邊東,武子敬,劉雪坤,姚慧敏,劉成琳*

（通化師范學院·吉林通化·134002）

人參為五加科植物人參Panaxginsing C.A.Meyer的干燥根和根莖，主要分布在我國長白山地區(qū)，味甘、微苦、性平，歸脾、肺、心經，具有大補元氣、復脈固脫、補脾益肺、生津養(yǎng)血、安神益智等功效，能治療勞傷虛損、食少、倦怠、虛咳喘促、自汗暴脫、久虛不復等一切氣血津液不足之證[1-3]。由于人參具有較好的補益和適原性作用，所以人們在日常生活使用頻率非常高，自古以來被人們稱為佳品，享有“百草之王”的美稱[2]。

近年來，人參的加工品也相繼的走進了大眾視野。人參的加工品主要有紅參和黑參，與人參的功效性相比它們更側重于補益作用，臨床中，當方劑中的人參側重補益作用時常常更換成紅參和黑參，而且可直接當作保健品使用[4]。目前，紅參和黑參的加工方式常采用加水蒸制的方式，加工后蒸制人參的水（以下簡稱蒸參水）屬于副產物，長期一直被藥企以工業(yè)廢水直接處理[4-5]。但經實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)蒸參水顏色呈暗黃色，渾濁、略粘稠，味道與人參水提取液較為相似，故推測蒸參水與人參成分相似[6]。查閱大量文獻發(fā)現(xiàn)，人參中主要的化學成分為多糖和皂苷類，因此本次實驗主要采用紫外分光光度法檢測蒸參水是否含有多糖與皂苷類成分，目前關于人參多糖、總皂苷的檢測大部分采用了高效液相色譜法進行檢測，但此方法操作復雜，檢測時間較長，檢測成本也非常高，紫外可見分光光度計法測定法測定人參總皂苷含量分析最簡便，且重現(xiàn)性最好，因此，本次實驗采用紫外可見分光度儀測定蒸參水中多糖和總皂苷的含量[7-9]。

我國為人參主產國，已有5000年以上的應用史，人參已被列為國家一級保護植物，在長白山等自然保護區(qū)已進行保護，為了能讓人參資源得到充分利用，在未來還需進一步系統(tǒng)研究蒸參水中有效成分和含量以及進行一系列的對比研究，借此研究還可能發(fā)現(xiàn)新的活性成分。擴大人參資源的利用不但有理論意義而且還有重要的經濟效益和社會效益，其開發(fā)利用市場前景廣闊[2]。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器和試劑

1.1.1 材料

人參（Panaxginsing C.A.Meyer）；人參皂苷Rg1、Re、Rb1（均購買于四川維克生物科技有限公司）。

1.1.2 試劑

甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純德國Merck公司）；磷酸（天津大茂化學試劑廠）娃哈哈純凈水。

1.1.3 儀器

島津LC-2010HT高效液相色譜儀，包含LCsolution化學工作站、VWD檢測器、自動進樣器(日本島津有限公司)；精密電子天平(天津天馬恒基儀器有限公司)；SG3300H超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)；循環(huán)水式真空泵(鄭州長城科工貿有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 對照品的制備

1.2.1.1 人參多糖的對照品制備

取適量葡萄糖置烘箱中105℃干燥，多次稱重直至恒重時取出。精密稱定1.09mg，用水定容至10 mL，即得無水葡萄糖溶液（0.109 mg·mL-1）。

1.2.1.2 人參總皂苷對照品制備

精密稱取對照品人參皂苷Re 10.09 mg，加甲醇并轉移10 mL容量瓶中定容至刻度，即得人參總皂苷對照品溶液（1.009mg·mL-1）。

1.2.2 樣品溶液的制備

1.2.2.1 蒸參水溶液的制備

精密稱取人參100g,放入蒸鍋中，加水量為5L,蒸制溫度為100攝氏度隔水蒸制6 h，將得到的蒸參水減壓濃縮后置容量瓶中，加水定容至50 mL，即得蒸參水溶液（1g·g-1生藥量）。

1.2.2.2 蒸參水中多糖供試品溶液的制備

取上述蒸參水溶液5 mL，加入乙醇使其含醇量達到80%，放4℃冰箱保存12 h，取出用布氏漏斗進行抽濾，重復三次，將三次共得到的沉淀物放入烘箱中干燥，加適量水溶解，搖勻，置100 mL容量瓶中定容至刻度，備用，即得蒸參水多糖樣品溶液。

1.2.2.3 蒸參水中總皂苷供試品溶液的制備

將上述去除多糖后的濾液回收，減壓濃縮至50 mL，通過D101大孔吸附樹脂，水沖洗至無醇味，再用8倍量60%乙醇沖洗，收集流出液，揮干試劑并放入烘箱中干燥即得蒸參水中總皂苷。

1.3 實驗方法

1.3.1 多糖標準曲線的繪制

精密吸取無水葡萄糖對照品溶液100、150、200、250和300μL、人參多糖樣品溶液1mL，置具塞試管中加蒸餾水至2 mL，加入1 mL 4%苯酚溶液，搖勻后加5 mL濃硫酸，不斷振搖，直到試管中溶液澄清不渾濁，迅速放入100℃沸水浴中10 min，取出放冰水中，冷卻至常溫。以相應試劑作為空白，采用紫外-可見分光光度儀在484 nm處掃描，即可。

1.3.2 總皂苷標準曲線的繪制

精密吸取人參總皂苷對照品溶液100、140、180、220和260 μL和人參總皂苷樣品溶液500 μL，置具塞試管中，低溫揮去溶劑后，加1%香草醛高氯酸溶液0.5 mL，置60℃恒溫水浴上充分混勻后加熱15 min，取出，立即將具塞試管放入冰水中2 min，最后加濃度為77%硫酸溶液5 mL，搖勻；消除氣泡后，以相應的試劑作為空白，利用紫外-可見分光光度儀在480 nm處掃描，即可。

1.3.3 蒸參水中多糖溶液檢測

精密吸取蒸參水多糖溶液供試品溶液1mL，按“1.3.1”項下方法，在484 nm處測定吸光度。

1.3.4 蒸參水中皂苷的檢測

精密吸取蒸參水中總皂苷供試品溶液200μL，按“1.3.2”項下方法，在480 nm處測定吸光度。

2 結果與分析

2.1 標準曲線的繪制

2.1.1 多糖標準曲線繪制

以多糖對照品進樣量(μg·ml-1)為橫坐標(X)吸光度為做坐標(Y)，進行回歸得到標準曲線為Y=0.1803X+0.0176，R2=0.9992，多糖濃度18.31-54.93 μg·ml-1處吸收良好，結果如圖1。

2.1.2 總皂苷標準曲線

以人參皂苷Re進樣量(μg·ml-1)為橫坐標(X)吸光度為做坐標(Y)，進行回歸得到標準曲線為Y=0.1803X+0.0176，R2=0.9998，總皂苷Re濃度在1.29-3.95 μg·ml-1處吸收良好，結果如圖2。

2.2 蒸參水中多糖的含量測定

經“1.3.3”項下方法測定蒸參水多糖吸光度為0.56，表明蒸參水中含有多糖成分，經人參多糖標準曲線計算可得每毫升蒸參水中含有12.08 mg多糖。

2.3 蒸參水中皂苷類成分測定

經“1.3.3”項下方法測定蒸參水皂苷樣品吸光度為0.47，表明蒸參水中含有皂苷類成分，經人參總皂苷標準曲線計算可得每毫升蒸參水中含有2.77 mg的皂苷類成分。

3 討論

蒸參水的生產形成工藝特點決定其多為水溶性成分，因此針對其某些化學成分的分離制備存在一定的困難[11]。至今末見對其人參皂苷類單體成分分離制備方面的相關研究報道。本實驗收集蒸參水，減壓濃縮至一定濃度，加入適量乙醇得到沉淀的多糖部分，將蒸參水中乙醇揮發(fā)，并用水飽和正丁醇萃取得到皂苷部分，最后采用紫外可見分光光度法檢測多糖與皂苷類成分。通過上述方法成功分離測定出蒸參水中的多糖和皂苷類成分。蒸參水是人參加工過程中的副產品，含有人參中的活性成分。蒸參水的有效利用可以大大降低資源的浪費，為人參擴大用藥范圍提供證據(jù)，豐富了人參的用藥資源。