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        P16、Ki-67免疫組化染色對ClN分級診斷的影響及其與宮頸HPV感染的相關性分析

        2022-02-21 07:48:12王青飛徐琴琴江西省樂平市中醫(yī)醫(yī)院江西樂平333300
        首都食品與醫(yī)藥 2022年3期
        關鍵詞:危型免疫組化宮頸癌

        王青飛,徐琴琴(江西省樂平市中醫(yī)醫(yī)院,江西 樂平 333300)

        宮頸癌是常見婦科惡性腫瘤,隨著病情發(fā)展會導致女性輸尿管梗阻、尿毒癥、惡病質(zhì)等,累及患者全身器官,具有較高的死亡率[1]。目前,臨床治療該病主要根據(jù)病情分級制定針對性治療方案,因此,診斷宮頸癌級別成為其中最關鍵步驟之一。宮頸癌主要是由于宮頸感染HPV病毒所致,但該病毒發(fā)展時間緩慢,從感染到致癌需要≥10年時間,因此及早診斷是治療及預防宮頸癌的關鍵[2]。目前,臨床診斷宮頸癌以宮頸管活組織檢查為主,但相關研究表明,P16、Ki-67免疫組化染色能客觀給出細胞增殖提示,并與宮頸HPV感染存在聯(lián)系,對診斷宮頸癌具有重要意義。基于此,本研究主要分析P16、Ki-67免疫組化染色對CIN分級診斷的影響及其與宮頸HPV感染的相關性,現(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 從2017年3月-2018年3月我院婦科門診TCT診斷異常的患者中選取60例作為研究對象,患者均知情本次研究并同意參加。HE診斷結(jié)果顯示,慢性宮頸炎19例、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ級15例、Ⅱ級12例、Ⅲ級10例、宮頸癌4例,根據(jù)診斷結(jié)果將其分組為慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組。

        1.2 方法 ①對60例患者宮頸脫落細胞使用TCT相應技術收集,從中提取DNA并檢測其聚合酶鏈反應提升、核酸分子快速導流雜交、脫落細胞HPV分型,使用HPV分型檢測試劑盒(凱普生物化學有限公司,批準文號:國藥準字S20060011)檢測;②獲取患者宮頸病理組織,將其石蠟化,脫蠟后置入乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)(國藥集團化學試劑有限公司,批號:20160518),將其放入微波爐中進行熱修復,定時為12min;為其滴加過氧化氫(南昌白云藥業(yè)有限公司,批準文號:國藥準字H36021594)500ml:15g(3%),劑量100μL,并定時10min孵育;滴加劑量100μL一抗(蘭州生物制品研究所,國藥準字S20023015),P16、Ki-67稀釋度分別為1∶100、1∶50,定時90min孵育;滴加劑量100μL二抗(蘭州生物制品研究所,國藥準字S20023015),定時20min孵育;滴加DAB染色液,并使用顯微鏡對其顯色進行觀察;陽性對照以磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗進行觀察,陽性對照以P16、Ki-67表達觀察為主。

        1.3 觀察指標 ①診斷宮頸癌陰性、陽性。采用TBS宮頸細胞學診斷標準,結(jié)果顯示正常或炎癥表示為陰性,宮頸TCT的檢查結(jié)果無明確意義、非典型鱗狀細胞和以上級別病變則表示為陽性。②診斷HPV分型。包括低危型、中危型、高危型三大類,其中,高危型有HPV-16、HPV-18、HPV-35、HPV-39、HPV-51等13種亞型。③CIN分級診斷。對病理組織切片,醫(yī)師閱片并作出分級判斷,若胞核、胞漿中均有P16表達,且胞核有Ki-67表達,則表示為陽性;采用半定量評分對P16、Ki-67表達強度及分布進行級別判斷,(-)指代P16、Ki-67均不表達,有胞漿染色或局灶表達陽性、基底或基底旁表達,(+)指代染色位于基底、基底旁細胞,(++)指代染色位于基底下1/3內(nèi)細胞,(+++)指代染色位于>基底下1/3而<2/3內(nèi)細胞,(++++)指代染色位于>基底下2/3的全層細胞。

        診斷準確率=符合例數(shù)/總例數(shù)×100%。

        1.4 統(tǒng)計學方法 使用SPSS20.0分析數(shù)據(jù),計量資料以(±s)表示、計數(shù)資料以(n,%)表示,分別以t、χ2檢驗,P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié)果

        2.1 P16、Ki-67免疫組化結(jié)合半定量評分與HE染色CIN分級的診斷結(jié)果比較 使用P16、Ki-67免疫組化結(jié)合半定量評分對患者病情進行診斷,且結(jié)果與HE染色CIN分級的診斷結(jié)果相比:慢性宮頸炎組患者兩項診斷結(jié)果相同,診斷結(jié)果完全相符,CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組診斷結(jié)果相符率為94.59%,兩組差異顯著(P<0.05)。具體見表1、表2。

        表1 P16、Ki-67免疫組化結(jié)合半定量評分

        表2 P16、Ki-67免疫組化結(jié)合半定量評分與HE染色診斷結(jié)果相同情況

        2.2 HPV感染與P16之間的關系 結(jié)果顯示,P16顯示陽性與HPV感染呈正比,即其顯示陽性程度越高,HPV感染幾率越高,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);以HPV-16、HPV-18、HPV-35、HPV-39、HPV-51為例,觀察其陽性與陰性,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。具體見表3。

        表3 HPV感染與P16之間的關系

        3 討論

        宮頸癌是較為高發(fā)的惡性腫瘤之一,嚴重影響女性身體健康,危及患者生命,但若在早期確診,能有效提升預防與治療效果。目前,臨床診斷主要以疾病組織活檢為主,為宮頸癌確診提供有力證明[3-4]。宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)與宮頸癌確診密切相關;因此,通過對CIN分級能進一步提高診斷準確性,有效提升早期診斷成功率,且有利于疾病治愈,提高預防效果[5]。有研究表明,從宮頸癌患者活檢結(jié)果中可知,其宮頸脫落細胞中所包含的P16、Ki-67的表達程度與宮頸癌發(fā)展存在很大關系,因此,P16、Ki-67對判斷CIN分級及診斷宮頸癌具有重要意義[6]。

        P16作為一種抑制蛋白,具有廣泛的生物應用效果,對癌基因具有相應抑制作用。因此,在患者宮頸脫落細胞中的P16能有效反映CIN分級,同時,檢測P16能明確HPV感染程度,對于臨床確診宮頸癌具有重要指導作用[7-8]。Ki-67是一種存在于全身細胞中對癌癥具有較高敏感性的表達因子,能有效提示腫瘤細胞的增殖活性[9-10]。相關研究表明,Ki-67在CIN分級的不同分級情況下表達具有較高差異性,因此,Ki-67具有反映腫瘤發(fā)展情況的功能,對于臨床診斷具有相應指導意義。本研究結(jié)果表明P16、Ki-67與CIN分級成正相關,即CIN分級越高,P16、Ki-67表達越強烈,且通過P16、Ki-67免疫組化染色檢測宮頸癌,其結(jié)果與HE染色診斷慢性宮頸炎的結(jié)果相符,與CIN分級患者診斷符合率為94.59%,說明P16、Ki-67免疫組化染色對CIN分級診斷具有積極影響作用。HPV包括高危、中高危型、低危型3種類型,高危型HPV分型是宮頸癌的顯著因素之一[11-14]。本研究結(jié)果顯示,HPV分型越高,P16表達越強烈,說明宮頸癌HPV分型存在相關性。

        綜上所述,CIN分級與P16、Ki-67表達成正相關,通過P16、Ki-67表達診斷宮頸癌具有顯著的臨床治療指導意義,且P16與患者HPV具有相關性,能判斷患者轉(zhuǎn)歸、預后效果。

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