伍偉聰，王 淼，陳 英，王彩媚

（廣東省藥品檢驗(yàn)所·國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥用輔料質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510663）

羧甲淀粉鈉具有良好的吸水性和膨脹性，在口服固體制劑中主要作為崩解劑［1-2］。羧甲淀粉鈉的生產(chǎn)工藝國(guó)內(nèi)多采用有機(jī)溶劑法，常以乙醇為溶劑，馬鈴薯淀粉或玉米淀粉作為原料，經(jīng)氫氧化鈉堿化后加入氯乙酸醚化生成羧甲淀粉鈉，然后經(jīng)離心、中和、干燥、粉碎與過(guò)篩等步驟制得成品［3］。其中，氯乙酸屬受管制的危險(xiǎn)化學(xué)品。歐盟《物質(zhì)和混合物分類、標(biāo)簽和包裝法規(guī)》（CLP）將其列為急性毒性類，吸入、皮膚接觸及口服均會(huì)引起中毒，出現(xiàn)呼吸功能、循環(huán)系統(tǒng)或肝腎功能受損等情況［4-5］。世界衛(wèi)生組織（WHO）和美國(guó)飲用水法規(guī)中均對(duì)飲用水中氯乙酸的最高允許濃度作了限定［6］。氯乙酸作為羧甲淀粉鈉生產(chǎn)的起始物料，在成品中存在殘留風(fēng)險(xiǎn)。本研究中采用離子色譜法［7］測(cè)定羧甲淀粉鈉中氯乙酸的殘留量，并以馬來(lái)酸氯苯那敏為模型藥物，考察羧甲淀粉鈉中氯乙酸殘留對(duì)其穩(wěn)定性的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ICS-5000 型離子色譜儀（美國(guó)Dionex 公司）；KF115型恒溫恒濕培養(yǎng)箱（德國(guó)Binder公司）；1100型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；CP225D 型電子分析天平（德國(guó)Sartorius 公司，精度為十萬(wàn)分之一）；M8800H-C型超聲波清洗儀（美國(guó)Bransonic公司）。

1.2 試藥

羧甲淀粉鈉65批（生產(chǎn)企業(yè)18家），其中國(guó)產(chǎn)48批（生產(chǎn)企業(yè)13家），進(jìn)口17批（生產(chǎn)企業(yè)5家）；氯乙酸對(duì)照品（上海麥克林生化科技有限公司，批號(hào)為C10105800，含量為98.0%）；馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100047-201507，含量為99.7%）；磷酸二氫銨、磷酸均為分析純，乙腈為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 氯乙酸含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：AS11-HC 陰離子交換樹(shù)脂柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：10 mmol/ L 氫氧化鉀溶液；流速：1.0 mL/ min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：25 μL；電導(dǎo)檢測(cè)器［7］。

2.1.2 溶液制備

取氯乙酸對(duì)照品適量，精密稱定，用水溶解并稀釋制成每1 mL 含氯乙酸40 μg 的對(duì)照品溶液。取樣品約0.5 g，精密稱定，置50 mL 燒杯中，加水適量使其分散，濾過(guò)，殘?jiān)盟礈?，合并濾液與洗滌液，置25 mL容量瓶中，用水定容，搖勻，濾過(guò)，即得供試品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取2.1.2 項(xiàng)下2 種溶液各適量，按2.1.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置有吸收峰。理論板數(shù)按氯乙酸峰計(jì)應(yīng)不低于3 000，分離度大于1.5，基線分離良好。詳見(jiàn)圖1。

精密度、重復(fù)性試驗(yàn)：按要求進(jìn)行，結(jié)果的RSD均小于2.0%，表明儀器精密度、方法重復(fù)性均良好。

2.1.4 含量測(cè)定

取61 批樣品，按2.1.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品中氯乙酸含量。結(jié)果均有氯乙酸殘留，近20%的樣品氯乙酸殘留超過(guò)0.2%，最高達(dá)1.68%。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，選取8 批（批號(hào)A-H）含不同氯乙酸殘留量的羧甲淀粉鈉樣品，與馬來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)行試驗(yàn)。

2.2 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Fernigen C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫銨11.5 g，加水適量使溶解，加磷酸1 mL，用水稀釋至1 000 mL）-乙腈（80∶20，V/V）；流速：1.0 mL/ min；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL［8］。

2.2.2 供試品制備

取羧甲淀粉鈉樣品（批號(hào)A），定量加入氯乙酸，混合后使供試品含氯乙酸14.0%。分別取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品約8 mg、上述羧甲淀粉鈉供試品約0.6 g［9］，精密稱定，研磨均勻，置稱量瓶中，作為試驗(yàn)用供試品，自編號(hào)為1#～9#；另取2.1.4項(xiàng)下A-H供試品各約0.6 g，作為空白對(duì)照品，自編號(hào)為10#～17#。取上述1#～17#供試品，分別按不同條件（見(jiàn)表1）存放。

2.2.3 溶液制備

稱取表1 中對(duì)照品適量，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容，搖勻，濾過(guò)，即得對(duì)照品溶液。取2.2.2 項(xiàng)下各放置條件下的供試品，加流動(dòng)相溶解，移至100 mL容量瓶中，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）20 min，用流動(dòng)相定容，搖勻，濾過(guò)，即得供試品溶液；取2.2.2項(xiàng)下各放置條件下的空白對(duì)照品，加流動(dòng)相溶解，移至100 mL 容量瓶中，超聲20 min，用流動(dòng)相定容，搖勻，濾過(guò)，即得空白對(duì)照品溶液。

表1 存放條件Tab.1 Storage conditions

2.2.4 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取2.2.3項(xiàng)下3種溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置有吸收峰。理論板數(shù)按馬來(lái)酸氯苯那敏峰計(jì)應(yīng)不低于3 000，分離度大于1.5，基線分離良好。詳見(jiàn)圖2。

精密度、重復(fù)性試驗(yàn)：按要求進(jìn)行，結(jié)果上述試驗(yàn)的RSD均小于2.0%，表明儀器精密度、方法重復(fù)性均良好。

2.2.5 有關(guān)物質(zhì)含量測(cè)定

取2.2.3 項(xiàng)下3 種溶液，按2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，分別測(cè)定對(duì)照品及1#～17#供試品中有關(guān)物質(zhì)含量。結(jié)果見(jiàn)表2。可見(jiàn)，馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品在20 ℃與40 ℃條件下存放均較穩(wěn)定；相同存放條件下，馬來(lái)酸氯苯那敏的降解速率隨羧甲淀粉鈉中氯乙酸含量的增大而提高；氯乙酸含量相同的羧甲淀粉鈉供試品，其放置溫度越高，馬來(lái)酸氯苯那敏的降解速率越快。

表2 有關(guān)物質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果（%）Tab.2 Results of content determination of related substances（%）

3 討論

3.1 羧甲淀粉鈉中氯乙酸的殘留原因

氯乙酸多在強(qiáng)堿條件和一定溫度下與淀粉反應(yīng)，生成羧甲淀粉鈉與氯化鈉，同時(shí)有少量氯乙酸與氫氧化鈉發(fā)生副反應(yīng)，生成乙醇酸鈉與氯化鈉。當(dāng)反應(yīng)不完全時(shí)可能殘留起始物料氯乙酸，反應(yīng)是否完全，一方面與堿液的體積分?jǐn)?shù)相關(guān)，另一方面也與反應(yīng)時(shí)間相關(guān)，通過(guò)工藝參數(shù)優(yōu)化控制，可減少氯乙酸的殘留。

3.2 氯乙酸對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏穩(wěn)定性的影響

由結(jié)果可見(jiàn)，馬來(lái)酸氯苯那敏本身對(duì)熱穩(wěn)定，但與羧甲淀粉鈉混合并按一定條件放置后，在相同放置條件下，隨著羧甲淀粉鈉中氯乙酸含量的增大，馬來(lái)酸氯苯那敏的降解速率加快；當(dāng)羧甲淀粉鈉中氯乙酸含量相當(dāng)時(shí)，放置溫度越高，馬來(lái)酸氯苯那敏的降解速率越快，即在氯乙酸存在的情況下，羧甲淀粉鈉中氯乙酸的量及兩者相容時(shí)的放置溫度均與馬來(lái)酸氯苯那敏的降解速率呈正相關(guān)。提示羧甲淀粉鈉中氯乙酸的殘留量影響馬來(lái)酸氯苯那敏的穩(wěn)定性。

3.3 氯乙酸影響馬來(lái)酸氯苯那敏穩(wěn)定性的原因

氯乙酸結(jié)構(gòu)中，由于氯原子的電負(fù)性較碳原子大，導(dǎo)致C-Cl鍵中碳原子帶部分正電荷，易被帶負(fù)電荷或未共享電子對(duì)等試劑進(jìn)攻發(fā)生親核反應(yīng)［10-11］，而馬來(lái)酸氯苯那敏為常用抗組胺類藥，其分子結(jié)構(gòu)中胺基基團(tuán)的2個(gè)N 正好可提供未共享電子對(duì)，作為親核試劑對(duì)氯乙酸中帶正電荷的碳原子進(jìn)攻，發(fā)生親核取代反應(yīng)，氯原子作為離去基團(tuán)。

3.4 小結(jié)

羧甲淀粉鈉中氯乙酸影響馬來(lái)酸氯苯那敏的穩(wěn)定性，根據(jù)其反應(yīng)機(jī)制推導(dǎo)，具有胺基基團(tuán)的原料藥由于存在未共用電子對(duì)，均存在與氯乙酸發(fā)生親核反應(yīng)的可能，且氯乙酸也可能影響其他帶負(fù)電荷或未共享電子對(duì)的原料藥，因此，該類原料藥物在選擇輔料時(shí)需關(guān)注輔料中殘留的氯乙酸對(duì)其穩(wěn)定性的影響。