王纓，歷娜，李桂榮，張玲

（山東藥品食品職業(yè)學(xué)院·山東威?！?64200）

益腎減脂膠囊具有溫腎去濕、減脂排毒功效，其處方中含有槲寄生、淫羊藿苷、山楂等藥味。為了更全面地控制藥品質(zhì)量，建立用高效液相色譜法測定淫羊藿苷的含量[1]。

1 儀器與試藥

1.1儀器

島津SPD-20AT高效液相色譜儀；色譜柱Ajilent C18250×4.6mm 5μm。

1.2對照品

淫羊藿苷，購自中國食品藥品檢定研究院，批號為110737-201516，含量為94.2%。

1.3試劑

色譜純甲醇，分析純甲醇，分析純乙醇，娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷對照品適量，用甲醇溶解并稀釋制成含淫羊藿苷約40μg/ml的溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備

取膠囊內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性對照溶液的制備

取處方中除去炙淫羊藿藥材的其他藥味，按處方比例制成缺炙淫羊藿的陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法制得陰性對照溶液。

2.1.4 加樣回收率測試溶液的制備

取已測知含量的膠囊內(nèi)容物約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入淫羊藿苷對照品溶液15ml，加稀乙醇10ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。平行制備6份。

2.1.5 線性測試溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷對照品（含量：94.2%）10.5mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密吸取對照品貯備液適量制成含淫羊藿苷約20、30、40、60、80μg/ml的溶液。

2.2檢測波長的選擇

通過測試對照品溶液的紫外吸收光譜，其吸收光譜如圖1所示。由圖1得知最大吸收波長為270nm，因此檢測方法選擇270nm作為檢測波長。

2.3色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（53∶47）為流動相；SPD-20A紫外檢測器；檢測波長為270nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：10μl；柱溫：40℃。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性

分別取淫羊藿苷對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定，色譜圖詳見圖2、3、4。

由色譜圖得出結(jié)論：在與對照品保留時間18.2min相同的位置上，供試品色譜圖中有相應(yīng)色譜峰，而陰性對照色譜圖中無相應(yīng)色譜峰。說明處方中其他藥味以及溶劑對測定結(jié)果無干擾。

2.4.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取淫羊藿苷對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)測定5次，結(jié)果見表1。

表1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

取供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定。分離度R=3.26。由此得出結(jié)論，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)符合要求。

2.4.3 精密度

取淫羊藿苷對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，測其峰面積。結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗(yàn)測定結(jié)果

由試驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論：儀器精密度符合要求。

2.4.4 重復(fù)性

取供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，重復(fù)測定6次，用外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)測定結(jié)果

由試驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論：方法的重復(fù)性符合要求。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn)

取加樣回收率測試溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表4。

表4 加樣回收率測定結(jié)果

由試驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論：測定方法的回收率符合要求。

2.4.6 線性與范圍

取線性測試溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測定，結(jié)果見表5。

表5 淫羊藿苷線性關(guān)系測定結(jié)果

以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，y=24022x-4.5893，相關(guān)系數(shù)r=1.0000。詳見圖5。

由試驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論：淫羊藿苷濃度在20～80μg/ml之間，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.7 樣品穩(wěn)定性

取供試品溶液10μl，在0、2、4、8、24、48h，分別注入高效液相色譜儀，測定淫羊藿苷的峰面積。結(jié)果見表6。

表6 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由試驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論：供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5樣品測定

按測定方法，測試3批樣品，結(jié)果見表7。

表7 淫羊藿苷含量測定結(jié)果

根據(jù)表7中淫羊藿苷含量以及平均裝量的測定結(jié)果，計(jì)算出每粒膠囊中淫羊藿苷的含量，結(jié)果見表8。

表8 每粒膠囊中淫羊藿苷含量

3 討論

3.1選擇稀乙醇為溶劑，超聲提取30min可有效地提取淫羊藿苷，并且環(huán)保、價(jià)格便宜。

3.2通過篩選流動相，確定了用甲醇-水（53∶47）作為流動相[2]測定益腎減脂膠囊中淫羊藿苷含量[3]。處方中其他藥味以及溶劑對測定結(jié)果無干擾。

3.3本文采用高效液相色譜法測定益腎減脂膠囊中淫羊藿苷含量，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水（53∶47）為流動相，檢測波長為270nm，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣量為10μl，柱溫為40℃。方法的專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、穩(wěn)定性等均符合方法學(xué)驗(yàn)證要求。