石燕，魏衍財，鄭維玲，楊辰

南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院（江蘇蘇州 215000）

國內(nèi)實驗室檢測性激素六項[包括孕酮（progesterone，P）、雌二醇（estradiol，E2）、促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH）、泌乳素（prolactin，PRL）和睪酮（testosterone，T）]的方法主要是化學(xué)發(fā)光免疫分析法，使用的多為進口設(shè)備，國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的占比較小。作為高端醫(yī)療設(shè)備的化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，在過去十幾年中，幾乎被進口品牌所壟斷。近年來，隨著國產(chǎn)醫(yī)療行業(yè)的快速發(fā)展，國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀逐漸進入三級醫(yī)院檢驗科及大型第三方檢驗中心等機構(gòu)。在新型冠狀病毒肺炎疫情下，國家大力加強基層公共衛(wèi)生體系建設(shè)，部分基層醫(yī)院的臨床實驗室引入了國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。在部分國外進口試劑斷供時有發(fā)生的情況下，國產(chǎn)廠家積極恢復(fù)試劑生產(chǎn)，為臨床診療提供了快捷、方便的服務(wù)。鑒于國產(chǎn)儀器上市時間短，目前見諸報道的國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的檢測性能評價多為不同實驗室對某品牌或單個項目的驗證，本研究是在2016年由固定人員在同時間、同環(huán)境條件下，同時對多個品牌配套的多個檢測項目進行的性能驗證評價，旨在盡可能客觀地對市面上的國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀在性激素檢測中的應(yīng)用價值進行評價，給其他實驗室在選擇和使用國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀時提供參考。

1 材料和方法

1.1 樣本來源

選取2016年1—10月我院門診和住院患者檢測后剩余的無溶血、黃疸和脂濁血的新鮮血清樣本，共計600份。所有樣本分裝后集中保存于-80 ℃冰箱內(nèi)。

1.2 儀器和試劑

三種國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（深圳新產(chǎn)業(yè)MAGLUMI 4000、深圳邁瑞CL-2000i、鄭州安圖A2000）及其配套試劑和本實驗室在用進口儀器（Beckman Coulter DXI800）及其配套試劑，三種國產(chǎn)儀器隨機標為A、B、C；質(zhì)控品使用美國伯樂公司免疫分析質(zhì)控（批號40321、40322、40323）。

1.3 精密度驗證

參考CLSI EP15-A2[1]文件設(shè)計驗證方案，血清濃度與廠家進行精密度評價所選濃度盡可能保持一致，同時要盡量保證濃度水平和醫(yī)學(xué)決定水平處的濃度相一致。需要注意的是，每批樣本檢測前均需進行室內(nèi)質(zhì)控樣本檢測，合格后才可進行后續(xù)的樣本檢測；對于不同批次不同濃度的樣本，需要每天分別檢測3次，共檢測5 d；記錄檢測結(jié)果，計算批內(nèi)和總不精密度，不精密度以變異系數(shù)CV表示，具體CV值計算公式參考WS/T 492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》[2]。以批內(nèi)不精密度≤1/4 TEa（±6.25%）、總不精密度≤1/3 TEa（±8.33%）（TEa 取值為國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心室間質(zhì)評允許總誤差）為可接受標準。

1.4 方法學(xué)比對

依據(jù)CLSI EP9-A3[3]文件設(shè)計驗證方案，血清濃度應(yīng)盡可能在檢測范圍內(nèi)均勻分布，標本數(shù)量至少40份，同時采用三種國產(chǎn)儀器和進口儀器進行檢測，單次樣本是在40份樣本中隨機選取的，同時對檢測結(jié)果進行記錄。在檢測開始之前，確保所用儀器正常，室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果合格。標本中若存在離群值（具體參考EP9-A3文件），則需要剔除后補充對應(yīng)濃度的標本。通過偏差圖進行初步偏移評估，根據(jù)分析方法間散點圖和偏差圖所呈現(xiàn)的潛在特征，選擇最佳回歸模型對各比對系統(tǒng)結(jié)果進行擬合分析，并計算醫(yī)學(xué)決定水平處的偏移，以百分偏移≤1/2 TEa（±12.5%）為可接受標準。

1.5 分析測量范圍驗證

依據(jù)CLSI EP-6A[4]和WS/T 408-2012[5]設(shè)計驗證方案，選取待驗證線性范圍高限（H）附近和低限（L）附近的樣本，按H、3H+L、2H+3L、H+3L、L的比例兩兩混合，配置5個濃度樣品；對各濃度樣本在三種國產(chǎn)儀器上進行重復(fù)檢測，每種儀器每個濃度水平檢測3次，記錄檢測結(jié)果；剔除離群值，之后進行多元線性回歸，將結(jié)果擬合成一階、二階或三階多項式進行評價。

1.6 參考范圍驗證

參考CLSI C28-A3c[6]并查閱試劑說明書，按照納入標準選出20名表觀健康人（常規(guī)體檢項目均正常）進行體檢。受試驗條件限制，其中P、E2、LH、FSH 只驗證男性參考范圍，PRL 和T 分別驗證男性和女性參考范圍。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

采用Microsoft Excel 2007、SPSS 16.0軟件和MedCalc軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。不同比對系統(tǒng)偏移和回歸分析選取最合適的回歸模型進行計算，正態(tài)分布檢驗采用1-sampleK-S檢驗，如為正態(tài)分布，采用Pearson相關(guān)分析；如為非正態(tài)分布，用Wilcoxon符號秩檢驗，采用Spearman相關(guān)分析，各比對系統(tǒng)回歸分析選取最佳回歸模型進行計算。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗證

A儀器的P、E2、LH、FSH、PRL 和T，B 儀器的LH、FSH 和PRL，C儀器的 E2、LH 和PRL項目的精密度驗證結(jié)果符合要求，見表1。

表1 三種國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的性激素六項精密度驗證結(jié)果（%）

2.2 方法學(xué)比對

A、B、C 儀器與進口儀器的檢測結(jié)果之間的相關(guān)系數(shù)分別為0.76～0.99、0.89～0.99、0.82～0.98，P＜0.05；三種國產(chǎn)儀器的性激素六項在醫(yī)學(xué)決定水平處的百分偏移可接受率均為22%，見表2。

（續(xù)表）

2.3 分析測量范圍驗證

三種儀器的分析測量范圍驗證結(jié)果均符合要求；A 儀器有4項為線性；B、C 儀器5項為線性，見表3。

表3 三種國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的分析測量范圍驗證結(jié)果

2.4 參考范圍驗證

A、C 儀器的P、E2、LH、FSH、PRL（女）、T的參考范圍驗證通過，B 儀器的P、E2、LH、FSH、T 的參考范圍驗證通過，見表4。

表4 三種國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的參考范圍驗證結(jié)果

3 討論

近年來，國內(nèi)檢驗機構(gòu)關(guān)于國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀性能驗證的文獻報道日漸增加，一方面顯示了各級檢驗機構(gòu)對于檢驗質(zhì)量的要求越發(fā)規(guī)范，另一方面證明了國產(chǎn)儀器逐漸被引入實驗室。儀器性能驗證要求對檢測項目進行精密度、線性范圍、參考區(qū)間等驗證，同一實驗室有多個檢測系統(tǒng)檢測同一項目時需要開展不同儀器間的方法學(xué)比對，以評估各儀器間結(jié)果的一致性；性能驗證涉及的國產(chǎn)品牌項目主要集中在腫瘤標志物、甲狀腺相關(guān)激素、心肌標志物、感染類標志物等方面[7-14]。隨著國產(chǎn)品牌的不斷發(fā)展，對國產(chǎn)儀器與進口儀器檢測結(jié)果的一致性進行驗證就顯得尤為重要。本研究通過對三種國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀進行性能評價，來評估國產(chǎn)儀器是否可滿足臨床使用需求，為國產(chǎn)儀器的引入、普及提供數(shù)據(jù)支持和臨床使用建議；作為參考系統(tǒng)的進口儀器為Beckman Coulter DXI800，該儀器所有項目均參加了國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心組織的能力驗證，全部能力驗證結(jié)果均滿意，并且全部項目通過了ISO 15189認可。

本研究參考CLSI EP15-A2文件進行精密度驗證，三種國產(chǎn)儀器的性激素六項精密度驗證中，除C 儀器的P 和T 外，其余項目均能達到各自廠家的聲明標準；其中A 儀器的試劑盒精密度水平最高，驗證結(jié)果可以達到甚至超過進口儀器廠家所聲明的性能指標；B 儀器性激素六項的精密度水平一般，部分試劑盒的穩(wěn)定性有待提高；C 儀器的精密度略差，試劑盒的批間差較大，生產(chǎn)工藝和質(zhì)檢有待進一步優(yōu)化。

本研究涉及的性激素六項檢測目前無參考檢測程序，也無國際公認的有證參考物質(zhì)。參照EP9-A3文件，我們將本實驗室所用的進口儀器作為參考系統(tǒng)，將三種國產(chǎn)儀器的性激素六項檢測結(jié)果分別與之進行比對，結(jié)果顯示，三種國產(chǎn)儀器的性激素六項檢測結(jié)果與進口儀器的相關(guān)性顯著（P＜0.05），相關(guān)系數(shù)在0.76～0.99之間。雖然國產(chǎn)儀器與進口儀器間的相關(guān)性顯著，但臨床決定水平處的偏倚可接受性差，這可能是由于不同廠家的抗體來源、包被方式、發(fā)光原理等差異使得不同系統(tǒng)間的檢測結(jié)果不盡相同。有研究顯示，不同廠家的進口儀器之間比對結(jié)果亦存在相關(guān)性尚可但系統(tǒng)偏差較大的現(xiàn)象[14-15]。

參考范圍驗證時，因部分性激素項目涉及排卵期、黃體期、絕經(jīng)期等特殊時間段，驗證難度較大，故P、E2、LH、FSH 4項只驗證了男性參考范圍，PRL 和T 則分別驗證了男性和女性的參考范圍。本研究結(jié)果顯示，三種國產(chǎn)儀器的性激素六項分析測量范圍驗證結(jié)果均能夠符合本實驗室質(zhì)量控制要求；A、C 儀器的P、E2、LH、FSH、PRL（女）、T的參考范圍驗證通過，B 儀器的P、E2、LH、FSH、T 的參考范圍驗證通過，三種國產(chǎn)儀器的男性PRL參考范圍驗證全部未通過，這可能與抽樣有關(guān)（本研究無法做到全面調(diào)研所選樣本的背景情況，不能確保被取樣的人群均處于完全健康狀態(tài)，也不能保證這些檢測指標的參考區(qū)間完全適合臨床實驗室使用），也可能與本實驗的環(huán)境與廠家確認參考范圍時的環(huán)境差異較大有關(guān)。

綜上所述，三種國產(chǎn)儀器的部分性激素六項性能驗證結(jié)果可以滿足本實驗室的質(zhì)量要求，其中部分性能指標與進口儀器無明顯差異，這說明了國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光免疫設(shè)備技術(shù)已達到一定水平，但仍存在很大的提升空間；三種國產(chǎn)儀器性激素六項的參考范圍除PRL 外，其余項目均與廠家說明書一致，且國產(chǎn)儀器與進口儀器的檢測結(jié)果之間存在一定偏移，因此臨床上應(yīng)該建立不同儀器的參考范圍，實驗室應(yīng)綜合考慮檢驗結(jié)果在不同儀器間的可比性及不同儀器間結(jié)果的差異，以避免不同儀器檢測的值不同帶來的誤診，廠家應(yīng)從原料、方法學(xué)、溯源系統(tǒng)等方面進行不斷優(yōu)化，從而盡量縮小與進口儀器在臨床樣本檢測結(jié)果方面的差異性，實驗室和廠家應(yīng)共同提高性激素檢測項目的標準化，為臨床提供準確可靠的檢測結(jié)果，