◎ 徐 楓，艾 萍，金 浩，趙 詠

（1.錦州市疾病預(yù)防控制中心，遼寧 錦州 121000；2.錦州市第二醫(yī)院，遼寧 錦州 121000；3.錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧 錦州 121000）

微生物檢驗(yàn)是疾控系統(tǒng)檢驗(yàn)工作的重要部分，包括對食品安全事故致病因子、生活飲用水、公共場所的空氣、公用物品、醫(yī)院消毒效果、病原菌檢驗(yàn)、抗原抗體檢驗(yàn)和分子生物學(xué)檢驗(yàn)等多個(gè)項(xiàng)目。由于微生物種類繁多，體積微小，適應(yīng)性強(qiáng)，培養(yǎng)步驟煩瑣，核酸檢驗(yàn)易污染，加之取材和檢驗(yàn)方法的問題，對微生物檢驗(yàn)質(zhì)量的影響很大，為保證微生物檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，必須充分考慮影響微生物檢驗(yàn)質(zhì)量的因素并加以控制。

影響微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量因素有管理體系、環(huán)境設(shè)施、儀器設(shè)備、檢驗(yàn)人員、培養(yǎng)基和試劑、標(biāo)準(zhǔn)菌株、樣品采集運(yùn)輸和保存、檢驗(yàn)方法、質(zhì)量控制及報(bào)告審核等，管理控制好這些影響因素，是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的保障。

1 管理體系

按照《檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定能力評價(jià) 檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)通用要求》（RB/T 214—2017）和《食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定條件》建立實(shí)驗(yàn)室管理體系，編制體系文件，制定工作流程及各部門和人員的職責(zé)，嚴(yán)格按照管理體系文件的要求運(yùn)行，在人、機(jī)、料、法、環(huán)和測等方面進(jìn)行控制。

2 環(huán)境設(shè)施

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和設(shè)施是影響微生物檢驗(yàn)質(zhì)量的重要因素，因此成為關(guān)鍵管理內(nèi)容。針對實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)，要求滿足國家制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[1]。實(shí)驗(yàn)室布局要合理，采用由清潔區(qū)到污染區(qū)的單一工作流程，避免相鄰工作區(qū)域的相互影響，采取有效措施，做好相鄰工作區(qū)域的隔離。有避光要求的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取物理屏障措施，要具備雙路供電設(shè)施或備用電源，防止檢驗(yàn)過程中斷電而影響實(shí)驗(yàn)。根據(jù)需要設(shè)置無菌室、潔凈室、生物安全實(shí)驗(yàn)室，做好無菌室、潔凈室、生物安全實(shí)驗(yàn)室的潔凈度監(jiān)控，保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。

3 儀器設(shè)備

應(yīng)建立儀器設(shè)備檔案，一臺一檔。對檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性有影響的儀器設(shè)備在使用前應(yīng)采用核查、檢定或校準(zhǔn)等方式進(jìn)行溯源。按照《中華人民共和國計(jì)量法》的要求，強(qiáng)制檢定的儀器設(shè)備必須按照規(guī)定的周期進(jìn)行檢定，強(qiáng)制檢定目錄外的儀器設(shè)備要進(jìn)行校準(zhǔn)，儀器設(shè)備的檢定/校準(zhǔn)必須選擇具備資質(zhì)的機(jī)構(gòu)進(jìn)行。根據(jù)儀器設(shè)備特性，定期對所用儀器設(shè)備進(jìn)行期間核查，保持儀器設(shè)備的穩(wěn)定性。重要的大型儀器設(shè)備要由專人操作，授權(quán)上崗。

在儀器設(shè)備使用時(shí)，要填寫使用記錄，以便出現(xiàn)問題時(shí)，可以溯源。編寫儀器設(shè)備的操作規(guī)程，嚴(yán)格按照規(guī)程操作，制定儀器設(shè)備維護(hù)計(jì)劃，定期維護(hù)。對于出現(xiàn)故障的儀器設(shè)備應(yīng)及時(shí)進(jìn)行維修，待維修測試合格后才可再次使用[2]。

4 檢驗(yàn)人員

檢驗(yàn)人員是微生物檢驗(yàn)工作開展的直接實(shí)施者、參與者，其專業(yè)水平與檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性關(guān)系密切[3]。要求檢驗(yàn)人員應(yīng)具有相應(yīng)的微生物專業(yè)教育或培訓(xùn)經(jīng)歷，具備相應(yīng)的資質(zhì)，能夠理解并正確實(shí)施檢驗(yàn)，掌握實(shí)驗(yàn)室生物安全操作和消毒知識，所以必須對人員的能力進(jìn)行確認(rèn)，授權(quán)上崗。有計(jì)劃地對新上崗和轉(zhuǎn)崗人員進(jìn)行監(jiān)督，使其掌握正確的操作方法。定期進(jìn)行新知識、新方法的培訓(xùn)，提高人員的技術(shù)水平。優(yōu)秀的檢驗(yàn)人員，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)并糾正實(shí)驗(yàn)過程中的不利因素，對各種實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆治?，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

微生物檢驗(yàn)工作具有操作復(fù)雜、技術(shù)難度高的特點(diǎn)，檢驗(yàn)人員必須具有較強(qiáng)的責(zé)任心、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度、豐富的專業(yè)知識以及熟練的操作技能。在檢驗(yàn)工作中，能夠意識到檢驗(yàn)操作的重要性，并且嚴(yán)格按照相關(guān)的規(guī)范要求和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，從而減少操作因素的影響。與此同時(shí)，微生物檢驗(yàn)人員還應(yīng)該不斷學(xué)習(xí)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、微生物學(xué)、分子生物學(xué)，不僅要增強(qiáng)專業(yè)理論知識，還要通過技能培訓(xùn)，提高專業(yè)操作能力。檢驗(yàn)人員在上崗前，必須經(jīng)過資格考試，確保持證上崗。除此之外，還要鼓勵(lì)檢驗(yàn)人員參加培訓(xùn)班、進(jìn)修、交流會(huì)等，不斷學(xué)習(xí)新型的微生物檢驗(yàn)技術(shù)。

5 培養(yǎng)基和試劑

培養(yǎng)基和試劑的優(yōu)劣直接影響檢驗(yàn)質(zhì)量，應(yīng)在源頭對其進(jìn)行控制。建立供應(yīng)商檔案，確定其資質(zhì)，并定期對供應(yīng)商進(jìn)行評價(jià)，選擇產(chǎn)品質(zhì)量好、企業(yè)信譽(yù)高的供應(yīng)商[4]。

采購的培養(yǎng)基和試劑要通過驗(yàn)收，驗(yàn)收包括符合性驗(yàn)收和技術(shù)驗(yàn)收。符合性驗(yàn)收應(yīng)驗(yàn)收培養(yǎng)基和試劑的品名、規(guī)格、等級、生產(chǎn)日期、保質(zhì)期、成分、包裝、儲(chǔ)存條件和合格證明等。技術(shù)驗(yàn)收要通過陽性、陰性菌株進(jìn)行對照實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷該培養(yǎng)基和試劑是否滿足標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)規(guī)范的要求，培養(yǎng)基和試劑經(jīng)驗(yàn)收合格后方可投入使用。

6 標(biāo)準(zhǔn)菌株

標(biāo)準(zhǔn)菌株是在培養(yǎng)基技術(shù)驗(yàn)收和陰陽性對照時(shí)需要使用的，所以標(biāo)準(zhǔn)菌株的生物學(xué)特性非常重要，是判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果和培養(yǎng)基合格與否的依據(jù)。采購的標(biāo)準(zhǔn)菌株要通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其應(yīng)具有的生物學(xué)特性，同時(shí)還要做好菌株的管理工作。標(biāo)準(zhǔn)菌株由專人保管，雙人雙管雙鎖，保管人員應(yīng)接受過專業(yè)培訓(xùn)，有足夠的菌株保藏經(jīng)驗(yàn)。菌株保藏管表面應(yīng)粘貼標(biāo)簽，標(biāo)簽上注明菌株名稱、菌株號、保藏日期、傳代次數(shù)等。保藏的菌株要定期傳代，檢查菌株的形態(tài)特征、變異和污染情況。每轉(zhuǎn)種三代做一次鑒定，檢查菌株是否發(fā)生變異，并做詳細(xì)記錄。菌株傳代時(shí)，要標(biāo)上傳代的次數(shù)、傳代的日期、所用的培養(yǎng)基。另外，菌株要有使用和保藏記錄。

實(shí)驗(yàn)后的菌株、儲(chǔ)存經(jīng)確認(rèn)或驗(yàn)證不合格的菌株、超過保藏期限的菌株要進(jìn)行銷毀，銷毀時(shí)必須按照菌株的危害程度嚴(yán)格進(jìn)行個(gè)體防護(hù)后，由兩人共同操作，同時(shí)填寫壓力蒸汽滅菌器使用記錄和菌株銷毀記錄。

7 樣品采集保存和運(yùn)輸

樣品采集過程中若操作不標(biāo)準(zhǔn)、不規(guī)范，無法確保采集樣品的有效性，影響檢測結(jié)果[5]。必須嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行采樣，每件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)單位的要求，采樣過程中保證無菌。采樣后做好標(biāo)識，送檢樣品的標(biāo)識要求具有唯一性，填寫好樣品名稱、樣品編號、采樣時(shí)間、采樣地點(diǎn)、批號、數(shù)量和保存條件等信息。

根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康摹⑹称诽攸c(diǎn)、批量、檢驗(yàn)方法、微生物的危害程度和食品安全相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定等確定采樣方案。發(fā)生食品安全事故時(shí)，如果食品安全事故是由批量生產(chǎn)加工的食品污染導(dǎo)致的，按照二級采樣或三級采樣法采集，重點(diǎn)采集同批次食品樣品。如果是由餐飲單位或家庭烹調(diào)加工的食品導(dǎo)致的，重點(diǎn)采集現(xiàn)場剩余食品樣品，以滿足食品安全事故病因判定和病原確證的要求。

運(yùn)輸過程中保護(hù)好樣品，避免樣品的玷污、變質(zhì)和損壞。對于高致病性病原微生物的樣品應(yīng)按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》執(zhí)行。

保留的樣品，粘貼好留樣標(biāo)識，保存在清潔、干燥、避光的環(huán)境中，對保存環(huán)境有要求的樣品，應(yīng)監(jiān)控環(huán)境溫濕度，填寫環(huán)境監(jiān)控記錄。不同樣品要分區(qū)存放，避免混淆。

8 檢驗(yàn)方法

檢驗(yàn)方法直接影響檢出率的高低和結(jié)果的準(zhǔn)確性。檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)優(yōu)先使用國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法，并定期查新，保證使用的標(biāo)準(zhǔn)是現(xiàn)行有效的。在使用新標(biāo)準(zhǔn)方法前，要進(jìn)行方法驗(yàn)證，驗(yàn)證內(nèi)容包括方法所涉及的環(huán)境設(shè)施、人員技能、儀器設(shè)備、培養(yǎng)基和試劑等必須滿足新標(biāo)準(zhǔn)方法的要求。對方法掌握的熟練程度將影響檢驗(yàn)結(jié)果，要求定期采用盲樣考核、加標(biāo)試驗(yàn)等方法進(jìn)行考核，以便能正確熟練掌握檢驗(yàn)方法。

9 質(zhì)量控制

質(zhì)量控制是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的重要因素，質(zhì)量控制包括內(nèi)部質(zhì)量控制和外部質(zhì)量控制。內(nèi)部質(zhì)量控制可采用定期使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、定期使用經(jīng)過檢定或校準(zhǔn)的具有溯源性的替代儀器、對設(shè)備的功能進(jìn)行檢查、運(yùn)用工作標(biāo)準(zhǔn)與控制圖、使用相同或不同方法進(jìn)行重復(fù)檢驗(yàn)檢測、保存的樣品再次檢驗(yàn)檢測、分析樣品不同結(jié)果的相關(guān)性、對報(bào)告數(shù)據(jù)進(jìn)行審核、盲樣檢驗(yàn)檢測、實(shí)驗(yàn)過程的空白對照、陰陽對照及加標(biāo)試驗(yàn)等進(jìn)行監(jiān)控。外部質(zhì)量控制可采用參加權(quán)威機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證或?qū)嶒?yàn)室間比對等手段。為保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，可以多途徑多手段進(jìn)行質(zhì)量控制[6]。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)工作需要，制定質(zhì)量控制計(jì)劃，通過質(zhì)量控制活動(dòng)，不斷提高自身的檢驗(yàn)?zāi)芰Α?/p>

內(nèi)部質(zhì)量控制是判斷實(shí)驗(yàn)是否成立的重要依據(jù)，是保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的手段，通過內(nèi)部質(zhì)量控制，可以保證實(shí)驗(yàn)的可信度和質(zhì)量。以下以某醫(yī)院的微生物檢驗(yàn)質(zhì)量控制為例，分析質(zhì)量控制對檢驗(yàn)結(jié)果的影響。

某醫(yī)院發(fā)生患者術(shù)后感染，對無菌包進(jìn)行檢驗(yàn)，是由于無菌包滅菌不合格造成，更換滅菌合格的無菌包，杜絕了院內(nèi)感染的發(fā)生。質(zhì)量控制對檢驗(yàn)結(jié)果的影響如表1所示。

表1 質(zhì)量控制對檢驗(yàn)結(jié)果的影響表

通過內(nèi)部質(zhì)量控制，可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)過程中存在的問題，對與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的各個(gè)因素（包括培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)菌株、培養(yǎng)箱、無菌室等）進(jìn)行分析，查找原因，及時(shí)糾正存在的問題，保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和結(jié)果的準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該積極參與實(shí)驗(yàn)室間比對活動(dòng)、能力驗(yàn)證活動(dòng)，從而科學(xué)評估實(shí)驗(yàn)室在本領(lǐng)域的技術(shù)地位，明確差距和不足。通過不斷的改進(jìn)，提高實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)水平。

10 報(bào)告審核

建立報(bào)告審核制度，明確各級審核人員職責(zé)，履職盡責(zé)，保證發(fā)出報(bào)告的準(zhǔn)確性。如表2所示，錦州市疾病預(yù)防控制中心在2020年，經(jīng)過授權(quán)簽字人審核，發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤報(bào)告81份，全部改正，準(zhǔn)確無誤發(fā)出檢驗(yàn)檢測報(bào)告。

表2 2020年審核前后檢驗(yàn)檢測報(bào)告質(zhì)量問題分析表

錦州市疾病預(yù)防控制中心的質(zhì)量目標(biāo)是檢驗(yàn)檢測報(bào)告的一次交驗(yàn)合格率≥97%，經(jīng)過對檢驗(yàn)檢測報(bào)告的審核，使各科室都能達(dá)到中心的質(zhì)量目標(biāo)，為客戶提供真實(shí)、可靠、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)和結(jié)果。

除了控制好以上各種影響因素外，還需建立提高微生物檢驗(yàn)質(zhì)量的規(guī)章制度。規(guī)范的、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)?、完整的質(zhì)量管理制度，是促進(jìn)微生物檢驗(yàn)順利進(jìn)行的基礎(chǔ)和前提，也是提高檢驗(yàn)質(zhì)量的保障。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該根據(jù)自身情況，進(jìn)一步完善檢驗(yàn)程序，防止其他因素對檢驗(yàn)工作帶來的影響。要把管理制度責(zé)任落實(shí)到每一個(gè)檢驗(yàn)人員身上，提高工作責(zé)任心，保證各項(xiàng)規(guī)章制度能夠順利執(zhí)行、規(guī)范執(zhí)行。檢驗(yàn)人員的素質(zhì)水平也會(huì)對檢驗(yàn)質(zhì)量造成一定影響，因此必須組建一支高素質(zhì)的人才隊(duì)伍，提升管理效果。

11 結(jié)語

開展微生物檢驗(yàn)工作可以發(fā)現(xiàn)不合格樣品和致病因子，為各項(xiàng)衛(wèi)生管理工作提供科學(xué)依據(jù)，對于預(yù)防和減少食品安全事故的發(fā)生和疾病控制工作具有積極的作用。做好微生物檢驗(yàn)工作的質(zhì)量管理和質(zhì)量控制，提高檢驗(yàn)人員專業(yè)能力，是保證微生物檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵。