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        蒸參水中化學(xué)成分的含量測(cè)定

        2022-02-21 06:57:14邊東武子敬劉雪坤姚慧敏劉成琳
        人參研究 2022年1期
        關(guān)鍵詞:皂苷類總皂苷分光

        邊東,武子敬,劉雪坤,姚慧敏,劉成琳*

        (通化師范學(xué)院·吉林通化·134002)

        人參為五加科植物人參Panaxginsing C.A.Meyer的干燥根和根莖,主要分布在我國(guó)長(zhǎng)白山地區(qū),味甘、微苦、性平,歸脾、肺、心經(jīng),具有大補(bǔ)元?dú)?、?fù)脈固脫、補(bǔ)脾益肺、生津養(yǎng)血、安神益智等功效,能治療勞傷虛損、食少、倦怠、虛咳喘促、自汗暴脫、久虛不復(fù)等一切氣血津液不足之證[1-3]。由于人參具有較好的補(bǔ)益和適原性作用,所以人們?cè)谌粘I钍褂妙l率非常高,自古以來(lái)被人們稱為佳品,享有“百草之王”的美稱[2]。

        近年來(lái),人參的加工品也相繼的走進(jìn)了大眾視野。人參的加工品主要有紅參和黑參,與人參的功效性相比它們更側(cè)重于補(bǔ)益作用,臨床中,當(dāng)方劑中的人參側(cè)重補(bǔ)益作用時(shí)常常更換成紅參和黑參,而且可直接當(dāng)作保健品使用[4]。目前,紅參和黑參的加工方式常采用加水蒸制的方式,加工后蒸制人參的水(以下簡(jiǎn)稱蒸參水)屬于副產(chǎn)物,長(zhǎng)期一直被藥企以工業(yè)廢水直接處理[4-5]。但經(jīng)實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)蒸參水顏色呈暗黃色,渾濁、略粘稠,味道與人參水提取液較為相似,故推測(cè)蒸參水與人參成分相似[6]。查閱大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),人參中主要的化學(xué)成分為多糖和皂苷類,因此本次實(shí)驗(yàn)主要采用紫外分光光度法檢測(cè)蒸參水是否含有多糖與皂苷類成分,目前關(guān)于人參多糖、總皂苷的檢測(cè)大部分采用了高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè),但此方法操作復(fù)雜,檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng),檢測(cè)成本也非常高,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)定法測(cè)定人參總皂苷含量分析最簡(jiǎn)便,且重現(xiàn)性最好,因此,本次實(shí)驗(yàn)采用紫外可見(jiàn)分光度儀測(cè)定蒸參水中多糖和總皂苷的含量[7-9]。

        我國(guó)為人參主產(chǎn)國(guó),已有5000年以上的應(yīng)用史,人參已被列為國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物,在長(zhǎng)白山等自然保護(hù)區(qū)已進(jìn)行保護(hù),為了能讓人參資源得到充分利用,在未來(lái)還需進(jìn)一步系統(tǒng)研究蒸參水中有效成分和含量以及進(jìn)行一系列的對(duì)比研究,借此研究還可能發(fā)現(xiàn)新的活性成分。擴(kuò)大人參資源的利用不但有理論意義而且還有重要的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益,其開(kāi)發(fā)利用市場(chǎng)前景廣闊[2]。

        1 材料與方法

        1.1 材料、儀器和試劑

        1.1.1 材料

        人參(Panaxginsing C.A.Meyer);人參皂苷Rg1、Re、Rb1(均購(gòu)買于四川維克生物科技有限公司)。

        1.1.2 試劑

        甲醇(色譜純);乙腈(色譜純德國(guó)Merck公司);磷酸(天津大茂化學(xué)試劑廠)娃哈哈純凈水。

        1.1.3 儀器

        島津LC-2010HT高效液相色譜儀,包含LCsolution化學(xué)工作站、VWD檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器(日本島津有限公司);精密電子天平(天津天馬恒基儀器有限公司);SG3300H超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司);循環(huán)水式真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)。

        1.2 實(shí)驗(yàn)方法

        1.2.1 對(duì)照品的制備

        1.2.1.1 人參多糖的對(duì)照品制備

        取適量葡萄糖置烘箱中105℃干燥,多次稱重直至恒重時(shí)取出。精密稱定1.09mg,用水定容至10 mL,即得無(wú)水葡萄糖溶液(0.109 mg·mL-1)。

        1.2.1.2 人參總皂苷對(duì)照品制備

        精密稱取對(duì)照品人參皂苷Re 10.09 mg,加甲醇并轉(zhuǎn)移10 mL容量瓶中定容至刻度,即得人參總皂苷對(duì)照品溶液(1.009mg·mL-1)。

        1.2.2 樣品溶液的制備

        1.2.2.1 蒸參水溶液的制備

        精密稱取人參100g,放入蒸鍋中,加水量為5L,蒸制溫度為100攝氏度隔水蒸制6 h,將得到的蒸參水減壓濃縮后置容量瓶中,加水定容至50 mL,即得蒸參水溶液(1g·g-1生藥量)。

        1.2.2.2 蒸參水中多糖供試品溶液的制備

        取上述蒸參水溶液5 mL,加入乙醇使其含醇量達(dá)到80%,放4℃冰箱保存12 h,取出用布氏漏斗進(jìn)行抽濾,重復(fù)三次,將三次共得到的沉淀物放入烘箱中干燥,加適量水溶解,搖勻,置100 mL容量瓶中定容至刻度,備用,即得蒸參水多糖樣品溶液。

        1.2.2.3 蒸參水中總皂苷供試品溶液的制備

        將上述去除多糖后的濾液回收,減壓濃縮至50 mL,通過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂,水沖洗至無(wú)醇味,再用8倍量60%乙醇沖洗,收集流出液,揮干試劑并放入烘箱中干燥即得蒸參水中總皂苷。

        1.3 實(shí)驗(yàn)方法

        1.3.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        精密吸取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液100、150、200、250和300μL、人參多糖樣品溶液1mL,置具塞試管中加蒸餾水至2 mL,加入1 mL 4%苯酚溶液,搖勻后加5 mL濃硫酸,不斷振搖,直到試管中溶液澄清不渾濁,迅速放入100℃沸水浴中10 min,取出放冰水中,冷卻至常溫。以相應(yīng)試劑作為空白,采用紫外-可見(jiàn)分光光度儀在484 nm處掃描,即可。

        1.3.2 總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        精密吸取人參總皂苷對(duì)照品溶液100、140、180、220和260 μL和人參總皂苷樣品溶液500 μL,置具塞試管中,低溫?fù)]去溶劑后,加1%香草醛高氯酸溶液0.5 mL,置60℃恒溫水浴上充分混勻后加熱15 min,取出,立即將具塞試管放入冰水中2 min,最后加濃度為77%硫酸溶液5 mL,搖勻;消除氣泡后,以相應(yīng)的試劑作為空白,利用紫外-可見(jiàn)分光光度儀在480 nm處掃描,即可。

        1.3.3 蒸參水中多糖溶液檢測(cè)

        精密吸取蒸參水多糖溶液供試品溶液1mL,按“1.3.1”項(xiàng)下方法,在484 nm處測(cè)定吸光度。

        1.3.4 蒸參水中皂苷的檢測(cè)

        精密吸取蒸參水中總皂苷供試品溶液200μL,按“1.3.2”項(xiàng)下方法,在480 nm處測(cè)定吸光度。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        2.1.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

        以多糖對(duì)照品進(jìn)樣量(μg·ml-1)為橫坐標(biāo)(X)吸光度為做坐標(biāo)(Y),進(jìn)行回歸得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.1803X+0.0176,R2=0.9992,多糖濃度18.31-54.93 μg·ml-1處吸收良好,結(jié)果如圖1。

        2.1.2 總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

        以人參皂苷Re進(jìn)樣量(μg·ml-1)為橫坐標(biāo)(X)吸光度為做坐標(biāo)(Y),進(jìn)行回歸得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.1803X+0.0176,R2=0.9998,總皂苷Re濃度在1.29-3.95 μg·ml-1處吸收良好,結(jié)果如圖2。

        2.2 蒸參水中多糖的含量測(cè)定

        經(jīng)“1.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定蒸參水多糖吸光度為0.56,表明蒸參水中含有多糖成分,經(jīng)人參多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可得每毫升蒸參水中含有12.08 mg多糖。

        2.3 蒸參水中皂苷類成分測(cè)定

        經(jīng)“1.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定蒸參水皂苷樣品吸光度為0.47,表明蒸參水中含有皂苷類成分,經(jīng)人參總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可得每毫升蒸參水中含有2.77 mg的皂苷類成分。

        3 討論

        蒸參水的生產(chǎn)形成工藝特點(diǎn)決定其多為水溶性成分,因此針對(duì)其某些化學(xué)成分的分離制備存在一定的困難[11]。至今末見(jiàn)對(duì)其人參皂苷類單體成分分離制備方面的相關(guān)研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)收集蒸參水,減壓濃縮至一定濃度,加入適量乙醇得到沉淀的多糖部分,將蒸參水中乙醇揮發(fā),并用水飽和正丁醇萃取得到皂苷部分,最后采用紫外可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)多糖與皂苷類成分。通過(guò)上述方法成功分離測(cè)定出蒸參水中的多糖和皂苷類成分。蒸參水是人參加工過(guò)程中的副產(chǎn)品,含有人參中的活性成分。蒸參水的有效利用可以大大降低資源的浪費(fèi),為人參擴(kuò)大用藥范圍提供證據(jù),豐富了人參的用藥資源。

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