黃曉巍，王亞杰，王宇，徐巖，周佳，李瑞麗，辛國*

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)東北亞中醫(yī)藥研究院，長春130117；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長春130117；3.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春130021）

景參麥顆粒方源自于長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院的滿醫(yī)藥臨床經(jīng)驗(yàn)方，臨床上主要應(yīng)用于血虛證的治療，經(jīng)過對提取物的藥效實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，該方對于血虛帶來的免疫水平低下具有良好的恢復(fù)效果，在血虛證及輔助提高免疫力方面具有良好的應(yīng)用前景。該方由紅景天、人參、麥冬、白術(shù)等藥食同源藥材組成，原采用水煎的方式服用，在服用方式和保存的等方面存在諸多不便，為方便人群使用，擬開發(fā)顆粒劑以擴(kuò)大應(yīng)用市場。顆粒劑具有起效快，服用方便且劑量小，制備工藝簡單，成本較低等特點(diǎn)。本研究以顆粒成型率、溶化性為指標(biāo)，采用單因素分析法，分別對填充劑、潤濕劑、藥物浸膏粉與輔料比例（以下簡稱：藥輔比）進(jìn)行考察，通過正交試驗(yàn)優(yōu)選最佳成型工藝，進(jìn)行驗(yàn)證性試驗(yàn)；通過對景參麥顆粒性狀、制劑項(xiàng)下檢查，以及對紅景天、人參、白術(shù)三味藥材的薄層鑒別，制定景參麥顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為后續(xù)的開發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

DHG-9240型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；BJ-600A型多功能粉碎機(jī)，上海拜杰實(shí)業(yè)有限公司；BSA223S型分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；ZF-6型三用紫外分析儀，上海嘉鵬科技有限公司；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州市江南實(shí)驗(yàn)儀器廠；KQ3200B型超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司；藥典篩、硅膠G薄層板等。

1.2 材料與試劑

紅景天（批號：180102）、人參（批號：191201）購自亳州市華云中藥飲片有限公司；黃精（批號：C194191201）、麥冬（批號:C295200401）購自安國市榮華本草中藥材有限公司；白術(shù)(批號：2001026）購自河北一達(dá)藥業(yè)有限公司；麥芽糊精（食品級）、D-甘露醇（食品級），G-CLONE，批號：506O021、560A031；無水乳糖（分析級），阿拉丁，批號：D2101115；紅景天對照藥材，源葉生物，批號：Y21J11H119107；紅景天苷對照品，成都曼斯特，貨號：A0076；人參對照藥材，源葉生物，批號：M06GB147643；人參皂苷Rf、Rb1、Rg1、Re對照品，成都曼斯特，貨號：A0246、A0234、A0237、A0244；白術(shù)對照藥材，源葉生物，批號：Y22O11H128343；香蘭素，源葉生物，批號：Y02N11C129562；碘固體（含量≥99.8%），北京化工廠，批號：20190110；乙酸乙酯、石油醚（沸程60℃～90℃）、正己烷、無水乙醇、三氯甲烷、正丁醇、甲醇、氨試液、硫酸、丙酮等試劑均為分析純。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 顆粒劑的制備方法

以處方量稱取藥材進(jìn)行提取，以藥材總體積4倍量水，煎煮3次，每次2小時(shí)，將所得濾液合并，減壓濃縮至相對密度1.20左右的稠浸膏，置于60℃烘箱中干燥，粉碎成細(xì)粉，過三號篩備用。將浸膏粉加適量輔料混勻，采用濕法制粒制軟材，過一號篩，60℃烘干，整粒，即得景參麥顆粒。

2.2 評價(jià)指標(biāo)的確定

2.2.1 溶化性

依據(jù)2020年版《中國藥典》四部通則0104顆粒劑項(xiàng)下，采用可溶顆粒檢查法考察溶化性。

2.2.2 顆粒成型率

依據(jù)2020年版《中國藥典》四部通則0104顆粒劑粒度檢查項(xiàng)下規(guī)定，采用雙篩分法，能通過1號藥典篩和不能通過5號藥典篩的顆粒計(jì)合格顆粒，以合格顆粒占制顆?？傊匕俜直葹轭w粒成型率。計(jì)算公式為：顆粒成型率（%）=（合格顆粒/制顆?？傊兀?100%。

2.3 單因素考察試驗(yàn)

2.3.1 單一稀釋劑的選擇

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)和相關(guān)文獻(xiàn)[1]，依2.1項(xiàng)下顆粒劑制備方法，藥物浸膏粉以藥輔比1∶1.5的比例分別加入麥芽糊精、乳糖和甘露醇，95%乙醇潤濕，制備顆粒，依2.2項(xiàng)下評價(jià)指標(biāo)考察，結(jié)果見表1。甘露醇作為稀釋劑，軟材黏硬且不易制粒，有少量不溶物，顆粒成型率為94.06%，低于麥芽糊精與乳糖的顆粒成型率96.46%、98.67%；麥芽糊精與乳糖作為單一稀釋劑，軟材黏硬度較好，均易制粒，溶化性佳，其中乳糖的軟材情況和顆粒成型率均優(yōu)于麥芽糊精；考慮麥芽糊精和乳糖均具有較好的賦形作用和矯味作用，且乳糖成本較貴，將麥芽糊精和乳糖作為混合稀釋劑進(jìn)一步優(yōu)選。

表1 單一稀釋劑種類考察Table 1 Single diluent type investigation

2.3.2 混合稀釋劑的選擇

以不同比例的麥芽糊精：乳糖（1∶2、1∶1、2∶1）作為混合稀釋劑。依2.1項(xiàng)下操作，藥物浸膏粉以藥輔比1∶1.5，95%乙醇潤濕，制備顆粒，結(jié)果見表2。當(dāng)麥芽糊精：乳糖=1∶2時(shí)，顆粒成型率為94.96%，溶化性考察時(shí)，顆粒有少量不溶物；當(dāng)麥芽糊精：乳糖=1∶1或2∶1時(shí)，軟材適中且易制粒，制成顆粒溶化性佳，顆粒成型率相近，分別為98.30%和98.21%，考慮到1∶1或2∶1時(shí)差異不大，且乳糖成本較高，優(yōu)選麥芽糊精∶乳糖=2∶1作為混合稀釋劑比例。

表2 混合稀釋劑比例考察Table 2 The proportion of mixed diluent was investigated

2.3.3 潤濕劑的選擇

考慮藥物浸膏粉本身黏性較大，吸濕性較強(qiáng)，選用含水量較大的潤濕劑易造成軟材及顆粒板結(jié)，影響軟材和顆粒成型率，根據(jù)文獻(xiàn)[2]和預(yù)試驗(yàn)，采用藥輔比1∶1.5，噴以不同百分含量的乙醇（75%、85%、95%）制軟材，依2.1項(xiàng)下制粒，依2.2項(xiàng)下指標(biāo)選擇最佳潤濕劑濃度，結(jié)果見表3。軟材黏性隨著含水量的降低而降低，95%乙醇作為潤濕劑時(shí)，軟材黏硬度適中，易制粒，溶化性佳且顆粒成型率較高，為98.21%，故選擇95%乙醇作為潤濕劑。

表3 潤濕劑濃度優(yōu)選Table 3 Optimum wetting agent concentration

2.3.4 藥輔比的選擇

以藥物浸膏粉與混合稀釋劑比例1∶0.5、1∶1、1∶1.5混勻，噴以95%乙醇潤濕，按2.1項(xiàng)下制粒，按2.2項(xiàng)下指標(biāo)優(yōu)選最佳藥輔比，結(jié)果見表4。當(dāng)藥輔比為1∶0.5時(shí)，顆粒成型率為89.41%，軟材黏度較大，結(jié)硬塊，不易制粒且有少量不溶物；當(dāng)藥輔比為1∶1.5時(shí)，成型率為89.46%，大于藥輔比1∶1時(shí)79.83%的顆粒成型率，軟材黏度適宜，溶化性佳，考慮載藥量及每日服用量，故選擇藥輔比為1∶1.5。

表4 藥輔比優(yōu)選Table 4 Drug supplement ratio optimization

2.4 正交試驗(yàn)優(yōu)化制備工藝

在單因素考察試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對以下三個(gè)因素：稀釋劑比例（A）、藥輔比（B）、潤濕劑濃度（C）設(shè)立3個(gè)水平，以顆粒成型率作為評價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)。因素水平表見表5，正交試驗(yàn)結(jié)果見表6，方差分析結(jié)果見表7。

表5 因素水平表Table 5 Factor level table

表6 正交試驗(yàn)的設(shè)計(jì)及結(jié)果表Table 5 Orthogonal test design and result table

表7 方差分析結(jié)果Table 7 Analysis of variance

由R值直觀分析可知，三因素影響順序?yàn)椋篈＞B＞C，經(jīng)方差分析可知，三因素對結(jié)果都具有顯著性影響（P<0.05），結(jié)果與直觀分析一致。綜合分析，景參麥顆粒的最佳制備工藝為A3B3C3，即稀釋劑比例為：麥芽糊精∶乳糖=2∶1，藥輔比為1∶1.5，潤濕劑濃度為95%乙醇。

2.5 工藝驗(yàn)證性試驗(yàn)

依2.4項(xiàng)下最佳成型工藝制備3批樣品，以顆粒成型率及溶化性做為考察指標(biāo)，觀察軟材情況及制粒情況，觀察成品顆粒外觀，結(jié)果見表8，可知軟材黏硬度適中，制成顆粒外觀棕褐色，均勻，硬度適中，溶化性合格，三批顆粒的平均顆粒成型率為91.54%，與正交試驗(yàn)結(jié)果一致，表明本試驗(yàn)成型工藝穩(wěn)定可靠，可用于景參麥顆粒的制備。

表8 驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果Table 8 Validation test results

2.6 薄層色譜鑒別研究

對景參麥顆粒進(jìn)行薄層定性鑒別研究，最終建立了紅景天、人參、白術(shù)三味藥的薄層鑒別項(xiàng)，初步建立景參麥顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.6.1 紅景天的薄層鑒別

紅景天含有多種黃酮苷[3]，《中國藥典》2020年版一部紅景天項(xiàng)下收載了以紅景天苷為對照的鑒別項(xiàng)，參考藥典方法設(shè)計(jì)薄層色譜試驗(yàn)，并對方法進(jìn)行改進(jìn)。取紅景天苷對照品，依藥典方法配置對照品溶液；取3個(gè)批次的景參麥顆粒1.5g、對照藥材0.5g及1.5g按處方制成的陰性對照品，依照藥典方法，配置供試品溶液；照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，分別吸取對照品溶液、對照藥材溶液、3個(gè)批次供試品溶液、陰性對照溶液各7μL，點(diǎn)于硅膠G薄層板，以三氯甲烷∶甲醇∶丙酮∶水=6∶3∶1∶1的下層溶液為展開劑展開，展距為8cm，取出晾干，置碘蒸氣中熏至顯色明顯棕褐色斑點(diǎn)，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照未見明顯干擾。結(jié)果表明，本法具有良好的專屬性，取3批供試品采用本法鑒別重現(xiàn)性良好，可列入景參麥顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文，詳見圖1。

2.6.2 人參的薄層鑒別

人參含有多種人參皂苷、多糖、氨基酸、多肽等多種成分[4]，《中國藥典》2020年版一部人參項(xiàng)下收載了以人參皂苷Rb1、Rg1、Rf、Re為對照的鑒別項(xiàng)，參考藥典方法設(shè)計(jì)薄層色譜試驗(yàn)，并對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行探索。取4種人參皂苷對照品，依藥典方法配置混合對照品溶液；取3個(gè)批次的景參麥顆粒2.5g、對照藥材1g及按處方制成的陰性對照品2.5g，依藥典方法配置供試品溶液；照薄層色譜法（通則0502）吸取對照品溶液及對照藥材溶液1-2μL、3個(gè)批次的供試品溶液3μL、陰性對照溶液1μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=15∶40∶22∶10的10℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開8cm，取出晾干，浸漬于10%硫酸乙醇溶液中，快速取出，吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)顯粉紫色，分別置于日光和紫外燈（365nm）下檢視。結(jié)果顯示，在對照品色譜中，各人參皂苷的斑點(diǎn)顯色明顯，四個(gè)斑點(diǎn)分離清晰，未見重疊，在供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，陰性對照未見明顯干擾，結(jié)果表明，本法具有良好的專屬性，取3批供試品采用本法鑒別重現(xiàn)性良好，可列入景參麥顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文見圖2、3。

2.6.3 白術(shù)的薄層鑒別

白術(shù)含有大量揮發(fā)油，其主要成分為蒼術(shù)酮、蒼術(shù)醇、白術(shù)內(nèi)酯等[5]，《中國藥典》2020年版一部白術(shù)項(xiàng)下收載了以蒼術(shù)酮為對照的鑒別項(xiàng)，參考藥典方法設(shè)計(jì)薄層色譜試驗(yàn)，并對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行探索。取3個(gè)批次的景參麥顆粒1.5g、白術(shù)對照藥材0.5g及按處方制成的陰性對照品1.5g，依藥典方法配置溶液備用；照薄層色譜法（通則0502）吸取各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）∶乙酸乙酯=50∶1為展開劑展開8cm，取出晾干，浸漬于5%香草醛硫酸溶液，快速取出，吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)，并有顯著桃紅色主斑點(diǎn)，即為顯色的蒼術(shù)酮斑點(diǎn)，陰性對照未見明顯干擾，結(jié)果表明，本法具有良好的專屬性，取3批供試品采用本法鑒別重現(xiàn)性良好，可列入景參麥顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文，詳見圖4。

2.7 檢查

2.7.1 外觀性狀檢查

3批顆粒的軟材黏硬度適中，易成型易制粒，顆粒均勻，符合規(guī)定；本品為棕褐色顆粒，氣微，味微甜。

2.7.2 顆粒含水量

對成型顆粒含水量測定，依照2020年版《中國藥典》四部通則0104顆粒劑項(xiàng)要求測定顆粒水分，采用通則0832項(xiàng)下烘干法，平均顆粒含水量為4.70%，符合藥典中藥顆粒劑不超過8%的規(guī)定，結(jié)果見表9。

表9 顆粒含水量結(jié)果Table 9 Particle moisture content result

2.7.3 休止角α的測定

休止角α反映顆粒流動性[6]。采用固定漏斗法[1]，對景參麥顆粒休止角α進(jìn)行測定，將漏斗固定于鐵架臺，使漏斗最底部距離水平桌面垂直距離為3cm，即錐高H=3cm，水平桌面固定坐標(biāo)紙，使顆粒通過漏斗壁緣形成均勻圓錐，直至圓錐體尖端接觸漏斗最下方，測量圓錐底部半徑R，每個(gè)批次顆粒測量三次求平均值，測量3個(gè)批次，結(jié)果見表10。景參麥顆粒平均休止角α為35.03°，表明顆粒流動性良好，易于分裝。休止角α計(jì)算公式為：α=artan（H/R）。

表10 休止角測定結(jié)果Table 10 Measurement results of Angle of repose

2.7.4 顆粒吸濕率

在溫度25℃、濕度75%的恒溫恒濕密閉條件下測定顆粒吸濕率，采用飽和鹽溶液法[7]，即NaCl飽和鹽溶液在25℃密閉條件下平衡48h，即為75%濕度，隨后放入顆粒，計(jì)0時(shí)，通過分析天平精密稱量顆粒總重量，結(jié)果見表11。

表11 顆粒吸濕率結(jié)果Table 11 Results of particle hygroscopicity

3 小結(jié)及討論

本研究開發(fā)了一種輔助提高免疫力的產(chǎn)品，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)法,以顆粒成型率和溶化性為考察指標(biāo)，優(yōu)選其制備工藝為浸膏粉∶麥芽糊精∶乳糖=2∶2∶1，以95%乙醇潤濕，制粒后60℃烘干即得；經(jīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究，薄層色譜可鑒定方中的紅景天、人參、白術(shù)，可列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文；并對景參麥顆粒的外觀性狀、休止角、顆粒吸濕率及顆粒含水量進(jìn)行檢查，皆符合相關(guān)要求。本實(shí)驗(yàn)對該產(chǎn)品的開發(fā)及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了初步探索，實(shí)驗(yàn)所優(yōu)選的工藝參數(shù)可為景參麥顆粒的生產(chǎn)開發(fā)提供參考，該工藝穩(wěn)定合理，質(zhì)量可控，可進(jìn)行進(jìn)一步的開發(fā)和生產(chǎn)。

在薄層色譜鑒別試驗(yàn)中，本文參照2020年版《中國藥典》一部紅景天、人參及白術(shù)的薄層鑒別方法，查閱大量相關(guān)文獻(xiàn)，在此基礎(chǔ)上探索景參麥顆粒鑒定的成熟條件，藥典中紅景天薄層鑒別部分進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，藥典規(guī)定薄層板需展開需18cm，在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，展開時(shí)間過慢、不易出現(xiàn)斑點(diǎn)以及比移值Rf過小無法分離鑒定等問題，經(jīng)試驗(yàn)，將10μL上樣量縮減至7μL，展開距離調(diào)整為8cm，呈現(xiàn)出良好的效果，另外，對于人參及白術(shù)的薄層鑒別，經(jīng)過摸索和微調(diào)實(shí)驗(yàn)條件，確定了適宜本產(chǎn)品的TLC條件。本方法簡便快捷、重現(xiàn)性好，可作為景參麥顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一。

由于方中含皂苷等成分，導(dǎo)致浸膏粉易吸濕變軟、結(jié)塊[8]。稀釋劑麥芽糊精、乳糖可改善浸膏的吸濕性，并且具有較好的矯味作用，不需另添加矯味劑。麥芽糊精溶解性良好，抗吸濕且成本低，乳糖化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，流動性和成型性好，但成本較高[9]。試驗(yàn)考慮生產(chǎn)成本，最終選乳糖、麥芽糊精按一定比例混合作為稀釋劑，結(jié)果呈現(xiàn)良好的顆粒成型率和溶化性；浸膏粉具有一定黏性，較高含水量的潤濕劑和較低比例的稀釋劑易吸濕結(jié)塊[10]，在藥輔比和潤濕劑的篩選中，發(fā)現(xiàn)藥輔比1∶1.5且潤濕劑含水量低時(shí)，顆粒成型率和溶化性最佳；通過正交試驗(yàn)驗(yàn)證及檢查，最終確定了景參麥顆粒的最佳成型工藝，該工藝制得顆粒外觀均勻，成型率高，溶化性、休止角、顆粒含水量等均符合要求，具有簡單方便，操作穩(wěn)定，能較好的應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)，也為其它相似顆粒成型工藝的制備研究提供參考。