(fā)內(nèi)心，檢測系數(shù)顯著性。土壤全磷測定實驗中選擇3組土壤，并對其進行重復測定。測量值Xi平均值為土壤全磷含量估計值，標準偏差公式為：

2.4 結(jié)果與分析

2.4.1 流動分析儀與鉬銻抗比色法比較。由圖2分析得出，鉬銻抗比色法與流動分析儀對11個樣本進行全磷含量測定，每個樣本消解液均進行3次測定，測定得出每千克土壤全磷含量約為0.19～0.88、0.19～8.83克，鉬銻抗比色法與流動分析儀測定的每千克土壤全磷含量均值約為0.408、0.414克。

圖2 流動分析儀與鉬銻比色法測定土壤全磷含量比較

從表1中得出，兩種測定結(jié)果經(jīng)過t值檢驗過后，p=0.525（T≤t），兩組數(shù)值均沒有明顯差異。鉬銻抗比色法與流動分析儀測定土壤全磷含量在經(jīng)過相關(guān)性分析后，發(fā)現(xiàn)兩者呈線性相關(guān)，兩者相關(guān)系數(shù)為r=0.99。從圖3中得出，兩種全磷測定方法結(jié)果直線方程為：y=1.0606x-0.0191

表1 流動分析法與鉬銻比色法土壤含量t檢驗

圖3 流動分析儀和鉬銻抗比色法測定土壤全磷含量相關(guān)分析

2.4.2 流動分析儀測定結(jié)果準確性與精密度分析。通過標準加入法對回收率進行檢驗。加標土壤樣本在消解后，采用流動分析儀分別檢測3次。從表2可以得出，流動分析儀對土壤中全磷含量回收率測定結(jié)果為98%～102%。在相同環(huán)境下，利用流動分析儀對土壤全磷含量分別測定5次，結(jié)果標準差為1.2%～2.0，相關(guān)分析如表3。

表2 流動分析儀測定土壤全磷加標回收率結(jié)果

表3 流動分析儀測定土壤全磷含量重復性試驗

2.5 討論

利用流動分析儀對土壤全磷含量測定時間鉬銻抗比色法測定時間短，且不需要實驗人員配置試劑和設(shè)計儀器參數(shù)；鉬銻抗比色法測定土壤全磷含量需要實驗人員配置試劑、調(diào)節(jié)酸堿度、抽取待測液、定容、比色檢測等，人工勞動量較大。與鉬銻抗比色法相比，流動分析儀測定效率更高，人工、材料成本較低，可以避免人工操作出現(xiàn)的失誤情況，檢測結(jié)果較為準確。

3.結(jié)論

土壤全磷含量是反應土壤肥力的基本標準之一。流動分析儀較高的自動化程度極大地提高了土壤全磷含量測定效果，同時也可以降低實驗人員出現(xiàn)失誤的情況，適用于樣品數(shù)量較多的檢測分析。但流動分析儀對土壤全磷含量的測定，主要是根據(jù)土壤消解特性以及磷鉬藍比色法具體要求來確定檢測條件，因此測定技術(shù)具有專一性。